生物样品分析测定.ppt

1、第一节 概述 生物药物分析的对象药物所到之生物体的体液、器官、组织、排泄物等。 生物药物分析的目标母体药物和代谢产物 生物药物分析的意义 药物质量的正确评价 临床合理用药,第一节 概述,生物药物分析的特点 生物样品中被测组分的存在形式多样 原型药（游离型）、结合型、代谢物、缀合物等 被测组分浓度低（10-6-10-9g/ml），变化幅度大 样品干扰物质多，部分样品稳定差 样品量少 要求较快提供结果 测定数据的处理和阐明有时不太容易,第二节 药物在生物体内的存在状态与生物转化,药物在生物体内的存在状态 药物代谢保证临床用药的安全、合理和有效 药物代谢的部位：肝脏、肾、脾、肺、肠粘膜、胎盘等 药物

2、代谢反应 第一阶段（一相）：P450等催化下的氧化、还原、水解等反应，增大极性 第二阶段（二相）：与葡萄糖醛酸、硫酸盐等结合，进一步增大极性，随尿排出,第三节 生物样品的制备,常用生物样品 生物样品的选取原则 能够反映出浓度与药效之间的关系 易于获得 便于处理 根据不同目的和要求进行选取,第三节 生物样品的制备,常用生物样品 常用生物样品的种类、特点与采集 血浆(plasma) 血样 血清(serum) 全血(whole blood) 尿液(urine)用于药物剂量回收、药物肾清除率及生物利用度的研究 尿液药物浓度变化大，应测定一定时间内尿中药 物总量。 尿液与血液中药物的相关性差。 尿中药物

3、大多呈缀合状态。,第三节 生物样品的制备,常用生物样品 常用生物样品的种类、特点与采集 唾液(saliva)用于药物浓度监测和药代动力学研究 其他动物脏器组织匀浆等 样本的代表性 力求取样条件标准化 样品的贮存 血样离心，冷冻保存 尿液立即测定，否则应冷藏或加防腐剂,第三节 生物样品的制备,样品预处理 提取方法的选择依据 药物的理化性质 -酸碱度、极性、挥发性、可能的生物转化途径等 药物的浓度范围 药物测定的目的 生物样品的类型 样品处理与分析技术的关系,第三节 生物样品的制备,样品预处理 药物的提取 蛋白质处理 利用蛋白质脱水沉淀 有机溶剂、中性盐等 利用蛋白质形成不溶性盐沉淀 酸性沉淀剂（

4、TCA、高氯酸、苦味酸等） 重金属盐（Zn2+、Cu2+） 其他方法 加热、离心、超滤和透析、酶消化法,第三节 生物样品的制备,样品预处理 药物的提取 缀合物（结合物）水解 酸水解无机酸 简便快速，但专属性差，有可能造成被测物分解。 酶水解 葡萄糖醛酸苷酶(glucuronidase) 芳基硫酸酯酶(arylsulfatase) 专属性强，一般不会造成被测物分解，但水解时间长，费用高。 溶剂解,第三节 生物样品的制备,样品预处理 药物的提取 冷冻干燥 适用于 -大批量的生物样品 -水溶性很强的样品 -挥发性样品 -对热不稳定的样品,第三节 生物样品的制备,样品预处理 药物的分离与净化 液-液萃

5、取 萃取率：不低于50% 影响提取率的因素 pH值 提取溶剂 离子强度 离子对提取,第三节 生物样品的制备,样品预处理 药物的分离与净化 液-固萃取 固相提取柱（使用硅藻土、氧化铝、离子交换树脂、活性炭等填充剂） “干混合物”萃取 待测组分的富集 真空挥发或通气流挥发 衍生化处理,第三节 生物样品的制备,样品预处理 待测物的损失 吸附、化学降解、衍生化反应、络合、蒸发 样品玷污 增塑剂 脂肪酸和酯类 其他,第四节 生物样品内药物分析方法,分析方法建立的一般步骤 以纯品进行测定 确定线性范围、最适测定浓度、灵敏度、最佳测定条件等 空白样品测定 以水代替空白样品，添加对照品后测定 了解提取回收率和最低检测浓度的大致情况 空白样品中添加对照品后测定（回收率实验） 实际样品测定,第四节 生物样品内药物分析方法,方法的评价 准确度（accuracy） 回收率相对稳定 与参比方法相比较相关系数r 0.95 精密度（precision） 各浓度点RSD不应大于15%，最低定量限不应大于20%。 灵敏度 检测限(LOD)、定量限(LOQ)、最低检测浓度,第四节 生物样品内药物分析方法,方法的评价 方法的专属性（specificity） 注重考虑代谢物、内源性物质和同时服用药物的干扰 线性范围-相关系数r 0.99 样品稳定性考察 长期贮存(-