ABO亚型鉴定ppt课件

1、2012.03,ABO亚型,武汉亚洲心脏病医院检验中心,1,A和B抗原是红细胞膜表面糖蛋白、糖脂分子的糖类决定簇。 A抗原末端糖基:N-乙酰氨基半乳糖 B抗原末端糖基:D-半乳糖。,ABO抗原不是ABO基因的直接产物,ABO血型分子生物学基础,2,ABO亚型理论,3,A亚型分类依据,红细胞上的A抗原依次减少，H抗原的活性则相对增强幻灯片 3,1、红细胞被抗A及抗A1凝集的程度 2、红细胞被抗AB凝集的程度 3、红细胞的H反应性程度 4、血清内有无抗A1抗体 5、分泌型人唾液内具有的A及H物质,抗-A1 抗-AB 抗-H A2C,抗-A、抗-B、AC、BC、OC,亚型试剂,常规试剂,4,5,A1

2、和A2,占A型的99.99% 血清学区别：依赖抗-A1,1、如无抗-A1，A1和A2不需加以区分。 2、产生抗-A1的频率，A2型为1%-8%；A2B型为22%-35%。 3、抗-A1在37反应才具有临床意义。,6,A3和Aend,两者均呈现mf外观,1、A3凝集细胞占60%；Aend凝集细胞占10%，Aend需多次离心 才能被发现。 2、出现mf时，要进行临床调查，了解患者是否是为白血病或骨 髓移植，如疑是疾病原因造成，应慎报亚型。,7,Ax、Ael和Am,Ay极罕见，表现型与Am很相似,8,各种弱A亚型的鉴别要领,9,B亚型,B3、Bx、Bel、Bend、Bm 血清学特点同相应A亚型 不同

3、之处，鉴定时不需抗-A1试剂，及A2细胞,10,AB亚型,A2B、A3B、AxB、AmB、AelB、AendB、AB3、ABx、ABm、ABel、ABend 同A亚型和B亚型的血清学特点 不同之处：不需抗AB血清鉴定；与抗H的凝集强度弱，呈w/0，同A1B,11,cisAB,cisAB是一种罕见的ABO亚型，人群中的发生率非常低，大约在170000到580000之间。 最早出现起源于亲代与子代的ABO血型是遗传的矛盾，按照ABO三复等位基因学说和孟德尔遗传定律，AB和O型的双亲不可能生下AB型或O型的子代。 分子机理：在A等位基因的基础上发生了碱基错义突变，变异的A基因具有编码双功能活性酶的能

4、力，血清学除了表现A抗原的特异性外，还表现少量B抗原的特异性。 血清学特点：A抗原接近正常或弱略于正常；B抗原较正常弱很多；,12,B（A）,同cisAB的遗传方式相似，也是一种罕见的ABO亚型， cisAB是在1964年发现，B(A)是在1985年发现； 分子机理：被认为是遗传学上的B型，在B基因基础上发生错义突变 ，由于单碱基突变，变异的B基因具有编码双功能活性酶的能力，血清学除了表现为B抗原特异性外，还表现为少量A抗原特异性。 血清学特点：较弱的A抗原和接近正常的 B抗原特异性，血清中有较强的抗-A。,13,cisAB、B(A),正常AB型，A和B等位基因分别位于9号同源染色体的ABO位

5、点上，分别从父方或母方遗传得到。 极少数人类个体的一条9号染色体上存在一个cisAB或B（A）基因，它编码的酶具有双功能活性，可以同时催化A抗原和B抗原的合成。 cisAB的A抗原接近正常，B 抗原较正常弱很多；B(A)的B抗原接近正常，A抗原弱很多。 cisAB或B（A）血清中存在针对弱抗原产生的不规则抗体 与抗H反应强度仅次于甚至接近与O细胞。 血清学方法判断为AB亚型，需分子生物学验证 cisAB或B（A）是从一个亲本遗传而来的，因此基因型是cisAB / O或 B（A） / O，表现型为AB型。 带有cisAB或B(A)等位基因的个体，若与O型血的人（基因型O / O）生育，子女的血型

