肠胃舒胶囊等种中成药微生物.ppt

1、肠胃舒胶囊等6种中成药微生物限度检查法验证实验总结,一目的,香港仁奇诊所：受你诊所的委托，我所抗生素室对肠胃舒胶囊等6种中成药微生物限度检测，并对其进行方法学验证，归纳总结如下：,二样品,骨络通酒011362北京北卫药业有限公司、化瘤胶囊302107北京北卫药业有限公司、肾宁丸21006北京北卫药业有限公司、消渴丸0201960北京北卫药业有限公司、肠胃舒胶囊030610北京北卫药业有限公司、防癌胶囊100210北京北卫药业有限公司,三菌种,枯草杆菌63501、金黄色葡萄球菌26003、大肠杆菌44102、白色念珠菌98001、黑曲霉98003、沙门氏菌50094。,四方法,中国药典2000版

2、与2019版微生物限度检查法方法验证的比较实验。,五方法验证：,（一）菌液制备,1取经37培养18-24小时，金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草杆菌肉汤培养物1ml+9ml盐水10倍稀释至10-5 10-7为50100个/ml，做活菌计数备用。 2取经25 培养1824小时的白色念珠菌霉菌液体培养物1ml+9 ml盐水10倍稀释至10-5 10-7为50100个/ml，做活菌计数备用。 3取经25 培养1周的黑曲霉斜面培养物，加35ml盐水洗下霉菌孢子，吸取出菌液，用标准比浊管比浊，与浊度相当后，取1 ml +9 ml盐水=10-1，逐管10倍稀释为10- 4约50100个/ ml，做活菌计数备用

3、。,（二）供试液制备,称取各品种样品10 g，加0.1%胨水氯化钠稀释液100 ml浓度均为1：10供试液，分别人工污染上述5种试验菌株。,（三）培养基稀释法,采用加0.5 ml、0.2 ml、0.1 ml /皿供试液，再加1520 ml琼脂培养基，待凝固后，置规定温度培养2448小时观察结果，细菌计数，测定回收率。,（四）离心集菌薄膜过滤法,分别取不同品种的1：10供试液10 ml，移至灭菌的离心管中，以500转/分5分种后，取上清液1 ml，加入薄膜过滤器中，采用0.1%蛋白胨氯化钠冲洗液300ml/膜，再加规定菌株冲洗后，取膜贴于琼脂平板，置规定温度培养2472小时观察结果,（五）回收率

4、测定：,1) 试验组,分别取不同品种的1：10供试液1 ml、50100个/ ml 试验菌株，同时加入平皿中，立即倾注琼脂培养基，待凝固后，置规定温度培养2472小时观察结果。薄膜过滤法以最后一次的冲洗液加入试验菌。,2) 活菌组,测定每一菌株加的试验菌数,3) 供试液对照,测定供试品本底菌数,4) 稀释剂对照组,四结果见表1.2.3.,表1结果可见,1.采用常规方法检验个品种，人工污染5株代表菌株，其中化瘤胶囊、肾宁丸，个品种供试品的回收率均高于70%，经方法学验证，无抗菌活性，可采用常规方法检验。 2有3个品种对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌有不同程度的抗菌活性，肠胃舒胶囊、骨络通酒、消渴丸3个

5、品种供试品回收率为166.6%，有明显的抗菌活性。此外防癌胶囊对大肠杆菌的回收率为 35.4%低于70%，有抗菌作用，不可采用常规方法，可采用适宜方法进行检验,3采用培养基稀释法,测定上述含抑菌成份的中成药微生物限度验证试验，结果见表2.3。,其回收率显示，骨络通酒、消渴丸稀释0.5ml/皿对金黄色葡萄球菌和枯草杆菌回收率均超过70%，可用此法测定。防癌胶囊对枯草杆菌回收率超过70%，而对大肠杆菌回收率低于70%，稀释至0.2ml/皿对大肠杆菌回收率超过70%，可采用稀释法0.2ml/皿测定。胃肠舒胶囊对枯草杆菌采用稀释法0.2ml/皿，仍不可除去其抗菌成分，应采用薄膜过滤法进行测定。,表2结

6、果证明,采用培养基稀释法，人工污染金黄色葡萄球菌、枯草杆菌可消除抗菌作用。 回收率达到70%以上的骨络通酒、消渴丸可采用培养基稀释法（0.5ml/皿）检验。其中肠胃舒胶囊对金黄色葡萄球菌回收率低于70%，防癌胶囊对大肠埃希菌回收率低于70%，故应降低稀释度（0.1、0.2ml/皿），进行检验。,培养基稀释法和薄膜过滤法回收率结果 表3,表3结果证明,采用培养基稀释法0.2 ml /皿，人工污染大肠埃希菌，防癌胶囊回收率达到70%以上；人工污染金黄色葡萄球菌，肠胃舒胶囊回收率达到70%以上，而对枯草杆菌回收率62.0%，仍不可消除抗菌作用，采用薄膜过滤法进行测定，回收率为100 %。,五、结论,通过方法学验证实验证明，上述6个品种中，肾宁丸、化瘤胶囊可采用常规方法检验；骨络通酒、消渴丸采用稀释法（0.5ml/皿）；防癌胶囊