生化实验--血糖的测定.pptx

1、血糖的测定,正常人空腹血糖浓度是多少？ 为何能保持恒定？ 糖尿病,正常人空腹血糖浓度(fasting plasma glucose,FPG)为 3.89-6.11 mmol/L。,血糖如何维持稳定？关键酶调节关键酶如何调节：激素调节。 常见的升高血糖的激素：胰高血糖素、糖皮质激素和肾上腺素。 降低血糖的激素：胰岛素,对糖代谢的调节：胰岛素促进组织、细胞对葡萄糖的摄取和利用，加速葡萄糖合成为糖原，贮存于肝和肌肉中，并抑制糖异生，促进葡萄糖转变为脂肪酸，贮存于脂肪组织，导致血糖水平下降。胰岛素缺乏时，血糖浓度升高，如超过肾糖阈，尿中将出现糖，引起糖尿病。,胰岛素是促进合成代谢、调节血糖稳定的主要激

2、素,如果调节失衡，结果是什么？高血糖或者低血糖。 低血糖：生理性和病理性。低于2.8 mmol/L。,高血糖：生理性和病理性。高于7.1 mmol/L。高于8.89 mmol/L，出现糖尿。最常见病理性高血糖：糖尿病。 糖尿病：高血糖和糖尿。临床特点：三多一少。病因：胰岛素分泌缺陷和胰岛素受体缺陷。 糖尿病诊断标准？,糖尿病（diabetes）是由遗传因素、免疫功能紊乱、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等等各种致病因子作用于机体导致胰岛功能减退、胰岛素抵抗等而引发的糖、蛋白质、脂肪、水和电解质等一系列代谢紊乱综合征，临床上以高血糖为主要特点，典型病例可出现多尿、多饮、多食、消瘦等表现，

3、即“三多一少”症状，糖尿病（血糖）一旦控制不好会引发并发症，导致肾、眼、足等部位的衰竭病变，且无法治愈。,糖尿病的类型,型糖尿病 又叫青年发病型糖尿病或胰岛素依耐型糖尿病。 原因：胰腺产生胰岛素的细胞已经彻底损坏,从而完全失去了产生胰岛素的功能. 治疗：依赖胰岛素治疗。,型糖尿病 又叫非胰岛素依耐型糖尿病。 原因：自身能够产生胰岛素，但细胞无法对其作出反应，使胰岛素无法发挥作用。 治疗：需要胰岛素单独或与口服药联合应用的治疗,一般正常人进食后血糖都会暂时性升高，进食后30分种或60分种可升到最高峰，但血糖一般不超过8.9 mmol/L；进食2小时后又会回到空腹水平，这就是人体对糖的耐受现象。

4、什么是口服葡萄糖耐量试验（Oral glucose tolerance test， OGTT）？ 有何临床意义？,口服葡萄糖耐量试验（Oral glucose tolerance test， OGTT）是一种口服葡萄糖负荷试验，用以了解人体对进食葡萄糖后的血糖调节能力。 通过OGTT试验，可以早期发现糖代谢异常，早期诊断糖尿病(Diabetes Mellitus, DM) ，是一种简单、快捷的诊断方法。,实验前三天，受试者每日食物中糖含量不应低于150g，且维持正常活动，影响试验的药物应在三天前停用，受试前应空腹10-15h。 空腹取血后，5分钟内饮入250ml含75g无水葡萄糖的糖水，妊娠妇

5、女用量为100g，儿童按1.75g/kg体重给予,不超过75g。 服糖后半小时，1小时，2小时，3小时各抽血一次，作血糖定量检测。于采血同时，每隔1小时留取尿液作尿糖试验，整个过程不可吸烟，喝咖啡，喝茶或进食。,OGTT方法：WTO标准化,测试前禁食10-16小时，清晨空腹进行。空腹抽静脉血，测空腹静脉血浆葡萄糖，然后成人口服75 g无水葡萄糖，溶于250 ml水中，510分钟内饮完。饮后2小时抽静脉血，测静脉血浆葡萄糖。,IFG 与 IGT,空腹血糖损伤(Impaired Fasting Glucose, IFG)：空腹血糖6.1mmol/L,但7.0mmol/L 糖耐量受损(Impaire

6、d Glucose Tolerance, IGT)：餐后2h血糖7.8mmol/L,但11.1mmol/L,IFG 和IGT可以说是一种正常人向糖尿病的过渡状态，这部分人虽然现在还不是糖尿病， 但是将来发生2型糖尿病的危险性非常高，可以说是糖尿病的后备军。据有关研究报道，每年5-8%的IGT者将发展成为2型糖尿病。,无糖尿病史，空腹或者随机血糖异常 无糖尿病史，有一过性或持续性糖尿 无糖尿病史，有明显糖尿病家族史 有糖尿病症状，但空腹或者随机血糖不够标准 分娩巨大胎儿的妇女和有巨大胎儿史的个体 不明原因肾病和视网膜病 妊娠期、甲亢、感染期出现糖尿者,OGTT的适应症,血糖测定方法,无机化学法：

