VE含量测定.ppt

1、维生素e含量的测定应该采用什么样的方法？ 化学性质：1.可以用硫酸铈定量氧化.铈量法2 .氯化第二铁元素反应生成的亚铁离子起作用形成有色结合物进行间接测定(氯化第二铁元素2、2联吡啶比色法)，(1)铈量法1，原理： VE用硫酸加热回流，水解作用于生育酚， 使用硫酸铈的终点：浅黄色的灰色紫空白对照试验. 2，反应条件(1)VE优选在H2SO4酸性条件下水解作用。 碱溶液中的游离生育酚容易氧化。 Ce(SO4)2液滴定在酸性溶液中进行，在碱性中生成碱式盐影响测定。 (2)Ce(SO4)2溶于酸水溶液，不溶于醇，-生育酚溶于酸，不溶于水，滴定过程中需要一定浓度的乙醇。 (3)本法适用于纯度高的VE供

2、试品。检查方法取本品0.10g，加入无水乙醇5ml溶解后，加入1滴二苯胺试验液，用硫酸铈滴定液(0.01mol/L )滴定，由消耗的量补正硫酸铈滴定液，紫外分光光度法原理：维生素e在碱溶液中加热水解作用生成游离生育酚，氯化第二铁元素后者联吡啶但是，操作麻烦，专业性不强，容易干扰作用，现在被GC代替了。 含量测定的物理化学性质：1.紫外分光光度法：不适用，2 .色谱法简便快捷，专业性强。 特别适用于多种维生素制剂中的维生素e的测定。 3 .从荧光分光光度法、气体色谱法(chp )六十年代开始研究维生素e的气体色谱法。 GC的特点是选择性好、灵敏度高、快速分离性能好，利用气体色谱法(GLC )测定

3、维生素e的优点是能够分离维生素e、其同分异构体和杂质，能够选择性地测定维生素e。 适当测定纯度不高的维生素e和维生素e制剂。 中国药典测定的维生素e及维生素e制剂均采用气体色谱法。 (二)气体色谱法1、色谱分析法条件及系统适应性试验柱：2m4mmI.D .西林瓶柱、硅藻泥(80-100目)或高分子多孔质球团矿固定相：硅酮(OV-17 ) 含有5%涂布浓度为2%的填充固定相： 30- 32分钟优选的柱温度： 265内标准： n-正十三烷检测器： FID (氢火焰络离子化检测器)、4、溶液制备：内标准溶液： n-正十三烷的环已烷溶液(1.0mg/ml ) 对照溶液3 .供试品测定f Ax Ms A

4、s Ax :供试品的峰面积f :校正因子As:内标准物的峰面积，2，系统适应性试验： n 500 (用维生素e修正) R2(维生素e和内标准物n十二碳烷的分离度)，mg=、 不存在于内标法样本中的物质和被测成分的峰附近能量可以与各成分完全分离，接近被测成分的量，用定量法：内标法计算校正因子、1、k、a、a、=、内、对、2、k、a、a， 添加=的粒径为5l0m的十八烷基硅烷键硅凝胶固定相流动相：填充甲醇-水(49:1 )紫外检测器的波长为292nm的维生素e在冰乙酸维生素e之前出现峰，主峰的分离度必须大于2.6。 重现性试验，即重复3次，峰高度的相对标准偏差低于0.8%。 2、测定方法：将供试品

5、液和对照品液分别20l注入高速液相色谱法，记录峰高HX和Hr 3，修正为供试品中的维生素e的量mx(mg)=式中： mr为生育酚对照品的量，HX、Hr为生育酚供试品维生素e的荧光分光光度法、云同步扫描直接(内源)荧光法的原理：维生素多含有芳香环结构(大的共轭键结构)，其本身具有强天然荧光，因此可以利用内源荧光检测维生素。 血液中的维生素E 295nm被激发，用325nm进行了测定。 如果在扫描中激发波长(ex )与发光波长(em )之间保持一定的波长间隔em- ex=(在本实验中为常数40nm )，则同步荧光的信号强度与被测定物质的浓度成比例，实验中确定的原则：能够去除或减少溶剂Raman的直

6、接295nm激发、325nm激发溶剂Raman光谱大幅度干扰作用测定！ 同步荧光扫描技术(可变角同步扫描技术)，(3)荧光分光光度法，1、药物自身具有的荧光2、溶剂拉曼光谱影响测定方法的灵敏度和精确度3、同步荧光扫描法测定、干扰作用去除、同步荧光扫描法测定血清中的VitE含量4 .样品液的制备：样品测定管u， 标准管s、空白对照管B 5、测定方法： Fu、Fs、Fb 6、校正：定波长同步荧光法在扫描中在激发波长和发光波长之间保持一定的波长间隔(=em- ex=常数)的定波长同步荧光法中，的选择十分重要，直接影响同步荧光色光谱的形状、带宽、信号强度。 在可能的条件下，理论上选择与串扰的位移相等的，但是实际上通过实验大多优选，例如在：荧光黄、若丹明6g和若丹明b的同步荧光分析中=3nm，此时得到的同步荧光色光谱峰值信号相互不干扰作用，增大尽