植物组织培养无病毒苗培养ppt课件

1、第六章无细小病毒植物的培育，1、教学目的和要求，(1)了解植物病毒病的危害和无细小病毒植物的培育意义。 (2)理解和掌握消除植物病毒病的原理和方法。 (3)分离茎尖及培养方法。 (4)掌握无毒苗木的鉴定方法。 (5)掌握脱毒苗木的保存和利用方法。 2、第一节植物病毒病危害和培育无细小病毒植物的意义，细小病毒的原因是消耗细胞球养分，不能通过毒素杀死细胞球，而是利用细胞球内的物质繁殖，干扰细胞球的代谢过程，在细胞球内产生对细胞正常功能有害的异常物质和条件， 植物病毒病病防治比其他植物病害防治困难，给生产带来灾难损失，三、一、植物病毒病危害、植物病毒病已超过600种，严重危害农业生产。 在果树、蔬菜

2、、花卉、林木及农作物中发现。 随着生产栽培时间的推移，危害越来越严重，发现的细小病毒种类也越来越多。 4、细小病毒症状、5、6、危害园艺植物的细小病毒数，7如感染菊花的细小病毒和类细小病毒有19种，如子细小病毒(CAV )潜在细小病毒(CLV) B细小病毒(CVB )轻斑病毒(CVB ) 等4种细小病毒对草莓生产有重大影响的：斑细小病毒(SMoV )草莓黄边细小病毒(SMYEV )草莓镶嵌脉冲细小病毒(SVBV )草莓可丽饼细小病毒(SCrV )、9、甘薯多用户多输入多输出根腐病.甘薯多用户多输入多输出叶点病、甘薯枯萎病(特异性强病毒除外) 对于有性生殖退化只能用无性繁殖法繁殖的植物，一旦感染

3、就会无奈何。 母株患病后，细小病毒在其细胞球内增殖，通过插枝、剪穗、种薯、球根、鳞片传到下一代。 以昆虫为媒介加速传播。11、植株脱细小病毒的意义、植物组织培养脱细小病毒技术是植物细胞工程的重要组成部分，脱毒种苗的生产在提高作物质量和产量方面显示出很大潜力，良种、新品种脱毒组培苗大面积推广应用，有效地解决了细小病毒引起的品种退化问题。 因此，植物组培脱毒技术在农业生产的科学化、现代化方面具有巨大的应用价值和经济效益，能够减少农药的施用，改善生态环境条件，防止病害的蔓延和扩散，该方法已成为农业应用最广泛的生物技术。12、脱毒苗、13、细小病毒活力与温度的关系、14、去除第二节植物病毒病的原理和方

4、法，一、物理学方法： x射线紫外辐射超短波高温可使病素钝化，其中热处理最常用。 15，1 .热处理去除植物病毒病的原理，细小病毒是DNA大分子，细小病毒进入植物细胞球后与植物细胞球的DNA一起复制。 热处理不能杀死细小病毒，使细小病毒活性钝化，延缓植物体内的细小病毒增殖，使其停止增殖，丧失感染能力。 热处理是一种物理效应，与冷处理一样，可以加速植物细胞球的分裂，使植物细胞球在与细小病毒繁殖的竞争中获胜。 (16 )、(1)热水浸渍处理法：将切下的接穗或插秧材料在50左右的温水中浸渍3-15分钟到数小时。 (2)热风处理法：使盆栽植物在35-40的高温下生长发育，热处理空气温度逐渐上升，然后达到

5、所需温度，使云同步保持一定的大气湿度和光照。 然后，在处理后将新生长的枝条剪出成穗和砧木，或者热处理和组织培养结合更有效。热处理脱毒，17，2，愈伤组织热处理脱毒法，方法：从受累株中取出叶(茎片、鳞片、花器均可)进行离体培养，诱导愈伤组织的形成，然后将愈伤组织反复继代培养，与云同步并用热处理。 常用处理温度及处理时间：温度： 37-38小时：处理2周、4周或8周温度： 50小时：3-15min。 反复进行传代兼热处理，经过一定时间(传代次数必要试验)后，将热处理后的愈伤组织转移到分化培养基中，诱导器官分化。 18、果树作物：桃(无黄萎病)、苹果(花叶病)、葡萄(扇叶细小病毒)、甜橙、香蕉、李子

6、、醋栗、梨、浆果、草莓苔子、草莓等。 蔬菜作物：马铃薯、西红柿、菠菜。 花卉植物：蔓生长春花、康乃馨、菊花等。 其他植物：曼陀罗等。 19，如烟草愈伤组织兼热处理钝化烟草花叶病毒(TMV )和黄瓜花叶细小病毒(CMV )获得无细小病毒植株效果的方法：a :从患病烟草植株中取出5mm叶片进行培养，在MS中添加IAA 2mg/L KT 0.2mg/L的培养基中诱导治愈b :部分蚊子c :将热处理后的愈伤组织转移到MS附加IAA 2mg/L KT 2mg/L的分化培养基中诱导芽分化。 d :将d:1cm长的芽移植到MS附加IAA 2mg/L KT 0.02mg/L发根培养基中，诱导根分化。 e :获

