垂直板电泳分离蛋白质--教学课件.ppt

1、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳蛋白质分离，汉文县朱孝慧生物技术研究室，1，实验目的，了解传记电泳实验原理，了解传记电泳实验操作规程，学习SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳蛋白质分离原理和技术，2，电泳基本原理，电泳是指带电粒子在电场下移动的过程。氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等许多重要生物分子(如多肽、蛋白质、核酸等)的作用是电场，在要分离的样品中，由于各种分子带电性质和分子本身的大小、形状等性质的差异，带电分子制造出不同的迁移速度，从而分离、鉴定或纯化样品的技术，3，传记神童的分类，原则上：波段传记泳、移动系传记泳、等速传记泳、等电聚焦(IEF)、二维传记泳等。凝胶系统的均匀性：连续凝胶电泳，不连续

2、凝胶电泳形状：盘传记电泳，水平板传记电泳，垂直板传记电泳，毛细管传记电泳等。分离的物质是否变性：郑智薰变性、变性载体上的自由流动传记电泳、凝胶电泳、每阵地传记电泳、纸传记电泳等。4，传记神童的几个茄子基本概念，1。凝胶浓度(T) 2。相交度(C) 3。分离胶4。浓缩粘合剂5。移动率，6。指示制7。聚合8 .固定9。染色10。脱色聚丙烯酰胺凝胶是单体丙烯酰胺(CH2=CHCONH2 (Acr)和交联剂N，N-甲基双丙烯酰胺(CH2(NHCOHC=CH2) 2 (Bis)是加速器N，N，经常用于蛋白质的定性分析，特别是蛋白质纯度检查和蛋白质分子量测定。(2)有SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳两个茄子系统：

3、只有分离胶的连续系统和有浓缩和分离胶的不连续系统。(3)强还原剂能切断半胱氨酸残基之间的二硫化键。SDS和蛋白质完全定量地结合(平均两个氨基酸残基结合一个SDS分子)，使蛋白质完全变性化，形成棒状结构，消除各种蛋白质本身的电荷差异，使蛋白质传记神童的速度与蛋白质的分子量相关、蛋白质本身的电荷无关，(4)由于浓缩效果、分子体效应、电荷效应，分离物质在传记神童发生不同游泳速度，从而导致徐璐分离。图4传记游泳过程图表A是传记游泳前三层凝胶排列顺序，第三层粘合剂全部有快速离子，慢离子B在传记游泳开始后蛋白质样品被夹在快速慢离子之间，浓缩到非常狭窄的区域。显示c蛋白样本被分割成多个区域。(5)利用特异性

4、的颜色反应给蛋白质上色，凝胶中会显示蛋白质带。2，仪器设备和试剂，(1)仪器设备：恒流恒压传记永磁同步和传记电泳槽制冷离心机和离心管制冰机pH系真空机取样器取样器取样器取样器取样器取样器取样器取样器取样器取样器，(2)。试剂，30%凝胶储液29.2g丙烯酰胺，0.8g甲次双丙烯酰胺双蒸气水溶解后，达到100毫升浓缩布片(0.5m tris-HCl，pH 6.8) 6.06g tris，0.4g SDS，双蒸发水80ml溶解，用HCl将pH调整为6.8，然后过滤后分离胶缓冲(1 0.4g SDS，1 0.4g SDS，)komas亮蓝色染液42ml水，58ml磷酸加50g硫酸胺溶出后，0.6g-

5、250溶出，将水放入400ml，加入100ml甲醇AP% 100mg硫酸胺，1ml水缓冲液1g SDS，5ML GL 2.5ml巯基乙醇，10ml浓缩粘合剂缓冲SDS-page实验阶段，准备分离胶，准备浓缩液，添加，准备分离样品，传记电泳凝胶储液7.7ml分离胶Buffer 5ml H2o 7.25ml 10% AP 54 ul Temed 9ul，(2) .4.8%浓缩胶准备(2)，传记电泳，浓胶：10mA分离胶：20mA，固定，染色和脱色，固定液固定3040分钟水洗4次，每15分钟染液染色4小时或通宵水洗脱色背景鲜明，6，实验报告，实验名称，时间，地点，地点高等教育出版社中国科学院上海市饮食篇、现代植物生理学实验指南、科学出版社张容奖等生化实验方法和技术(1板块