高效液相色谱系统.ppt

1、高效液相色谱系统,液相色谱培训（二）,液相色谱流程图,高压泵,进样器,检测器,色谱工作站,色谱柱,储液瓶,一个存放流动相的容器。其结构材料必须对流动相是化学惰性的，常用的溶剂储液瓶的材料应耐腐蚀，可为玻璃、不锈钢、氟塑料、特种塑料聚醚醚酮(PEEK)或聚四氟乙烯衬里不锈钢容器等，贮液罐容积一般为0.52 L,储液瓶,输液系统功能： 溶剂输送,目标： 稳定 准确,重要指标： 耐压能力 压力脉动 流量精密度 流量准确性,高压输液泵,各品牌输液泵的基本参数,进样器,隔膜进样 停留进样 阀进样 自动进样,进样器,对进样器的要求 密封性好 死体积小 重复性好 保证中心进样 进样时对色谱系统的压力、流量影

2、响小,进样器原理六通阀,手动进样器六通阀,一般HPLC分析常用六通进样阀（以美国Rheodyne公司的7725和7725i型最常见），其关键部件由圆形密封垫（转子）和固定底座（定子）组成。耐高压（3540MPa），进样量准确，重复性好，操作方便,分离系统功能： 组分分离,目标： 分辨力强 效率高,色谱柱,液相色谱柱是高效液相色谱仪的核心部分，是分析好坏、成败的关键,键合相色谱柱,键合相: 反相: 70%; C18, 65%; C8, 15%; 苯基柱 5%, 正相: 20%; 硅胶、 -NH2、 -CN、-OH 其它 (手性柱, 离子交换柱): 10% 反相色谱是目前应用得最为广泛的高效液相色

3、谱方法。 C18 和 C8 在反相色谱中应用得最为广泛。,检测器,功能： 检测组分浓度,目标： 准确 检出限低,重要指标： 噪声、漂移、线性、检出限,紫外检测器（包括二极管阵列检测器） 荧光检测器 示差折光检测器 电导检测器 蒸发光散射检测器,原理：基于被分析组分对特定波长紫外光的选择性吸收 定量基础：朗伯-比耳定律，AKCL 优点： 1）灵敏度高 2）对温度和流速不敏感 3）可用于梯度洗提 缺点：仅适用于测定有紫外吸收的物质,紫外检测器,样品池,二极管阵列,光栅,D2 / W 灯,每一组分可在每一波长处得到一吸光度值,二极管阵列检测器,二极管阵列检测器,1）采集三维谱图 2）峰纯度检验 3）

4、光谱库检索 4）可以发现单波长检测时未测到的峰,二极管阵列检测器的优点,大多数有机化合物有一定程度的吸光度，所以紫外-可见检测器可以测定大多数的化合物，是目前实验室中使用最多的检测器 -多数公司售出的检测器中75%以上是吸光度检测器（其中50%以上是紫外-可见检测器，25%是PDA）,紫外-可见检测器,原理：基于被分析组分发射的荧光强度进行检测 优点： 1）灵敏度极高，是最灵敏的检测器之一 2）选择性好 3）对温度和流速不敏感，可用于梯度洗脱 缺点：仅适用于测定可产生荧光的物质 可检测物质：多环芳烃、霉菌毒素、酪氨酸、色氨酸、卟啉、儿茶酚氨等（具有对称共轭体系）,荧光检测器,原理：连续测定流通

5、池中溶液折射率来测定试样中各组分浓度。 优点：通用型检测器， 缺点： 1）对温度变化敏感 2）对溶剂组成变化敏感，不能用于梯度检测 3）属于中等灵敏度的检测器,示差折光检测器,原理：根据物质在某些介质中电离后所产生的电导变化来测定电离物质含量。广泛应用于离子色谱法 优点：对流动相流速和压力的改变不敏感，可用于梯度洗脱 缺点：对温度变化敏感（每升高1度，电导率增加2%-2.5%) 主要用于离子色谱检测水溶性无机和有机离子,电导检测器,蒸发激光光散射检测器（ELSD）,通用型检测器（适合于挥发性比流动相低的任何组分）；响应值与组分质量有关；可用于梯度洗脱,工作站,数据采集系统 功能： 采集处理数据

6、,目标： 使用便捷 功能完善,梯度洗脱,HPLC有等强度(isocratic)和梯度(gradient)洗脱两种方式 等度洗脱是在同一分析周期内流动相组成保持恒定，适合于组分数目较少，性质差别不大的样品 梯度洗脱是在一个分析周期内程序控制流动相的组成，如溶剂的极性、离子强度和pH值等，用于分析组分数目多、性质差异较大的复杂样品,梯度洗脱,梯度洗脱的特点,优点 缩短分析时间 增加分离能力 提高检测灵敏度 缺点 仪器设备要求高 不适合某些检测方式(RI) 柱需再生平衡 定量分析的重复性较低,梯度洗脱注意的问题,注意溶剂的互溶性，不相混溶的溶剂不能用作梯度洗脱的流动相 所用的溶剂纯度要求高 所用的溶

