尿液干化学检查.ppt

1、尿液干化学及沉渣镜检,原理、影响因素和临床意义,一尿干化学概述,1956年美国人发明了以葡萄糖氧化酶和过氧化物酶为基础检测葡萄糖的第一条“浸入即读”的干化学试纸。发展到今天已经成为一次可以测十几个项目的多联试纸带。检测手段也由目测发展到半自动、全自动。具有快速、简便、用量少的优点，但是同时也存在着影响因素多，检测不精确等缺点。,一、尿液酸碱度PH,原理:采用酸碱指示剂法。尿中pH可使试纸测定区中的甲基红和溴麝香草酚蓝两种指示剂发生颜色改变,可表达pH5（黄色）pH7（绿色）pH9（蓝色）的变色范围。参考范围PH4.5-8.0（随机尿） 方法学评价:尿标本必须新鲜,时间过长的尿液可滋生细菌,如变

2、形杆菌等,可分解尿素产生氨,使尿液变碱;含过多碳酸氢盐时并放置时间过久也可导致挥发,使酸度增高。测定具有一定的局限性:结果间隔大,每级间隔0.5；测定范围小，从pH5pH9,不适宜精确测定尿的酸碱度。但因携带方便,无需设备,检查方便且便于实现自动化,适合于过筛试验。,二、尿比重SG,原理:采用多聚电解质离子解离法。高分子电解质甲基乙烯基醚和顺丁烯二酸的共聚体是弱酸性(COOH基)离子交换体，而尿中含有以Nacl为主的电解质,在水中解离为Na+和cl-,可与离子交换体中的氢离子(H+)置换,在水溶液中放出H+。随着尿液中不断增加的H+浓度,使得指示剂溴麝香草酚蓝的颜色发生改变。 参考范围：1.0

3、15-1.025 方法学评价:其优点是不受高浓度的葡萄糖、尿素、放射造影剂的影响，该方法灵敏度略低,只能按0.005的梯度色阶表达结果,精密度差,测试范围窄,并且受强酸强碱性尿和高蛋白质尿的影响,不适宜小儿及肾脏浓缩稀释功能严重减低者使用。不能作为评价肾功能变化的指标。,三、尿蛋白PRO,原理:采用PH 指示剂蛋白质误差的原理。在一定条件下（3.2时),由于蛋白质离子对带相反电荷指示剂(溴酚蓝）离子吸引而造成溶液中指示剂进一步电离, 当超越缓冲范围时，可使指示剂改变颜色。 方法学评价:对清蛋白的敏感性明显高于球蛋白，不与血红蛋白，本周蛋白和黏蛋白反应,因此阴性的结果并不能排除这些蛋白质的存在。

4、对清蛋白测定的敏感性约在0.150.30g/L。混浊尿不影响测定结果和判断,但肉眼血尿、血红蛋白尿、黄疸尿等显著异常的尿色会影响到对结果的判别。该试验方法对标本的酸碱性非常敏感。强酸性(pH9),前者导致假阴性后者导致假阳性。含高浓度青霉素，庆大霉素、磺胺、含碘造影剂导致假阴性。如服用奎宁和嘧啶等药物时,尿液可呈强碱性,超出了试剂带本身的缓冲能力,可造成干化学法假阳性。含非那吡啶、聚乙烯吡咯酮、有机碘造影剂的尿样、被某些清洁剂和消毒剂污染的尿标本会出现假阳性。,四、葡萄糖GLU,原理:采用葡萄糖-过氧化酶法。尿中葡萄糖在试纸上的葡萄糖氧化酶催化下,与O2生成葡萄糖酸内脂和过氧化氢,试纸上的过氧

5、化物酶进一步将过氧化氢分解为水并放出新生态氧使色素原氧化产生颜色的变化，颜色深浅与葡萄糖浓度成正比。 方法学评价:葡萄糖氧化酶法具有特异性强,灵敏度高(1.672.78mmol/L)。适用于常规及过筛检查尿中的葡萄糖。而对乳糖、半乳糖、果糖等其他还原糖不发生反应。高比重尿液可使尿葡萄糖反应性减低。低糖高维C时，维C与试剂发生竞争性抑制反应,造成假阴性,如果使用了大剂量维生素治疗,5h内最好不要做尿糖检查。尿酮体过高500ml/L,尿液搁置时间过长，细菌分解也会引起假阴性。一些强氧化性物质（漂白粉、次亚氯酸等）或尿比重过低时，会导致假阳性。,五、尿酮体KET,原理:采用亚硝基铁氰化钠法。尿中的丙

6、酮或乙酰乙酸与试纸上的亚硝基铁氰化钠反应,产生浅紫色到深紫色变化。 方法学评价:对乙酰乙酸的灵敏度为100ml/L,对丙酮的灵敏度为700ml/L,与B-羟丁酸不反应。早期酮症排出的B羟丁酸占酮体总量的78%,因而对早期酮症检出不敏感。由于丙酮和乙酰乙酸具有挥发性,故标本应新鲜,最好在采集后30内测定。肉眼血尿等有明显颜色变异的尿和含大量左旋多巴代谢物、肌酐、肌酸的标本可出现假阳性。,六、胆红素BIL,原理:以偶氮反应为基本原理。在强酸介质中胆红素与重氮盐发生偶联反应,生成红色偶氮化合物。 方法学评价:过量的维c和亚硝酸盐可抑制偶氮反应而呈假阴性,而大量的氯丙嗪和高浓度的盐酸苯偶氮吡啶的代谢产

