基因工程的工具——酶与载体.ppt

1、欢迎光临指导,荧光猫,荧光基因,基因工程,具体流程,1.在具体操作时需要用到哪些基本工具？,获取荧光基因,荧光基因与载体结合 构建重组质粒,将重组质粒导入受精卵,2.这些工具有哪些特性，以及如何使用这些工具呢？,专题一 基因工程 11DNA重组技术的基本工具,句容市实验高级中学 王璐琦,一轮复习,下图中的图1和图2分别表示的是EcoR限制酶和Sma限制酶的作用示意图，据图分析：,【限制酶】,(1)请说出EcoR限制酶和Sma限制酶识别的脱氧核苷酸序列及切割的位点。,(2)以上实例说明限制酶有何特性？,EcoR限制酶识别的碱基序列是GAATTC，切割位点在G和A之间；Sma限制酶识别的碱基序列是

2、CCCGGG，切割位点在G和C之间。,限制酶具有专一性。,（3）限制酶具体切割下图中的哪个化学键？,连接两个相邻脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键,a,【DNA连接酶】,由下图所示DNA连接酶催化具有 黏性末端的DNA片段之间形成 键。,相同,磷酸二酯,【归纳提升】,比较DNA连接酶与DNA聚合酶,磷酸二酯键,单个脱氧核苷酸,两个DNA片段,【典例1】如图为DNA分子在不同酶的作用下所发生的变化，其中甲图为 酶，乙图为 酶，丙图为 酶。,乙,丙,甲,限制,DNA聚合,DNA连接,如图为大肠杆菌及质粒载体的结构模式图，据图回答下列问题。,从图中可看出，质粒作为载体具备的基本条件有： 1 ; 2 ; 3

3、.,【载体】,限制酶切割位点,标记基因,复制原点,双链环状DNA分子,除以上条件外，还要具备对受体细胞无害等条件,便于目的基因的扩增,便于目的基因的插入,便于重组DNA的鉴定 和选择,载体上标记基因的作用,所以标记基因的作用是：便于重组DNA的鉴定和选择。,载体上的标记基因一般是一些抗生素的抗性基因。,限制酶种类的选择方法,【难点突破】,下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：,(1)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Sma切割，原因是_。,用Sma会破坏目的基因和质粒上的标记基因,(2)在构建重组质粒时，与只使用Eco

4、R相比较，使用BamH和Hind 两种限制酶同时处理质粒和外源DNA的优点在于可以防止（先动手拼一拼，再回答）_。,目的基因的自身环化及质粒的自身环化，还可以防止目的基因与质粒的反向连接, 应选择切点位于目的基因两端的限制酶，不能选择切点位于目的基因内部的限制酶。, 质粒作为载体必须具备标记基因等，所以所选择的限制酶尽量不要破坏这些结构，若有多个标记基因的，则切割后至少要保留一个标记基因。,为避免目的基因和质粒的自身环化并确保目的基因能定向插入质粒，从而提高构建重组DNA分子的效率，往往使用两种切割形成不同黏性末端的限制酶同时切割目的基因和质粒。,【归纳总结】,【典例2】基因工程中，须使用特定

5、的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶的识别序列和切点是GGATCC，限制酶的识别序列和切点是GATC。根据图示判断下列操作正确的是(),A目的基因和质粒均用限制酶切割 B目的基因和质粒均用限制酶切割 C质粒用限制酶切割，目的基因用限制酶切割 D质粒用限制酶切割，目的基因用限制酶切割,D,用限制酶EcoR单独切割某普通质粒，可产生一条14 kb(1 kb即1000个碱基对)的长链，而同时用限制酶EcoR 、Mbo联合切割该质粒，可得到三段三种长度的DNA片段，如下图(其中*表示EcoR 限制酶切割后的一个黏性末端)。若用Mbo限制酶单独切割该普通质粒，则产生的DNA片段的长度可以为（ ）,A.2.5和5.5 B.2.5和6 C.5.5和8 D.6和8