6、可能表现为AB型或O型，而不像通常AB型血与O型血的父母只能生出A或B型血的子女。,14,孟买型和类孟买型,孟买型和类孟买型在ABO血型系统中为罕见的稀有血型，常因交叉配血不合而被发现。 为红细胞上H抗原缺乏而使ABO血型物质不能正常合成的一类血型。 遗传特点：与A、B基因相对独立的H-h系统是hh纯合子，不能合成表达A或B基因的前提物质-H物质,15,孟买型和类孟买型,血清学特点,血清学方法繁琐，结合正反定型、抗体筛选、吸收放散试验、唾液中的血型物质测定以及家系调查来综合分析。分子生物学方法进行ABO基因定型简便、快速、可靠，成为输血医学的研究热点。,16,ABO正反定型不一致,17,ABO

7、正反定型不合原因分析,同种抗体 A亚型,缗钱状凝集 冷自身抗体,AB型的亚型,同种抗体 A型 抗-H,O型 A亚型,同种抗体 孟买型,同种抗体,18,ABO正反定型不一致,红细胞三洗 6管：-A、-B、AC、BC、OC、自身C 正常：2管强凝集，其他4管阴性 （正定型4+；反定型2+） 异常：1、出现其他的凝集（不规则抗体) 2、不到2管强凝集（ABO亚型、抗原、抗体减弱）,不规则抗体,亚型,6管反应结果,19,ABO亚型鉴定流程,1、人-A、 人-B 2、-H (新鲜BC、OC对照） 3、-AB (单独A亚型、B亚型） 4、-A1 (A亚型的鉴定) 5、排除其他不规则抗体,H抗原强弱：OA亚

8、/B亚 B AB亚型 A1 A1B,20,ABO亚型案例分析,21,案例1,Step1,正定型 多次离心 4反应 吸收放散,反定型 多次离心 4 反应 加大血清量 吸收放散,增强抗原抗体反应,分析：1、强凝集1管，弱凝集2管。 2、B抗原减弱，血清中存在正常抗A,同时还有与BC反应的弱不规则抗体 3、怀疑B亚型 4、进一步实验：,22,Step2,Step3 关键步骤,考虑到人源抗血清效价比较低的缘故，并未得到预期的结果，但4显示有B抗原存在，与抗-AB也未见增强,H抗原：OA亚/B亚 B AB 亚型 A1 A1B,23,根据以上的反应格局，高度怀疑Bx,鉴于Bx亚型的血清学特征，即为血清中存

9、在能凝集常规BC的抗体，为减少偶然性，选择健康B型2份，O型2份（对照），分别与待检血清反应,排除其他不规则抗体，进一步证实为不规则抗B,Step4,24,根据以上结果，该病例红细胞上有弱的B抗原，血清中有强的抗A 和弱的不规则抗B,红细胞与抗H呈强阳性凝集，根据血清学格局，初步判断为Bx亚型，须经分子生物学实验进一步确认。,结论,25,案例2,Step1,分析：1、强凝集只有1管，弱凝集有2管。 2、A抗原减弱，血清中有正常抗B，同时还存在 与A1C反应的比较弱的不规则抗体 3、怀疑A亚型 4、进一步实验：抗-A1 、抗-AB、抗-H，A2细胞,26,Step2,与抗-A1不反应，为A亚型；

10、同时与抗-AB凝集增强，进一步证明为A亚型,血清与A1C反应，与A2C不反应，证明存在不规则抗-A1抗体,Step3,27,Step4,H抗原增强，凝集强度与O细胞相当,根据以上的反应格局，高度怀疑Ax。,排除其他不规则抗体，进一步证实为不规则抗A1,Step5,28,结论,根据以上结果，该病例红细胞上有弱的A抗原，血清中有强的抗A 和弱的不规则抗A1,红细胞与抗H呈强阳性凝集，根据血清学格局，初步判断为Ax亚型，须经分子生物学实验进一步确认。,29,案例3,Step1,分析：1、强凝集1管，弱凝集2管。 2、A抗原减弱，B抗原正常，血清中存与AC反应的弱不规则抗体 3、怀疑A亚型B 4、进一

11、步实验,30,Step2,与抗-A1不反应，为A亚型,血清与A1C反应，与A2C不反应，证明存在不规则抗-A1抗体,Step3,31,Step4,H抗原未见增强，因为有正常的B基因,根据以上的反应格局，高度怀疑AxB,排除其他不规则抗体，进一步证实为不规则抗A1,Step5,32,案例4,Step1,AxB? B(A)?,33,Step2,Step3 PS+A2C,人-A并未得到预期的结果。抗-A1不反应，初步判断为A亚B。仍然不能区分是AXB还是B(A),排除AXB，AXB与A2细胞不反应，此点是鉴别B(A)与AXB最有价值的依据之一,34,Step4,AXB与抗-H呈弱凝集，而B(A)与抗

