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文档简介
1、实验食品中总抗坏血酸的测定(荧光方法)(一)目的和意义食物中的总抗坏血酸包括还原态和脱氢态。当食物长时间放置或烹调时,相当一部分抗坏血酸转化为脱氢抗坏血酸,而脱氢抗坏血酸仍具有约85%的维生素c活性,因此总抗坏血酸通常是这类食物的测定指标。(2)原则样品中的还原性抗坏血酸被活性炭氧化成脱氢抗坏血酸。脱氢抗坏血酸与邻苯二胺反应生成荧光化合物喹喔啉,在一定条件下,其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度成正比,从而测定食品中抗坏血酸的总含量。(3)仪器和试剂1.338纳米和340纳米波长的荧光分光光度计或荧光计2.捣碎机3.100毫升容量瓶、锥形瓶和带塞子的试管。4.在80毫升冰醋酸中加入30克偏磷酸,加入
2、500毫升蒸馏水,混合均匀,稀释至1000毫升。可在4冰箱中保存7 10天。5.偏磷酸乙酸硫酸溶液的制备方法与4相同,只是用0.18摩尔/升硫酸代替蒸馏水。6.将500克乙酸钠(naac3h2o)溶于蒸馏水中,稀释至1000毫升。7.将3g硼酸溶于100ml乙酸钠溶液中,使用前准备好。8.称取20毫克邻苯二胺溶液,在使用前将其溶解至100毫升。9.0.04%百里酚蓝指示剂溶液称取0.lg百里酚蓝,加入0.02 mol/l氢氧化钠溶液,在玻璃研钵中研磨至溶解。氢氧化钠的量约为10.75毫升,研磨溶解后的溶液用水稀释至250毫升。10.活性炭,加入200克碳粉和1l盐酸浓缩液(1份盐酸9份水),加
3、热回流1 2小时,过滤,水洗至滤液中无铁离子,在110 120烘箱中烘干备用。11.在抗坏血酸标准溶液(lmg/ml)中准确称量50mg抗坏血酸,将其溶解在50ml含有偏磷酸-乙酸溶液的容量瓶中,并稀释至刻度(使用前准备好)。12.抗坏血酸标准应用溶液(100微克/毫升)取10毫升抗坏血酸标准溶液,用偏磷酸-乙酸溶液稀释至100微克/毫升。定容前测试酸碱度。如果ph 2.2,使用偏磷酸-乙酸-硫酸溶液进行稀释。(4)操作步骤长度样品处理:称取100克样品,加入100毫升偏磷酸盐-乙酸溶液,倒入捣碎器中制成匀浆,用麝香草酚蓝指示剂调节匀浆的ph值。如果是红色,立即用偏磷酸盐-乙酸溶液稀释,如果是
4、黄色或蓝色,用偏磷酸盐-乙酸-硫酸溶液稀释。匀浆的取样量应根据样品中抗坏血酸的含量来确定。当样品中的含量在40-100微克之间时,一般取20克匀浆,用偏磷酸乙酸或偏磷酸乙酸硫酸溶液稀释至100毫升,过滤滤液备用。2.氧化处理后,将80毫升样品滤液和80毫升抗坏血酸标准应用溶液放入带塞的200毫升锥形瓶中,加入2克活性炭,振荡1分钟,过滤,弃去前几毫升滤液,分别收集所有其他滤液,即待测样品氧化溶液和标准氧化溶液。3.在两个100毫升容量瓶中取10毫升标准氧化溶液,分别标上“标准”和“标准空白”。4.在两个100毫升容量瓶中取10毫升样品氧化溶液,分别标记“样品”和“样品空白”。5.在4个标准空白
5、溶液和样品空白溶液中分别加入5ml硼酸-乙酸钠溶液,混合振荡15分钟,用蒸馏水稀释至100ml,置于4冰箱中2 3h,取出备用。6.向“样品”和“标准”溶液中加入5ml 1 50% %乙酸钠溶液,用水稀释至100毫升,以备后用。制备的校准曲线取0.5毫升、1.0毫升、1.5毫升和2.0毫升以上6种。“标准”溶液(抗坏血酸含量为10微克/毫升),分别放入10毫升带塞子的试管中,然后加水至2.0毫升。每个浓度用作两个平行的对照样品。8.取2毫升“标准空白”溶液、2毫升“样品空白”溶液和2毫升“样品”溶液,放入10毫升瓶塞(5)结果的计算其中:标准试管的荧光读数b标准槐空白试管的荧光读数c样品管的荧光读数d样品空白试管的荧光读数标准试管中抗坏血酸的浓度f样品稀释倍数w取样量,g10荧光反应的样品体积,ml1/1000-将微克数量的抗坏血酸转化为毫克数量(6)描述1.处理活性炭时,建议用活性炭洗涤少量滤液,加入几滴5%亚铁氰化钾,如果没有出现蓝色,即没有fe3,或加入几滴1%硫氰酸钾,如果没有出现红色,也证明没有fe3,然后过滤活性炭,在后烘箱中干燥,在后烘箱
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