化妆品中细菌菌落总数检查.ppt

1、化妆品中细菌菌落总数检查,前言,随着化妆品使用越来越广泛。已成为人们日常生活中的必需品。开展化妆品卫生质量监测。是保障人民健康维护消费者的利益，如使用了细菌总数超标的化妆品。会导致皮肤感染 。因此，化妆品细菌总数测定是便于判明样品被污染的程度。是对样品进行卫生学评价的重要依据 。,菌落总数是指化妆品检样经过处理，并在一定条件下培养后，得到的1g或1ml检样中所含细菌菌落的总数。 菌落总数的测定（平板活菌计数法）是根据微生物在固体培养基上所形成的菌落（即由一个单细胞繁殖而成，且肉眼可见的子细胞群体）的生理及培养特征进行的。也就是说，一个菌落即代表一个单细胞。,一、实验原理,测定时，首先将待测样品

2、制成均匀的、一系列不同稀释度的稀释液，并尽量使样品中的微生物细胞分散，使之成为单个细胞状态存在（否则1个菌落就不能代表1个菌）；再取一定稀释倍数的一定量稀释液接种到培养基上，使其均匀分布。菌落由单个细胞生长繁殖而成，因此通过统计菌落的数目，可计算样品中的含菌数。 由于所计算出的菌数是培养基上长出来的菌落数，故不包括死菌，因此菌落总数的测定又称为活菌计数。,菌落总数可作为判定食品被污染程度的标志，也可用于观察细菌在食品中繁殖的动态，以便在对被检样品进行卫生学评价时提供依据。 前边所述的细菌菌落总数实际上仅为样品中总细菌数的一部分，其余细菌皆因种种原因未能长出。每种细菌都有其一定的生理特性，欲将各

3、种细菌都有培养出来，就必须创造各种不同的培养条件，包括营养、温度、pH、需氧性等，去满足各种细菌的要求。在实际工作中，不可能也不必要培养出所有的细菌，所得结果只是能在肉汁营养琼脂上生长的嗜中温需氧性的菌落总数。,二、仪器设备,（1）培养箱：（361）。 （2）恒温水浴锅：（461）。 （3）天平。 （4）灭菌广口瓶或三角瓶：500ml。 （5）灭菌培养皿：皿底直径9.0。 （6）灭菌吸管：1.0、10.1。 （7）灭菌小试管。 （8）玻璃珠：直径5。 （9）均质机。 （10）灭菌刀、剪刀、镊子。 （11）酒精灯。,三、培养基和试剂,(1) 营养琼脂培养基 成分： 蛋白胨 10g 琼脂 1520

4、g 牛肉膏 3g 蒸馏水 1000mL 氯化钠 5g pH 7.27.4 制法：将除琼脂以外的各成分溶于蒸馏水中，用15%的NaOHt调节pH使之在7.27.4。加入琼脂，于121下高压灭菌15min,(2) 生理盐水 成分： NaCl 0.9g 蒸馏水 100ml 制法：一般每种检样配制250ml无菌生理盐水。称取2.2gNaCl,加入250ml蒸馏水溶解；分装于2支大试管中，每支9ml;再量取225ml装于500ml广口瓶或三角瓶中，并加入适量的玻璃珠；剩余的装入另1支试管中，包扎后于121下高压灭菌15min。 (3) 75的酒精棉球。,四、实验步骤,1.菌落总数的检验程序（图1） 检样

5、 制成几个适当倍数的稀释度 选择23个适宜的稀释度，个取1ml加入灭菌培养皿 每皿内各加入适量的营养琼脂 (361) 菌落计数 报告 图1 菌落总数的检验程序,操作步骤,1、培养基的制备 （1）根据检测样品量，计算所需营养琼脂培养基和生理盐水的用量，然后按照上述方法配制好备用。 （2）检样的稀释、分装（图2）及培养,实验步骤,在无菌条件下，将25ml(或25g)检样剪碎，放入装有225ml无菌生理盐水和适量玻璃珠的500ml广口瓶或三角瓶内，经充分振摇，形成10-1均匀稀释液。 用1ml的无菌吸管吸取10-1稀释液1ml，注入装有9ml无菌生理盐水的试管内，振摇混合均匀，即为10-2稀释液。再用此吸管吸取10-1稀释液各1ml于2个培养皿内。 另取1ml的无菌吸管吸取10-2稀释液1ml，注入装有 9ml无菌生理盐水的试管内，振摇混合均匀，即为10-3稀释液。再用此吸管吸取10-2稀释液各1ml于2个培养皿内。 采用相同的方法吸取10-3稀释液各