12、-H呈强凝集，这也是区分两者的一个非常重要的标记,结论：根据以上血清学实验，初步定为B(A)亚型，须经分子生物学实验进一步确认。,B(A)亚型的特点：1、红细胞上A抗原减弱，B抗原基本正常 2、H抗原增强，与O细胞H抗原相当 3、血清中的抗-A与A1、A2细胞均有反应 B(A)与AXB的区别：1、B(A)的H抗原增强，AXB不增强 2、B(A)的血清与A1、A2细胞均反应；AXB只与 A1 细胞反应。,35,案例5,Step1,分析：1、强凝集1管，弱凝集2管。 2、A抗原正常，B抗原减弱，血清中存与BC反应的弱不规则抗体 3、怀疑AB亚型 4、进一步实验：,36,Step2,Step3,人源

13、抗血清显示有正常A抗原，有比较弱的B抗原。此处增加抗-A1的目的用以区分CisAB,H抗原未见增强，CisAB呈4+,两者可区分,37,根据以上的反应格局，怀疑ABx,排除其他不规则抗体，进一步证实为不规则抗B,Step4,38,案例6,Step1,分析：1、强凝集1管，弱凝集2管。 2、A抗原正常，B抗原减弱，血清中存与BC反应的弱不规则抗体 3、怀疑AB亚型 ABx? CisAB? 4、进一步实验：,39,Step2,与抗-A1不反应，说明A抗原为非正常A1型。初步排除ABX,40,Step3,ABx与抗-H呈弱凝集，而CisAB与抗-H呈强凝集，这是区分两者的一个非常重要的标记,结论：根

14、据以上血清学实验，初步定为CisAB亚型，须经分子生物学实验进一步确认。,cisAB亚型的特点：1、红细胞上A抗原基本正常，B抗原弱于正常B抗原 2、H抗原增强，与O细胞H抗原相当 3、血清中存在弱的抗-B cisAB与ABx的区别：1、 cisAB的H抗原增强，ABx不增强 2、 cisAB的红细胞与抗-A1不反应；ABx与抗-A1反应,41,案例7,Step1,分析：1、强凝集1管，弱凝集1管。 2、O型：抗-B减弱 ？ 3、B亚型：B抗原未检出，血清中有不规则抗B? 4、进一步实验：,42,Step2,Step3,人源血清和抗-AB均显示不反应。,H抗原增强，B亚型和O型仍然无法区分。

15、由于该标本为健康献血员，无其他疾病史，可排除抗体减弱的可能。进一步实验，证明是否存在B抗原。,43,Step4 吸收放散试验,PC OC（对照）,4 1h,离心吸出上清,4NS洗涤6次,56热放散10min,立即离心,吸出上清液（放散液）,再次离心,放散液中加入BC，4 过夜,人-B,离心看结果,证明有B抗原存在,44,根据以上的反应格局，怀疑Bel,排除其他不规则抗体，进一步证实为不规则抗B,Step5,45,结论,根据以上血清学试验，初步鉴定为Bel型。 其特点： 红细胞上仅有很少量的B抗原，常规的血清学方法难以检测出，需通过吸收放散试验才能证明 血清中通常存在不规则抗B 需与抗B减弱的O型相区别,46,案例8,Step1,分析：1、强凝集1管，弱凝集呈mf。 2、mf：疾病原因、异型输血、嵌合体、骨髓移植、亚型 3、怀疑A3B 4、进一步实验：,鉴定血清中是否存在不规则抗-A1，排除,47,Step2,Step3,人-A也显示为mf,H抗原未见增强,48,结论,根据以上血清学试验，可初步鉴定为A3B，进一步进行分子生物学试验确定 特点： 红细胞与抗-A、抗-AB反应，表现为mf，大约有60%凝集，周围有约40%未凝集红细胞 血型鉴定当出现mf外观时，对于白血病患者不轻易报亚型,49,我科案例,Step1,AxB? B(A)?,长春博得,南京欣迪,