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文档简介
1、生活饮用水微生物指标检查,1,检查标准:GB 5750-2006生活饮用水卫生检查规范,2,确定实验目的和要求,取水规则和注意事项。熟悉常用卫生细菌学指标。熟悉真菌总数、大肠杆菌群、耐热大肠杆菌群的测定方法及检验意义。学习对检测到的水样进行综合分析。3,生活饮用水的微生物指标,4,水微生物检查的意义,水的微生物污染问题日益严重。各种水域,特别是受污染的水域,有大量有机物,适合各种微生物的生长。水中微生物污染的袁泉:土壤、人类和动物粪便污染。水体中少数病原微生物(主要是人或动物粪便污染)可以传播部分肠道传染病。水微生物检查可用于评价水质状况,预报水质的污染趋势,确保水质的卫生安全。5,在实际工作
2、中,对水质卫生质量的评价和控制,不能一一检验水体中可能存在的各种病原微生物。一般选择具有代表性的微生物或一种微生物作为指示菌,通过对指示菌的检查,可以知道水体是否有污染的微生物,是否有肠道医院微生物存在的可能性。(威廉莎士比亚、微生物、微生物、微生物、微生物、微生物、微生物、微生物、微生物、微生物),6,水中微生物的检测指标,菌落总数(aerobic bacterial count)在营养琼脂培养基中为1毫升检测的意义:作为一般污染的指标,评估被检样品的微生物污染程度和安全性。水样集群数越多,水被微生物污染的程度越大,医院微生物存在的可能性就越大,但无法解释污染的来源。7,水质微生物的检查指标
3、,整个大肠杆菌群(coliform bacteria)是指氧气和兼容生厌氧,37生长时发酵乳糖,24小时内产生产气的革兰阴性无菌者。检测的重要性:作为粪便污染的指标。水样总大肠杆菌种群的含量表明水被粪便污染的程度,间接表明肠道病原体存在的可能性。8,耐热大肠杆菌群,耐热大肠杆菌群:4444.5中与大肠杆菌群具有相同发酵和生化性能的菌群。注:我国习惯性地将耐热大肠杆菌群称为“粪大肠菌群”。9,10,实验内容,水样采集;殖民地总数的确定;总大肠杆菌群的测定;耐热大肠杆菌群的测定。11,微生物指标常规检查过程,水样,总大肠杆菌群,总菌落数,报告,报告,阴性,耐热大肠杆菌群或埃希菌,阳性,报告,12,
4、1,水样收集样本集装箱:选择无菌硼硅酸盐玻璃瓶和聚乙烯塑料瓶不能成为新的污染源。吸收或不吸附要测试的特定组件。与要测试的组没有反应。从样品到分析期间,确保每个抽样组的浓度不变。微生物样品必须按照一般无菌操作的基本要求采集,并保证在运输储存过程中不受污染。14、取水、自来水:首先用火焰消毒自来水3min,然后打开水龙头,放入5 min(常用水龙头排水13min)水,在无菌玻璃瓶中采集水,占约80%的容量,使水均匀摇晃。水源水样本:选择具有代表性的场所和可疑的场所,一般在水面下1015cm采样。取样后,盖上瓶塞,从水中取出。15,收集水样,注意事项严格无菌操作。标记:取水后,应立即记录水名、地点、
5、时间等。速送检查。水样从采集到检查,超过2h渡边杏,如果在4下保管,超过24h渡边杏。16,实验前准备,1,灭菌吸管10毫升,1毫升刻度吸管分别包装,160干烤2h杀菌2,9毫升灭菌生理盐水3,相应灭菌培养基4培养基:营养琼脂设备:放大镜/菌落柜台,18,菌落总板计数法,19,菌落总板计数法,方法将水样摇晃20次左右,以分散细菌。倒入培养:无菌吸收1毫升水样分别放在两个公平碗中,另一个进行空白对照。在扁平的碟子中旋转15毫升阵地(约45),当阵地变硬时,反向混合3748h。菌落数:用肉眼或放大镜检查,数平盘中的菌落数。20,殖民地总数板数法,结果分析和报告计算平均殖民地数:报告方法:殖民地总数
