第八章 酶的定向进化-2013-12-5.ppt_第1页
第八章 酶的定向进化-2013-12-5.ppt_第2页
第八章 酶的定向进化-2013-12-5.ppt_第3页
第八章 酶的定向进化-2013-12-5.ppt_第4页
第八章 酶的定向进化-2013-12-5.ppt_第5页
已阅读5页，还剩11页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

1、酶的改性（enzymic improving）：通过各种方法使酶的催化特性得以改进的技术过程。,酶改性的技术 酶分子的修饰 酶固定化 酶的非水相催化 酶的定向进化 ,酶分子的定向进化（directed evolution）：模拟自然进化过程（随机突变和自然选择），在体外进行酶基因的人工随机突变，建立突变基因文库，在人工控制条件的特殊环境下，定向选择得到具有优良催化特性的酶的突变体的技术过程。,属于蛋白质的非合理设计，它不需事先了解酶的空间结构和催化机制。,4.6.1 定向进化的特点,适应面广； 目的性强； 效果显著。,4.6.2 定向进化的原理,以很低的比率向目的基因中随机引入突变，构建突变库

2、，凭借定向的选择方法，选出所需性质的优化酶(或蛋白质)，从而排除其他突变体。 定向进化的基本规则是“获取你所筛选的突变体”。 定向进化=随机突变+定向选择。,4.6.3 酶基因的随机突变,1、易错PCR技术为代表的无性进化 无性突变：向单一酶分子基因内随机引入突变，制造突变酶库以便筛选。 易错PCR：从酶的单一基因出发，在改变反应条件的情况下进行聚合酶链反应，使扩增得到的基因出现碱基配对错误，从而引起基因突变的技术过程。,反应条件：提高Mg2+浓度；添加Mn2+；改变四种底物浓度比等。,易错PCR技术,特点：操作简便，随机突变丰富。 缺点：正突变基因少，需多次PCR。 注意：控制好基因突变频率

3、。 适用：较小基因的定向进化。,2、DNA重排技术为代表的有性进化 DNA重排技术：又称DNA改组技术，有性PCR（sexual PCR）。从正突变基因文库中分离得到的同源DNA，用酶切割成随机片段，经过不加引物的多次PCR循环，使DNA的碱基序列重新排布而引起基因突变的技术过程。,DNA改组原理,DNA改组技术,特点：正突变频率高，进化速度快。 注意：需多次进行。,3、基因家族之间的同源重组,从自然界中存在的基因家族出发，利用它们之间的同源顺序进行DNA改组实现同源重组。,如：Stemmer等从4种微生物中选择编码头孢菌素酶的4个同源基因，对它们进行单独进化或同源重组进化。结果对单基因进化得到的突变酶中，对头孢羟羧氧胺的抗性最高的增加了8倍，而用家族同源重组进化的方法使抗性比其中两种微生物来源的天然酶提高270倍，比另外两种酶提高了540倍。,1、突变基因文库的构建 定义：将各种不同突变基因与载体重组，再转入适宜的细胞或包装成重组噬菌体的技术过程。 质量要求：文库包容性和文库完整性 过程： 载体选择 基因重组 形成基因文库,质粒 噬菌体DNA 黏粒载体 噬菌粒载体,转化 转导,2、突变基因的筛选 （1）定向选择环境条件的设定 （2）高通量筛选技术 平板筛选技术 荧

人人文库> 全部分类> 教育资料 > 课设设计

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论