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1、ICS11.220B 41DB37山东省地方标准DB37/T 40032020中和试验和ELISA试验比对实验室评价标准2020 - 06 - 08发布2020 - 07 - 08实施山东省市场监督管理局发布DB37/T 40032020前言本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。本标准由青岛海关提出、归口并组织实施。本标准起草单位：青岛海关技术中心。本标准主要起草人：郑小龙、王群、姜帆、徐彪、朱来华。2中和试验和ELISA试验比对实验室评价标准1 范围本标准规定了中和试验和ELISA试验比对实验室评价工作应遵循的基本技术要求。本标准适用于动物检疫、兽医实验室以ELISA试验替代中和

2、试验进行抗体滴度的测定。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。OIE陆生动物诊断试验与疫苗手册3 试剂3.1 培养液：根据不同细胞选择适合的培养液。3.2 胎牛血清。3.3 标准毒株、阳性血清、阴性血清。3.4 敏感细胞系：根据不同病毒选择适合的细胞。3.5 青霉素。3.6 链霉素。3.7 ELISA试剂盒。4 器材和设备4.1 96孔细胞培养板。4.2 二氧化碳培养箱。4.3 普通冰箱和超低温冰箱。4.4 可调移液器。4.5 细胞培养瓶。4.6 酶标仪。4

3、.7 洗板机。5 评价总则5.1 应在最佳条件下进行比对试验，即在同一实验室，由同一批检测人员严格按照标准方法和试剂盒操作要求进行评价。5.2 对已知阳性血清同时用中和试验和ELISA试验进行检测，对检测结果进行比对，确定不同抗体滴度对应的ELISA数值范围。6 实验室评价6.1 取已知阳性血清样品进行中和试验，测定其抗体滴度。具体操作按照OIE陆生动物诊断试验与疫苗手册进行。6.2 对已知阳性血清进行稀释，以获得抗体滴度分别为1:2，1:4，1:8，1:16，1:32，1:64的血清样品。6.3 将每个滴度的已知阳性血清样品按照ELISA试剂盒说明书进行检测，测定其OD值，并根据说明书计算最终数值。6.4 将已知阳性血清的抗体滴度与ELISA结果进行比对，确定各滴度的已知阳性血清对应的ELISA数值的范围，并标定阳性对照血清的抗体滴度。6.5 根据ELISA阳性对照血清的数值及每个滴

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