6、(cfu/ml)。Cfu:colony forming units抽样殖民地数为l100时,根据实际数报告。如果大于100,则使用两位有效数字报告。国家标准(GB5749-2006)规定,生活饮用水细菌总数每毫升不超过100个。21,(b)水源、器材及试剂无菌1毫升吸管6/组,无菌10毫升吸管1/组。无菌板9个/组,营养琼脂。一瓶90毫升灭菌盐水(内建适量玻璃珠),3根9毫升灭菌盐水管。22,方法稀释水:无菌吸入10毫升混合水90毫升灭菌水瓶,与1:10水样混合。取1:10水样品1毫升,在9ml灭菌试管中均匀混合1:100水样品。用同样的方法稀释,用1:1000,1336010000计数样品稀
7、释。23,方法倒入培养:用1毫升无菌吸管吸出23个适当浓度的稀释液1毫升,分别注入无菌平皿,每稀释度同时建立2个名声,另一个平碗作为空对照。再灌注培养。殖民地数量:方法和饮用水。24,测定殖民地总数,25,结果分析和报告计算不同稀释度的平均殖民地数:稀释度选择和殖民地总数报告方法:首先选择平均菌落在30300之间的计算。计算方法和报告方法见表1。总殖民地数平板计算法,26,表1稀释度选择及总殖民地数报告方法,27,表2可以确定水质受污染的程度。表2一般水源水群落数与水清洁度的关系,28,注意事项群落总数测定中应选择适当的稀释度。(生活饮用水,按照国家标准,每毫升不能超过100个,因此可以从1毫
8、升直接吸收到平板上培养)在每个稀释管、相应的碗上做标记。包括水样名称、稀释度、时间、组。严格的无菌操作。稀释水样时,每个稀释度都要更换吸管。浇的时候要注意营养琼脂的温度。倒阵地后要匀和,阵地凝固后要反过来培养。29,3,总大肠杆菌群的测定多管发酵法分为3个阶段。超发酵实验板分离复发酵确认实验,30,多管发酵法,定义:总大肠杆菌群是指培养37至24h可发酵乳糖、产气、需氧、兼性湿氧的革兰阴性无孢子菌。培养基:乳糖蛋白培养液2倍浓缩乳糖蛋白培养液李红美蓝培养液设备:显微镜,31,32,第一次发酵实验:利用乳糖蛋白培养液37培养24h,观察产气情况。平板分离:对阳性管培养物接种到李红美蓝培养基上,观
9、察菌落特征,进行革兰氏染色和镜检查。复发酵确认实验:接种典型的可疑菌落、乳糖蛋白培养液,进行复发酵确认实验。结果报告(MPN):根据附加至标准的搜索表报告结果(MPN),最有可能的数目。33,产气,超发酵,复发酵实验结果,34,多管发酵法结果,大肠杆菌群的李红尾蓝培养基典型菌落特征,大肠杆菌群革兰氏染色下的形态,35,耐热大肠杆菌群,多管发酵法耐热大肠菌群(Therma,36)埃希菌属:粪源特异性耐热大肠杆菌军人克雷伯菌属(阴沟肠杆菌和伯氏柠檬酸菌)。注意:耐热大肠杆菌不能在排水系统中繁殖。但是管网中有足够的营养物质(胜火山少量10/mgL以上)牙齿,管网中没有余氯的情况除外。37,耐热大肠杆菌群测定,1.2主要用途的埃希大肠杆菌是最准确、完全的粪便污染指示。耐热大肠杆菌的检测可以认为最近水体直接或间接被粪便污染。注:根据GB/5749-2006,饮用水检测总大肠杆菌群时,应检查耐热大肠杆菌或埃希氏大肠杆菌。38,多管发酵法,定义:将自然环境中的大肠杆菌群与粪便中的大肠杆菌群区分开来,44.5也能生长的大肠杆菌群称为耐热大肠杆菌群。培养基:EC培养基李红米蓝琼脂设备:无特殊设备,39,检查阶段,超发酵(大肠杆菌群),24小时耐
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