7、物在酸性条件下会呈假阳性反应。尿标本保存不当，尿胆红素遇光分解。,七、尿胆原URO,原理:采用改良Ehrlich醛反应法。在强酸性条件下,尿胆原与试纸中二氯苯胺重氮盐产生偶联反应,生成樱红色缩合物,试剂模块发生黄色到红色的改变。 方法学评价:尿胆原排出后很容易氧化为尿胆素,故应尽快测定。应用大量抗生素、维生素和尿中含有高浓度亚硝酸盐或甲醛时容易抑制试验,出现假阴性结果。使用氯噻嗪类、非那吡啶类、对-氨基硫酸和磺胺等药物时,可出现假阳性。,八、亚硝酸盐NIT,原理:采用亚硝酸盐还原法。尿中含有的亚硝酸盐在酸性环境中先与对氨基苯磺酸反应,形成重氮盐,再与-萘胺结合而产生粉红色偶氮化合物。 方法学评

8、价:尿液必须新鲜,无外界污染,最好用晨尿或在膀胱中潴留4h以上的尿液。出现阳性结果意味着尿液中细菌数量在10万/ml以上。阴性结果并不表明尿液中无细菌,可能为非硝酸盐还原性细菌引起的尿道感染;也可能为尿液在膀胱中潴留不足4h或饮食中缺乏硝酸盐等情况。高比密尿液或含有大量维c的标本可减低反应的敏感性。,九、血红蛋白BLD,原理:采用红细胞类过氧化物酶法。血红蛋白中的亚铁血红素具有过氧化物酶样作用,可以催化过氧化氢放出新生态氧,进一步氧化指示剂而产生颜色变化。 方法学评价:高浓度维c对试验有抑制作用,导致结果偏低或假阴性;浓缩尿或高蛋白尿也可减低反应的敏感性。清洗剂如次氯酸盐和尿道中细菌产生的过氧

9、化氢酶可能引起假阳性结果。试纸法可检出微量血红蛋白和破坏的红细胞,而镜检法可能为“阴性”。结果配合显微镜检查结果,并结合临床资料进行分析,更有价值。,十、白细胞LEU,原理:采用粒细胞酯酶法。中性粒细胞特异性地含有一种酯酶,而这种酯酶在红细胞、淋巴细胞、血小板、血清、肾脏及上皮细胞中均不存在。试纸反应基质是吲哚酚酯,在酯酶作用下将其转变为吲哚酚,再与重氮盐发生反应,形成紫色缩合物。 方法学评价:该试验仅与尿液中的粒细胞反应,既可与完整的粒细胞反应,也可与脓细胞反应以及破坏后的粒细胞所释放出的酯酶成分反应。当尿中出现以淋巴细胞或单核细胞为主的白细胞时,可呈阴性。尿中白细胞少于1025/ul;尿中

10、出现过高的葡萄糖、蛋白质或高比重尿会造成反应的敏感性减低或出现假阴性。尿中的先锋霉素类药物、乙哚酸、高浓度草酸、四环素等药物都可使反应的敏感性减低或出现假阴性。 尿标本被阴道分泌物污染，或者尿中污染甲醛、在酸性尿环境中呈红色或深色的药物、食物。,十一、维生素C,维C具有1,2-烯二醇还原性基团，在酸性条件下将氧化态粉红色的2,6二氯酚靛酚还原为无色的2,6-二氯二对酚胺。颜色由绿或深蓝至粉红。 主要对隐血（90mg/L） 胆红素（ 250mg/L ） 亚硝酸盐（ 250mg/L ） 葡萄糖（ 500mg/L ） 也会使白细胞检测产生假阴性,临床意义,目前尿液干化学分析一般都可同时获得十几项参数

11、的结果。可以将某些项目进行简单组合,用于快速分析患者的尿检情况,并根据出现阳性结果的具体内容,初步判别患者的疾病情况。,比重、蛋白质、红细胞、白细胞,一般会涉及泌尿系统、循环系统的疾病,这些项目中的一项或多项结果出现阳性,特别是蛋白质和红细胞同时出现阳性时,常见于一些与肾脏疾病有关的病理改变。如各种急慢性肾小球肾炎、肾盂肾炎、各种病因造成的肾损伤、泌尿系肿瘤、结核，还可能与多发性骨髓瘤、自身免疫病、溶血疾病、高热、中毒等有关。,白细胞、红细胞、亚硝酸盐,主要涉及泌尿生殖系统的疾病。当白细胞或红细胞出现阳性结果,或者亚硝酸出现阳性时,一般与泌尿系统感染及邻近器官疾病有关。比如膀胱炎、肾盂肾炎、尿

