菊花的组织培养 (3)ppt课件

1、,组织培养,1,课题1 菊花的组织培养,2,3,1、熟悉植物组织培养的基本过程 2、了解植物组织培养的影响因素 3、掌握植物组织培养的操作过程,4,什么是细胞分化？细胞分化的原因和结果？. 植物组织培养应用的理论基础是什么? 愈伤组织是怎样形成的？有什么特点？ 组织培养的过程？脱分化、再分化？ 植物组织培养的基本过程 影响组织培养的因素？ 菊花组织培养的过程，及注意的问题？,躬 学,5,1、细胞分化 2、细胞的全能性 3、愈伤组织 4、脱分化 5、再分化 6、外植体,需要了解的几个概念,6,1、细胞分化：植物的个体发育过程中，细胞在形态、结构和生理功能上都会出现稳定性的差异，形成这些差异的过程

2、就叫做细胞分化。细胞分化是基因选择性表达的结果。 2、细胞的全能性：已分化的植物细胞仍然具有发育成为完整个体的潜能。 3、愈伤组织：由离体的植物器官、组织或细胞在一定的培养条件下经过脱分化过程形成的组织，就叫愈伤组织，愈伤组织的细胞排列疏松而无规则，是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞。 4、脱分化：由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程，称为脱分化，又叫去分化。 5、再分化：脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官，这个过程叫做再分化。 6、外植体：用于离体培养的植物器官或组织片段。,7,愈伤组织：离体的植物器官、组织或细胞通过脱分化形成的疏松而无规则的，高度

3、液泡化的呈无定形状态的,未分化的薄壁细胞,2-3周，愈伤组织开始形成。,8,再分化：愈伤组织继续培养，重新分化成根和芽等器官的过程。,3-5周之后，诱导出的新叶片和芽。,9,离体的植物器官、组织、细胞,脱分化,愈伤组织,再分化,根 芽,植物体,植物组织培养的基本过程,10,（二）影响植物组织培养的因素,材料的选择、营养成分、激素、一定的外界因素（温度、空气、无菌环境、适合的PH、适时光照等）。,11,MS固体培养基成分及比例,同微生物培养基相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？,12,微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同，MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必须

4、的大量元素和微量元素两大类。,阅读课文，思考以下问题,1. 同微生物培养基相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？,2、你认为组织培养过程中，成功的关键有哪些？这些步骤的适宜条件是什么？,组织的脱分化及愈伤组织的再分化。,植物组织培养过程中，影响植物细胞脱分化、再分化的最重要因素是植物激素。,13,激素配比对组织培养的影响,在培养基中需要添加生长素和细胞分裂素等植物激素，其浓度、使用的先后顺序、用量的比例等都影响结果。 高 利于根分化、抑制芽的形成 生长素/细胞分裂素 低 利于芽的形成,适中 利于愈伤组织的形成,14,活动2： 用自己的话把菊花组织培养的操作流程给描述出来?（提示：怎样配制MS

5、培养基?外植体消毒应如何进行?接种、培养、移栽时应注意什么问题? ）,15,二、实验操作,（一）制备MS培养基 （二）外植体消毒 （三）接种 （四）培养 （五）移栽 （六）栽培,实验操作流程：,16,2、实验具体操作,二、实验操作,（1）制备MS固体培养基,实验室一般使用_保存的配制好的培养基母液来制备,配制各种母液,配制母液时，大量元素浓缩_ ，微量元素浓缩_ ，常温保存。激素类、维生素类以及用量比较小的有机物可以按照_的质量浓度单独配制母液。 用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量。,1mg/ml,4,10倍,100倍,17,二、实验操作,配制培养基。,2、实验具体操作,

6、（1）.制备MS固体培养基,实验室一般使用_保存的配制好的培养基母液来制备,4,植物激素,在菊花组织培养中，可以不添加_ ，原因是菊花茎段组织培养_ 。,比较容易,配制培养液,调PH,培养基的分装,18,二、实验操作,灭菌,将分装好的培养基连同其他器械一起进行 _。,2、实验具体操作,（1）.制备MS固体培养基,实验室一般使用_保存的配制好的培养基母液来制备,4,高压蒸汽灭菌,19,2、实验具体操作,二、实验操作,（2）外植体消毒,选取菊花茎段时，要取 _。,流水冲洗,酒精,无菌水,氯化汞,无菌水,消毒流程：,浓度_ 摇动_次 时间_s,浓度_ 时间_min,至少清洗_次 漂净_,生长旺盛的嫩

7、枝,70%,23,67,0.1%,12,3,消毒液,20,不是。对外植体进行表面消毒时，既要考虑到消毒效果，又要考虑到植物的耐受能力。,在外植体消毒过程中，是不是强度越大越好，为什么？,思 考,？,21,2、实验具体操作,二、实验操作,（3）接种,前期准备：用_消毒工作台，点燃酒精灯。所有工作都必须在酒精灯旁进行，器械使用前后都要用_灭菌。,接种操作：插入外植体时_端朝上，每个锥形瓶接种_个外植体。,70的酒精,火焰灼烧,形态学上,68,22,你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？,思 考,？,每种材料或配方至少要做一组以上的重复。设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的锥形瓶，与接种

8、操作后的锥形瓶一同培养，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。,23,2、实验具体操作,二、实验操作,（4）培养,接种后的锥形瓶最好放在_中培养。培养期间定期进行_，温度控制在_，并且每天用日光灯光照_h。,无菌箱,1822,12,消毒,了解： 光照条件,24,2、实验具体操作,二、实验操作,（5）移栽,移栽生根的试管苗之前，应先打开封口膜，在培养间生长几日；然后用流水清洗_，将幼苗移植到_等环境中生活一段时间，进行壮苗。最后进行露天栽培。,根部培养基,消过毒的蛭石或珍珠岩,25,1、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌） 2、外植体的消毒（酒精、氯化汞） 3、接种的无菌操作（酒精、酒精灯灼烧） 4、无菌箱中的培养； 5、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。,在整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？,思 考,？,26,三、结果分析与评价,（一）对接种操作中污染情况的分析 （二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化 （三）是否进行了统计、对照与记录 （四）生根苗的移栽是否合格,27,外植体在培养过程中可能会被污染，你认为造成污染的原因有哪些？污染物如何处理？,思 考,？,28,结合录像外植体灭菌与接种操作，谈谈组织培养污染的主要途径及怎样预防污染？,29,污染的预防措施,（一）防止外植体带菌 （二）保证培养基及接种器具彻底灭菌 （三）操作人员严格遵守无菌操