7、如Folin-Wu法 有机化学法：如邻甲苯胺法 酶法：己糖激酶法， 酶法：葡萄糖氧化酶法,原理葡萄糖在和碱性铜试剂混合加热后，可使 Cu2+还原成Cu+ ，后者与磷钼酸试剂作用生成蓝色的钼蓝。通过比色法测定蓝色化合物，计算出血糖的含量 稳定、准确、但对葡萄糖无特异性，受血中非糖还原物质的影响。 空腹正常血糖参考值 4.46.7mmol/L或80-120mg/dL,无机化学法：Folin-Wu法,有机化学法：邻甲苯胺法,原理： 葡萄糖为一含醛基的已糖，在酸性条件下加热，可脱水生成5-羟甲基-2-呋喃甲醛，后者与邻甲苯胺缩合成青色的Schiff碱。 Schiff碱颜色的深浅与样品中葡萄糖的含量成正

8、比。 评价：操作简便，由于邻甲苯胺只与醛糖作用而显色，故此种测定法不受血液中其他还原物质的干扰，测定时也无需去除血浆或血清中的蛋白质，因此该实验的特异性较高。,酶法：己糖激酶法（Hexokinase, HK）,原理：,NADPH在340nm有吸收峰，其吸光度增加与标本中的葡萄糖浓度成正比。,评价： 本法特异性高，灵敏度高，干扰因素少，适用于自动化分析，为葡萄糖测定的参考方法，但是试剂较贵。,酶法：葡萄糖氧化酶法（glucose oxidase, GOD）,葡萄糖氧化酶(glucose oxidase，GOD)利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。 过氧化氢在过氧化物酶 (perox

9、idase，POD)作用下，分解为水和氧的同时将无色的4-氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合物。 红色的深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比，在510nm波长处测定吸光度，与标准管比较可计算出血糖的浓度。,葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法原理,（1）葡萄糖O2H2O,葡萄糖氧化酶（GOD）,（2）H2O24-氨基安替吡啉苯酚,葡萄糖酸H2O2,H2O 红色醌式物质,过氧化物酶 （POD）,Trinder反应,505nm,光吸收法测定,相对血糖浓度,实验试剂,0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0) 酶试剂 取过氧化物酶12000U，葡萄糖氧化酶1200U，4-氨基安替比林10mg，叠氮化钠1

10、00mg，溶于磷酸缓冲液80ml中，定容至100ml，置4保存 酚溶液 称取重蒸馏酚100mg溶于蒸馏水100ml中，用棕色瓶贮存。 酶酚混合试剂 将酶试剂和酚试剂等量混合，4 下可存放1个月。 葡萄糖标准工作液：5mmol/L,实验操作,混匀，置 37 水浴保温 15分钟，每管加蒸馏水0.5 ml，在510nm波长处比色，以空白管（B管）调零，读取各管吸光度。根据各管吸光度计算其血糖浓度。,葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液的葡萄糖含量，但不能直接测定尿液葡萄糖含量。这是因为尿液中的尿酸等干扰物质浓度过高，可干扰过氧化物酶反应，造成结果假性偏低。 对于血液样品需及时分离红细胞。因为红细胞的酵解将

11、会导致测定结果偏低。建议测定样品以草酸钾-氟化钠为抗凝剂以抑制糖酵解。,注意事项,严重黄疸、溶血及乳糜样血清先制备无蛋白血滤液，然后在进行测定。 酶酚混合液一般现用现配。 葡萄糖氧化酶对 - D 葡萄糖高度特异，溶液中的葡萄糖约 36% 为 型， 64% 为 型。葡萄糖的完全氧化需要 型到 型的变旋反应。葡萄糖变旋酶，可加速这一反应，延长孵育时间可达到完成自发变旋过程。新配制的葡萄糖标准液主要是 型，故须放置 2h 以上 ( 最好过夜 ) ，待变旋平衡后方可应用。,注意事项,计算：,葡萄糖标准液：5 mmol/L 血清葡萄糖（mmol/L）=AT/AS CS,参考值：,3.96.1 mmol/L,不同检测方法所提供的空腹正常血糖参考值存在差异。 葡萄糖氧化酶法：3.96.1mmol/L Folin-Wu法：4.46.7mmol/L 邻-甲苯胺法：3.96.1mmol/L,本法测定葡萄糖非常特异，从原理反应式中可知第一步是特异反应，第二步特异性较差。误差往往发生在反应的第二步。一些还原性物质如尿酸、维生素 C 、胆红素和谷胱甘肽等，可与色原性物质竞争过氧化氢，从而消耗反应过程中所产生的过氧化氢，产生竞争性抑制，使测定结果偏低。但是对测定结果无显著影响。,实验误差分析：,葡萄糖氧化酶法：该法特异性高，反应条件温和，能反映