课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

1、2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,1.实例：,启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的 要求，到相应的环境中去寻找。,原因：因为热泉温度70800C，淘汰了绝大多 数微生物只有Taq细菌被筛选出来。,DNA多聚酶链式反应是一种在体外将少量DNA大量复制的技术，此项技术要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶。,筛选菌株,2.实验室中微生物的筛选原理：,人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。,什么是选择性培养基？,1.尿素的利用,尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。,2.细菌

2、利用尿素的原因,土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成 。,脲酶,一、从土壤中分离出能够分解尿素的细菌,制备以 为唯一氮源的 培养基。,尿素,选择,3.制备培养基：,培养基的唯一氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。,碳源： 氮源：,葡萄糖、尿素 尿素,4.鉴定方法,在以尿素为唯一氮源的培养基中加 入 指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将 ，说明该细菌能够分解尿素。,酚红,变红,测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将

3、滤膜放到 伊红美蓝 培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过记述得出水样中大肠杆菌的数量。,大肠杆菌呈 黑色中心 ,有或无金属光泽,大肠杆菌在伊红美蓝琼脂(EMB)上典型特征,1.显微镜直接计数：,方法： 缺点： 例子：,二、统计菌落数目：,不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察；,血球计数板,酵母菌种群数量变化,2.间接计数法（活菌计数法） 原理：一个菌落来源于一个活菌。 常用方法：稀释涂布平板法。,（3）计算公式： 每克样品中的菌落数(CV)M,其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积

4、(ml)，M代表稀释倍数。,3.怎样证明此培养基具有选择性呢？,以尿素为 唯一氮源 的培养基,牛肉膏 蛋白胨 培养基,是,分离 尿素 细菌,判断该 培养基 有无选 择性,只生长尿素细菌,生长多种微生物,是,注意事项 为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平板上进行计数。 设计重复组 目的增加实验说服力与准确性。方法可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。 设置对照组 主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。,统计的菌落往往比活菌的实际数目低。 培养不同微生物往往需要不同培养温度。 细菌：3037培养12d 放线菌：2528

5、培养57d 霉菌：2528的温度下培养34d。,如果得到了2个或2个以上菌落数目在30300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不精确，需要重新实验。,1.使用选择培养基的目的是（ ） A.培养细菌 B.培养真菌 C.使需要的微生物大量繁殖 D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别 2.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是( ) A.CO2和N2 B.葡萄糖和NH3 C.CO2和尿素 D.葡萄糖和尿素,实践训练,C,D,3.下列说法不正确的是（ ） A.科学家从7080度热泉中分离到耐高温的TaqDNA聚合酶 B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数的估计值 C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度 D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量