7、剂要彻底脱气，防止混合时产生气泡 混合溶剂的黏度常随组成而变化，因而在梯度洗脱时常出现压力变化 每次梯度洗脱后必须对色谱柱进行再生处理，使其恢复初始状态,高效液相色谱的配件,管路与连接件 脱气装置：在线脱气机或超声波清洗器 过滤器：溶剂过滤器和针筒式过滤器 进样器：平头进样器,不同材质的管路,不锈钢管：耐腐蚀性好，有精密的同轴度，一般用于高压部分 聚合物管：用在液相色谱系统中从储液瓶到泵、检测器出口以后和进样器排液口等低压部分 PEEK（聚醚醚酮）管：是一种耐高温、高性能的工程塑料，具有良好的惰性，适宜于生物样品的分离分析,液路连接件,连接件也称接头 一般可分为两种：高压接头和低压接头 高压接

8、头采用不锈钢材质 低压接头采用高聚物材质 连接件主要有卡套和空心螺钉,液路连接密封示意图,液路连接装配不合适的示意图,脱气装置,超声波清洗器 通过超声波作用使流动相中的气泡排除，超声脱气效率只有2030左右 在线脱气机 脱气效果好，脱气效率大于70，在线脱气机使用方便、省事，尤其是在作梯度洗脱时最好用在线脱气机。,过滤装置,溶剂过滤器 为了除去流动相中的杂质，对流动相进行过滤 溶剂过滤器要配滤膜（有机系和水系，规格0.45m或更小孔径的滤膜） 针筒式过滤器 样品溶液在进入色谱系统前必须经过针筒式过滤器 针筒式过滤器也分为有机系和水系，规格0.45m或更小孔径的,进样器,液相色谱的进样器必须是平

9、头进样器 常配的进样器规格为10、25、50、100 L 最常使用的为50 L和100 L的进样器,LC-5500和LC-5510高效液相色谱仪介绍,LC-5500高效液相色谱仪,LC-5500高压输液泵,P-101型高压液相平流泵由泵体、过滤器、缓冲器、步进电机、步进电机驱动器、控制电路板、键盘以及液晶显示器等部件构成,LC-5500高压输液泵,技术指标 工作压力：040MPa 流量范围：0.015.0mL/min 流量准确性：1 流量精密度： 0.5 压力脉动： 1,LC-5500高压输液泵,主要特点 采用双柱塞交替输液吸液，特殊设计的非圆凸轮运动曲线，保证输出液体流速稳定 精密电机及电路

10、设计，实现流量控制和流速的稳定性 压力传感器避免了过压对色谱柱和泵的意外损害 性能良好的阻尼器有效消除了输液脉冲 采用LCD带背光的显示屏来显示泵的设置参数和运行参数。 梯度洗脱流量程序智能化，流量准确,LC-5500高效液相色谱仪主机,主机包括两部分： 柱温箱 紫外-可见光检测器,LC-5500柱温箱,技术指标： 温度控制范围：室温1080 温度控制精度：1 功能特点： 控温精度准确 更换色谱柱方便 分析结果重现性好 保证检测稳定性,LC-5500紫外-可见光检测器,技术指标： 波长范围：190650nm 波长精度: 2nm 波长重复性:优于2nm 基线噪声：110-4AU 基线漂移：510

11、-4AU/h 光谱带宽：8nm 流通池体积：5ul 最小检测浓度：410-8g/mL (萘的甲醇溶液),LC-5500紫外-可见光检测器,功能特点： 使用波长范围宽 波长精度准确 能够实现多波长测定,LC-5500工作站,功能特点： 具有仪器控制系统、数据采集和处理系统； 可进行波长程序控制 可设定柱温 可对两台泵进行程序控制，进行梯度洗脱,LC-5510高效液相色谱仪,LC-5510 在线脱气机,在线脱气机主要由真空泵、脱气膜管、传感器、控制电路、真空腔等组成 在线脱气机的主要目的是脱除流动相中的气泡,LC-5510高压输液泵,技术指标 工作压力：042MPa 流量范围：0.015.0mL/

12、min 流量准确性：1 流量精密度： 0.5 压力脉动： 1,LC-5100高压输液泵,主要特点 采用双柱塞交替输液吸液，特殊设计的非圆凸轮运动曲线，保证输出液体流速稳定 精密电机及电路设计，实现流量控制和流速的稳定性 压力传感器避免了过压对色谱柱和泵的意外损害 性能良好的阻尼器有效消除了输液脉冲 采用LCD带背光的显示屏来显示泵的设置参数和运行参数。 梯度洗脱流量程序智能化，流量准确,LC-5510柱温箱,技术指标： 温度控制范围：580 温度控制精度：0.2 温度设定值误差： 0.5,LC-5510柱温箱,功能特点： 控温精度准确 分析结果重现性好 保证检测稳定性 采用LCD带背光的显示屏来显示柱温的设置和运行温度 既可升温也可降温，能满足一些特殊用户的需求,LC-5510紫外-可见光检测器,技术指标： 波长范围：190650nm 波长精度: 0.2nm 波长重复性:优于0.2nm 基线噪声：610-5AU（动态，254nm） 基线漂移：2.510-4AU/h（动态，254nm） 光谱带宽：8nm 流通池体积：5ul