凝集试验(四项).ppt

1、凝集四项,凝集反应,直接凝集反应 玻片凝集试验测ABO血型 试管凝集试验 间接凝集反应 正向间接凝集试验测RF 反向间接凝集试验测HBsAg 间接凝集抑制试验测HCG 协同凝集反应,直接凝集试验-测ABO血型,原理（玻片法） 天然的颗粒性抗原（如红细胞，白细胞，细菌等）与相应抗体在适宜条件下反应，出现肉眼可见的凝集物，称为直接凝集反应。玻片法属于定性试验。,步骤 取破片1块，左上角和右上角分别标上“A”和“B”； 用采血针采指头血，将血滴在玻片的两头； 在两血滴上分别滴上抗A标准血清和抗B标准血清，用牙签搅拌； 手持玻片，前后旋转摇动，促使血清与红细胞充分混合，放置室温15min，用肉眼观察有

2、无凝集。,结果观察和判断 有凝集时红细胞相互聚集成团，出现大小不等的颗粒。,注意事项 玻片应洁净、干燥、中性，以防止和减少非特异性凝集。 室温低于10时，易出现冷凝集而造成假阳性结果。,间接凝集试验,将可溶性抗原（或抗体）吸附于一种与免疫无关的、适当的大小的载体微粒表面，再与相应抗体（或可溶性抗原）在适宜条件下相互作用，经一定时间出现肉眼可见的凝集现象，这种方法称为间接凝集试验，又称被动凝集试验。 如将抗原包被于载体微粒表面以检测抗体，称为（正向）间接凝集试验； 如将抗体吸附于载体微粒表面以检测抗原，则称为反向间接凝集试验。 实验室常用的载体有红细胞、胶乳颗粒、活性碳、SPA菌体等，其中以红细

3、胞为载体的间接凝集试验称为间接血凝试验，以胶乳为载体的间接凝集试验称为间接胶乳凝集试验。,正向间接凝集试验测RF,原理（胶乳凝集试验） 类风湿因子（RF）是一组抗变性IgG的自身抗体，它能与人或动物的变性IgG结合，而不与正常人IgG发生凝集反应。根据这一点，将处理过的人IgG与羧化聚苯乙烯胶乳共价交联，使其吸附于胶乳颗粒载体上，称为致敏的胶乳颗粒。当待检血清中有RF是，则致敏胶乳颗粒上的变性IgG与相应的抗体（RF）发生反应，出现凝集现象。,（正向）间接凝集反应原理示意图,步骤 将阳性血清和阴性血清（用生理盐水稀释1：20倍稀释）1滴，分别加在玻片上，然后分别加胶乳试剂一滴。 轻轻摇动反应板

4、（或用牙签充分混匀后），23min，观察结果。,结果观察和判断 加入免疫胶乳试剂后，连续摇动，在室内的光线下23min出现清晰凝集颗粒，且液体澄清者为阳性，即RF阳性。若需做定量测定，可将血清作倍比稀释，重复上述测定，以出现凝集的血清最高稀释度为RF滴度。,反向间接凝集试验-测HBsAg,原理（间接血凝试验） 将抗体致敏红细胞与样品中相应抗原作凝集试验，观察红细胞凝集现象，用以判断样品中相应抗原的有无及其效价。,反向间接凝集反应原理示意图,步骤 在“v”型孔微量反应板的12个孔中依次加入25l稀释液，用微量加样枪吸取阳性血清25l，将血清在12孔中依次稀释成1：2 ，1：4 ，1：8 ，1：1

5、6 ，1：32 ，1：64，1：128，1：256，1：512，1：1024，1：2048，1：4096， 在上述各孔中依次加致敏红细胞悬液25l，混匀（将板放在台面上打圈）12min，置37温育1h，观察结果。,结果观察和判断 红细胞凝集强度分级 ：红细胞沉积于孔底； ：红细胞沉积于孔底，周围有散在少量凝集； ：红细胞形成片层凝集，面积较小，边缘较松散； ：红细胞形成片层凝集，面积略多于； ：红细胞形成片层凝集，均匀布满孔底，或边 缘皱缩如花边状 出现“+”以上凝集强度判断为阳性结果，以出现“+”的最高血清稀释度即为该血清中HBsAg的滴度。,血凝反应强度示意图,注意事项 器材必须十分洁净，

6、否则对结果影响较大。 不能使用溶血、污染细菌的待检血清，且待检血清中不能含待检者红细胞。 致敏红细胞浓度与试验结果的灵敏度成反比，其灵敏度以0.25致敏红细胞悬液为最高，但不易观察结果，一般选用0.5浓度为宜。 加致敏红细胞悬液应先摇匀，以免影响灵敏度。 混匀不少于1min，以免因混合不均出现不清晰的凝集模式。,间接凝集抑制试验测HCG,原理 将含有可溶性抗原的待检样品先与已知抗体混合，充分作用后再加入抗原致敏的胶乳颗粒，因抗体以与样品中的可溶性抗原结合，胶乳颗粒不再出现的凝集现象，称胶乳凝集抑制试验。本试验以检测绒毛膜促性腺激素（HCG）的免疫妊娠试验为例。,步骤 将阳性尿、阴性尿（用生理盐

7、水代替）、待检尿液分别滴一滴在玻片上 然后分别滴一滴诊断血清（用HCG免疫动物得到的抗血清），分别用牙签搅匀，手持玻片，前后旋转摇动一分钟 在上述三滴上各加一滴胶乳抗原，用牙签混匀，在轻摇23min，观察结果。,结果观察与判断 阴性对照应出现明显的均匀一致的凝集颗粒，液体澄清，否则试验无效。 阳性对照应出现均匀一致的胶乳状， 待检样品如出现明显的凝集为HCG阴性；如不出现凝集，呈均匀胶乳状为HCG阳性。,注意事项 待检尿液以晨尿为好。 试剂应4保存，切勿冻存，使用前将试剂平衡至室温并摇匀。 试验同时设立阳性、阴性对照，以排除非特异性凝集。 所加液滴应大小一致。 结果应在强光下观察，观察时应在黑

8、色背景下或将玻片稍倾斜。,凝集四项的步骤,反向间接凝集试验测-HBsAg,步骤 在“v”型孔微量反应板的12个孔中依次加入25l稀释液，用微量加样枪吸取阳性血清25l，将血清在12孔中依次稀释成1：2 ，1：4 ，1：8 ，1：16 ，1：32 ，1：64，1：128，1：256，1：512，1：1024，1：2048，1：4096， 在上述各孔中依次加致敏红细胞悬液25l，混匀（将板放在台面上打圈）12min，置37温育1h，观察结果。,正向间接凝集试验测RF,步骤 取阳性血清和阴性血清（用生理盐水1：20倍稀释）1滴，加在玻片上，然后分别加胶乳试剂一滴。 轻轻摇动玻片（或用牙签充分混匀后），23min，观察结果。,间接凝集抑制试验测HCG,步骤 将阳性尿、阴性尿（用生理盐水代替）、待检尿液分别滴一滴在玻片上 然后分别滴一滴诊断血清（用HCG免疫动物得到的抗血清），分别用牙签搅匀，手持玻片，前后旋转摇动1min 在上述三滴上各加一滴胶乳抗原，用牙签混匀，在轻摇23min，观察结果。,直接凝集