5`-RACE.ppt

1、宝生物工程(大连市)有限公司，116600 Takara生物技术(大连)有限公司，CDNA 5，(5 Race法)，单边快速扩增法，(Race 5段al单链cDNA自身连接。PCR放大5未知区域。目的塑料切割回收DNA片段。DNA序列测定。体外转录PSPtet RNA。配制PSPtet RNA和总RNA的混合样品。5个设计合成引物。使用5 RACE方法获得PSPtet RNA的5个端点。塑料回收用途DNA片段。执行DNA排序以查看序列结果。(获取PSPtet RNA的5端)，实验案例，PSPtet RNA体外转录，PSPtet RNA的传记电泳结果，RNA Mixture的制备，PSPtet

2、RNA和总RNA以1: 105的比例混合，总RNA的传记电泳结果5个设计合成引物。使用5 RACE方法获得PSPtet RNA的5个端点。塑料回收用途DNA片段。执行DNA排序以查看序列结果。(获取PSPtet RNA的5端)，实验案例，5 RACE的实验方法，反转录(RT)反应。Hybrid RNA的分解。单链cDNA自身连接。PCR放大5未知区域。目的塑料切割回收DNA片段。DNA序列测定。，Step1。反转录反应，RNA mixture 10rt buffer RNase inhibitor(40u/ml)amv reverse transcriptase XL(5u/ml)5标记反转录

3、引物30 10分50 30分80 2分钟反应液配置：2。反应条件：3.0mg 1.5ml 0.5ml 1.0ml 1.0ml 1.0ml 15ml，step 2。hybrid RNA分解，1st strand cdna反应液5 hybrid RNA degeneration buffer RNase h(60u/ml)dh2o up to，30；1小时乙醇沉淀，1 .反应液配置：2。反应条件：15ML 15ML 1ML75ML，STEP 3。单链cDNA自连接反应，Step2的cDNA沉淀物5RNA (SSDNA)通宵反应，1 .反应液配置：2。反应条件：8ML12ML20ML、Step 4。

4、PCR反应(1st PCR)，Step3连接反应液10 la PCR buffer ii dntp mixture(2.5mm each)primer f1(20mm)primer R1(20mm)takara反应条件如下：1.0ml 5.0ml 8.0ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml 50ml，94 3 min 94 30 sec 55 30 sec 72 30 sec，25 cycles，step 4.pcr反应1st PCR反应液10la反应条件如下：1.0ML 5.0ML 8.0ML 8.0ML 0.5ML 0.5ML 0.5ML 50ML、94 30 SEC 55 30 SEC72 30 SEC、30 Cycles、2NDPCR反应结果，塑料回收传记电泳结果如下：DNA片段的序列测定，未知序列，5，3，测序结果与5个引物之间的关系，PSPtet RNA的5段序列使用终端脱氧核糖转移(TdT)的5 RACE方法适配方法原理、TDT方法原理、几种茄子5 RACE方法的比较、牙齿实验成功获得了PSPtet RNA的5个端点如果MRNA 3结束序列已知，则可以使用TaKaRa 5 RACE方法有效地获得5结束序列。在实