12、路结石、前列腺炎、尿道炎、盆腔炎、创伤等。,比重、葡萄糖、酮体,这三项结果出现阳性,可能与内泌系统疾病有关,如糖尿病、肾性糖尿病、糖尿病酮症、妊娠呕吐、腹泻、脑血管意外等。,胆红素、尿胆原,一项或两项结果出现阳性,一般表示肝胆系统疾病,如病毒性肝炎、肝硬化、溶血性疾病胆石症、胆管癌等。另外还可用于黄疸型疾病的鉴别断:肝细胞性黄疸尿胆红素和尿胆原都为阳性;而溶血黄疸只有尿胆原为阳性;阻塞性黄疸只有尿胆红素呈性。,PH、比重、维生素,这三个项目不能单独用于诊断但是可作为许多疾病的过筛试验,临床诊断价值不大。重要的是,它们可以对干化学试验进行监测。当出现阳性结果时,有可能干扰尿蛋白、葡萄糖、红细胞和

13、白细胞测定的敏感性。检验人员在签发检验结果时,应注这些指标,是不是对测定的标本产生了干扰;如有干扰, 要想办法排除,并进行复查。 PH9:蛋白质假阳性，PH500mg/L):可致葡萄糖假阴性，尿潜血假阴性，亚硝酸盐假阴性，白细胞酯酶假阴性（具有抗VitC能力的试纸除外） 比重：高比重尿会使尿亚硝酸盐反应敏感性降低，会使白细胞酯酶假阴性 高蛋白尿（4+）：可使白细胞酯酶假阴性,镜检方法,用较弱光线，以低倍镜将涂片全貌观察一遍，然后，计数20个低倍视野所见的管型，10个高倍视野所见的各类细胞,报告方式,1.分数报告法 细胞成分： 最低 最高/HPF 管型成分： 最低 最高/LPF,2.加号报告法

14、以有形成分占视野面积来判定，1/4视野为+， 满视野为+。多用于细胞数极多和结晶、 粘液丝、脂肪滴、细菌等的报告。,3.定量报告法 （ /ml /ul）,镜检内容,细胞 (RBC、WBC、上皮细胞、吞噬细胞) 管型 透明管型、细胞管型、颗粒管型、 蜡样管型、结晶管型、细胞管型等 结晶（常见结晶、病理性结晶）,镜检内容：红细胞,在未经染色的新鲜尿沉渣中，红细胞呈淡黄色，轻度反光，双凹盘样。 在浓缩的高渗尿液中，红细胞皱缩、变小、呈棘形。 在稀释或低渗尿液中，血红蛋白逸出，红细胞肿胀呈影细胞。,尿沉渣红细胞参考值及血尿定义,正常人：47/HPF可偶见一个红细胞 。 肉眼血尿：每升尿液中含血量超过1

15、ml，肉眼可见到不同程度混浊红色的尿液。 显微镜血尿：血液含量在0.1%以下，外观无血色，镜下红细胞平均/HPF的尿液。,血尿分类,均一红细胞血尿：RBC外形及大小正常，形态较为一致。 非均一红细胞血尿：RBC大小不等，呈两种以上的多形性变化。 混合性血尿：以上两组血尿的混合。,镜检内容：白细胞,白细胞：体积较RBC为大，呈圆球形，外形完整、无明显退行性变，胞浆清楚、细胞浆内颗粒清晰可见，常分散存在。 脓细胞：死亡的中性粒细胞，外形不规则，结构模糊，浆内充满粗大颗粒，核不清楚，细胞常粘连成团，细胞间界限不明显。,尿沉渣白细胞参考值,正常尿液中可偶然见到12个WBC/HPF，如每个高倍视野见到5

16、个或5个以上白细胞为增多。,镜检内容：上皮细胞,来源：肾小管、肾盂、输尿管、膀胱、尿道等处上皮细胞脱落。 类型： 立方上皮细胞肾小管 移行上皮细胞肾盂、肾盏、输尿管、膀胱 及部分尿道 假复层柱状上皮细胞尿道中段 复层鳞状上皮细胞尿道外口、阴道,鳞状上皮细胞,镜检内容：管型,管型是在肾小管管腔内形成的。当肾小球滤过膜通透性增强时，肾小管内大量的蛋白质不能完全重吸收。 当蛋白质到达远端肾小管及集合管时，由于水分的吸收，酸度的增加及软骨素硫酸脂的存在，促使蛋白质凝固形成管型，即透明管型。,管型基本形态：,两边平行，两端钝圆的长条形圆柱体。 长短、粗细取决于形成部位肾小管的直径和条件，也取决于肾小管上皮细胞的状态。,管型形成机理：,1）原尿中含有一定量的蛋白质，尤T-H 糖蛋白（肾小管分泌） 2）肾小管有使尿液浓缩和酸化的能力 浓缩：提高蛋白质的含量，提高盐类的浓度 酸化：能促进蛋白的沉淀 3）有可供交替使用的肾单位,管型分类,透明管型 颗粒管型 脂肪管型 肾衰竭管型 血红蛋白管型 蜡样管型 细胞管型,尿