7、得完整植株后移植至无毒土壤栽培，进行鉴定。 结果表明，重复继代培养可获得无细小病毒股票。 20，3 .低温处理去除细小病毒，处理菊株-5，4-7.5个月后进行茎尖培养，虽然能够去除矮化细小病毒(CSV )和去绿斑驳细小病毒(CCMV )，但是单独的茎尖培养没有这个效果。 二十一、二、使用化学方法、农药是预防植物真菌病害的主要方法，理论上也应该是预防细小病毒的有效方法。 孔雀石绿、硫尿嘧啶、8 -氮杂胍、细小病毒抑制剂等抑制细小病毒复制的化学物质不少。 例如可以举出Viraz01e (细小病毒男低音)、蛋白质、核酸合成抑制剂等。 由于细小病毒的复制与宿主的代谢过程有着非常密切的关系，因此很难找到

8、既妨碍细小病毒复制又不影响宿主细胞球正常代谢的药物。22、不宜用这些个化合物处理植物整体除细小病毒效果，培养离体组织、细胞球、原生质体等可能有良好的效果。 在培养基中加入2 -硫尿嘧啶可以去除烟草愈伤组织中的PVY细小病毒，加入放线菌素d可以抑制原生质体中的细小病毒复制等。23、植物病毒病钝化、抑制和清除的一些化合物、24、3、生物学方法、1、茎尖培养脱毒(1)茎尖培养脱毒的理论基础a、细小病毒在植物体内的转移是通过维管束系统完成的，在分生组织区域内没有维管组织， 细小病毒是只能通过细胞球间丝传递的b .在分裂旺盛的分生组织内，细小病毒的复制会被旺盛的代谢活动所限制的c .植物分生区域内，“细

9、小病毒钝化系”的活性比其他部位的活性高d .茎尖分生组织内的高浓度植物外源荷尔蒙激素可抑制细小病毒的增殖。 25、(2)茎尖培养脱毒苗的方法，解剖镜下剥去茎尖。 为了提高脱毒效果和成活率，一般以0.20.5mm的茎尖为组织材料进行切取培养，植物茎尖对外来荷尔蒙激素的反应不同。 茎尖大小：过大，接种容易生存，脱毒效果差，过小，难以生存，脱毒效果高。 优选具有12片叶原化学基，大小优选为0.2-0.3mm，超过0.5mm时脱毒效果差。 培养基：只要能使茎尖迅速生长，分化快的培养基就适合脱毒。 一般来说MS好，以一定比例添加分裂素即可。、26、马铃薯芽、27、茎尖结构、28、微茎尖、普通茎尖、29、

10、马铃薯脱毒苗、30、31、康乃馨不同茎尖培养和康乃馨斑细小病毒去除情况，32例：烟草花叶细小病毒(TMV )在以下植物中的荧光反应。 烟草： l-4片叶原化学基未见TMY特异荧光撞击羽矮牵牛：叶原化学基未见TMV特异荧光，而叶原茎可见TMV荧光。 番茄：叶原茎1枚未见TMV特异荧光。 因此，在茎尖培养脱毒时，必须认真确定植物茎尖上的细小病毒分布部位，然后再确定培养茎尖的大小，碰撞羽矮牛：可以提取生长锥或具有叶原化学基的茎尖进行培养的烟草：最好在具有4片叶原化学基的茎尖进行培养。 利用茎尖培养法去除植物病毒病时，优选发现茎原化学基中叶原化学基的数量与孢子(茎尖)大小的相关性，便于取材。 34、茎

11、原化学基0.050.08mm茎原化学基带2枚叶原化学基0.10.2mm茎原化学基带4枚叶原化学基0.30.4mm茎原化学基带6枚叶原化学基0.60.8mm，35、不同细小病毒种相同，36、甘薯斑点花叶病毒， 缩叶马赛克细小病毒：在1.02.0mm以内的茎尖分布的中羽毛状马赛克细小病毒：在0.3-1.0mm以内的茎尖分布的中马铃薯卷叶细小病毒， y细小病毒： 1.0-3.0mm以内的茎尖分布的x细小病毒： 0.2-0.5mm以内的茎尖g细小病毒： 0.2-0.3mm以内的茎尖s细小病毒： 0.2mm以下，37，2 .愈伤组织培养脱毒，植物各部位器官和组织培养脱分化诱导产生愈伤组织，并由愈伤组织再

12、分化产生38、愈伤组织去细小病毒反应历程、可能的原因是，细小病毒在植物体内不同器官或同一器官的不同组织分布不均一，这些无细小病毒细胞球增殖引起愈伤组织得到脱毒苗的基础。 在某些愈伤组织细胞球中，细小病毒浓度较低，在愈伤组织细胞球快速分裂的过程中，细小病毒复制能力降低或丧失。 被继代培养的愈伤组织容易产生抗逆性变异细胞球，可能出现无细小病毒的愈伤组织。 但愈伤组织对脱毒苗的脱毒途径易发生变异，有可能丧失植株本来的优良性状，当然也有可能产生有益的变异，但频率极低。 39，3 .茎尖微体嫁接脱毒，先对砧木种子进行表面消毒，然后接受1%琼脂，在MS无机盐培养基中培养发芽，以苗龄约2周的幼嫩实生苗为砧木

