食品营养与卫生选做实验食品中总抗坏血酸测定

1、实验食品中总抗坏血酸的测定(荧光方法)(一)目的和意义食物中的总抗坏血酸包括还原态和脱氢态。当食物长时间放置或烹调时，相当一部分抗坏血酸转化为脱氢抗坏血酸，而脱氢抗坏血酸仍具有约85%的维生素c活性，因此总抗坏血酸通常是这类食物的测定指标。(2)原则样品中的还原性抗坏血酸被活性炭氧化成脱氢抗坏血酸。脱氢抗坏血酸与邻苯二胺反应生成荧光化合物喹喔啉，在一定条件下，其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度成正比，从而测定食品中抗坏血酸的总含量。(3)仪器和试剂1.338纳米和340纳米波长的荧光分光光度计或荧光计2.捣碎机3.100毫升容量瓶、锥形瓶和带塞子的试管。4.在80毫升冰醋酸中加入30克偏磷酸，加入

2、500毫升蒸馏水，混合均匀，稀释至1000毫升。可在4冰箱中保存7 10天。5.偏磷酸乙酸硫酸溶液的制备方法与4相同，只是用0.18摩尔/升硫酸代替蒸馏水。6.将500克乙酸钠(naac3h2o)溶于蒸馏水中，稀释至1000毫升。7.将3g硼酸溶于100ml乙酸钠溶液中，使用前准备好。8.称取20毫克邻苯二胺溶液，在使用前将其溶解至100毫升。9.0.04%百里酚蓝指示剂溶液称取0.lg百里酚蓝，加入0.02 mol/l氢氧化钠溶液，在玻璃研钵中研磨至溶解。氢氧化钠的量约为10.75毫升，研磨溶解后的溶液用水稀释至250毫升。10.活性炭，加入200克碳粉和1l盐酸浓缩液(1份盐酸9份水)，加

3、热回流1 2小时，过滤，水洗至滤液中无铁离子，在110 120烘箱中烘干备用。11.在抗坏血酸标准溶液(lmg/ml)中准确称量50mg抗坏血酸，将其溶解在50ml含有偏磷酸-乙酸溶液的容量瓶中，并稀释至刻度(使用前准备好)。12.抗坏血酸标准应用溶液(100微克/毫升)取10毫升抗坏血酸标准溶液，用偏磷酸-乙酸溶液稀释至100微克/毫升。定容前测试酸碱度。如果ph 2.2，使用偏磷酸-乙酸-硫酸溶液进行稀释。(4)操作步骤长度样品处理：称取100克样品，加入100毫升偏磷酸盐-乙酸溶液，倒入捣碎器中制成匀浆，用麝香草酚蓝指示剂调节匀浆的ph值。如果是红色，立即用偏磷酸盐-乙酸溶液稀释，如果是

4、黄色或蓝色，用偏磷酸盐-乙酸-硫酸溶液稀释。匀浆的取样量应根据样品中抗坏血酸的含量来确定。当样品中的含量在40-100微克之间时，一般取20克匀浆，用偏磷酸乙酸或偏磷酸乙酸硫酸溶液稀释至100毫升，过滤滤液备用。2.氧化处理后，将80毫升样品滤液和80毫升抗坏血酸标准应用溶液放入带塞的200毫升锥形瓶中，加入2克活性炭，振荡1分钟，过滤，弃去前几毫升滤液，分别收集所有其他滤液，即待测样品氧化溶液和标准氧化溶液。3.在两个100毫升容量瓶中取10毫升标准氧化溶液，分别标上“标准”和“标准空白”。4.在两个100毫升容量瓶中取10毫升样品氧化溶液，分别标记“样品”和“样品空白”。5.在4个标准空白

5、溶液和样品空白溶液中分别加入5ml硼酸-乙酸钠溶液，混合振荡15分钟，用蒸馏水稀释至100ml，置于4冰箱中2 3h，取出备用。6.向“样品”和“标准”溶液中加入5ml 1 50% %乙酸钠溶液，用水稀释至100毫升，以备后用。制备的校准曲线取0.5毫升、1.0毫升、1.5毫升和2.0毫升以上6种。“标准”溶液(抗坏血酸含量为10微克/毫升)，分别放入10毫升带塞子的试管中，然后加水至2.0毫升。每个浓度用作两个平行的对照样品。8.取2毫升“标准空白”溶液、2毫升“样品空白”溶液和2毫升“样品”溶液，放入10毫升瓶塞(5)结果的计算其中：标准试管的荧光读数b标准槐空白试管的荧光读数c样品管的荧光读数d样品空白试管的荧光读数标准试管中抗坏血酸的浓度f样品稀释倍数w取样量，g10荧光反应的样品体积，ml1/1000-将微克数量的抗坏血酸转化为毫克数量(6)描述1.处理活性炭时，建议用活性炭洗涤少量滤液，加入几滴5%亚铁氰化钾，如果没有出现蓝色，即没有fe3，或加入几滴1%硫氰酸钾，如果没有出现红色，也证明没有fe3，然后过滤活性炭，在后烘箱中干燥，在后烘箱