13、。 从试管中取出籽生苗，在无菌条件下切取顶部，上下胚轴部分保留1-1.5cm，去除子叶和腋芽，将根剪短至46cm长。 从田地和温室生长旺盛的成年树上稍微剪下新的顶端，消毒后，在洁净台上用显微操作法只取出叶原化学基13个茎尖约1mm的大小作为穗使用。 采用倒t字形的水平切口。 嫁接苗在液体滤纸桥培养基中培养。 成活率为30P%，成功嫁接的植株在移植到土壤前至少需要2片展开的真叶。 40、苹果微体嫁接茎尖大小和脱毒成功率，41、苹果不同采访时间对微体嫁接成功率的影响，42、试管微体嫁接在果树方面发展最快，(1)嫁接植物不受珠心和有性实生相关幼年阶段的影响。 (2)由于许多栽培品种通过嫁接繁殖了许多

14、世代，果树研究者和栽培者对这些个品种自根苗的根冠大小、病虫害状况及耐寒性等了解不多。 43、(3)茎尖组织培养繁殖结合热处理能产生无细小病毒植物，因此许多研究人员认为，通常采用嫁接繁殖的果树应该用试管嫁接。(4)试管微体嫁接除培育无细小病毒植株外，还能解决难以生根的园艺植物生根问题，进行嫁接亲和性的研究。 44，4 .珠心胚培养脱毒，柑橘类80%以上种类具有多胚性，单胚所占比例小。 柑橘类植物有许多胚品种，一个种子除一个合子胚外，还有数个到数十个珠心细胞球无性胚，称为珠心胚。 因为细小病毒通常是通过维管束的麻纤维状组织进行传播的，而珠心与维管束系统没有直接关系。 珠心组织诱导的植株可以避免细小

15、病毒的危害。 45、与合子胚不同，由于不是受精的产物，而是从体细胞球产生的，所以和具有与母体相同遗传组成的合子胚一样，由于珠心胚和植株之间没有维管组织的连接，即使母体植株感染细小病毒，珠心胚在无毒的自然条件下，珠心胚一般不能发育成熟，而是适时从种子开始这些个植株必须是无细小病毒的母体无性系。 珠心胚有3个特点，46，5 .花药培养脱毒，花药培养的首要目的是培育花药内部来源于花粉粒的单倍体植株，使单倍体倍增，作为育种材料的来源。 但大量实验表明，花药培养所得植株95%以上为开花结果的多倍体，且生长发育优于母株。 愈伤组织培养的花药植株已被证明无细小病毒，采用这种方法，不仅可以快速培育大量无毒植株

16、，而且可省去细小病毒鉴定工作，在基础生产中应用是一举两得的。47、3、分离茎尖培养情况，第一种：生长停止，接种组织扩大，颜色逐渐变化枯死。 这种情况大多是成长点在分离接种中受伤所致，第二是成长太慢，茎尖接种后颜色逐渐变成绿色，但没有增大，最后变成了绿色的小点。 这是由于生长素浓度低或培养温度过低造成的，可以立即转移到高浓度生长素的培养基中，或提高培养温度可以促进茎尖的生长。 48、第三种：生长过于旺盛，接种后茎尖明显增大，约培养在一起时茎尖基部会产生愈伤组织，但未见茎尖延伸，组织颜色也浅。 这是因为培养茎生长素浓度高或光弱，温度高。 因此，必须将培养材料转移到生长素浓度低的培养基中，或者降低温

17、度，提高光强度来解决。 否则，时间延长愈伤组织显示生长分化能力的第四种：生长正常，营养、荷尔蒙激素、温度、光等各方面条件正常时，接种的茎尖颜色逐渐变为绿色，基部逐渐增大，有时形成少量愈伤组织，茎尖也逐渐伸长，培养1个月左右即可形成无化学基素的基础培养基茎尖持续生长，根系生长，第49节无细小病毒植株脱毒工艺，一、材料准备1选择植物的种类和品种。 以生长结实遗传性一致的品种为材料，明确了从该品种脱离的细小病毒在寄主上的位置。 2了解该植物体内细小病毒的种类和危害程度。 根据植物所具有的细小病毒的种类，选择指示植物(敏感植物)。 3决定去除细小病毒的方法：“茎尖培养”、“热处理”还是“微体嫁接”。50、2、生长点的分离和培养(以茎尖培养为例)，1从患病植株上切下顶芽或腋芽。 2决定材料表面的灭菌、灭菌药剂、浓度、时间。 3从宿主内的细小病毒分布位置决定切取茎尖的大小。 如果进行热处理，就决定热处理的温度、时间。 4接种成功率与茎的形状结构有关。 例马铃薯、百合生长点呈半圆形，大，易分离。 甘蔗多用户多输入多输出、矮牛、香石竹呈半圆形，比较容易分离。 大丽菊、菊花点平