高中生物微生物的培养ppt课件

1、第一课时 微生物的培养,巴蜀名校高三备课组,1,1.了解有关培养基的基础知识，掌握无菌操作技术的有关内容。 2.了解消毒和灭菌常用的方法及二者的区别。 3.学会以大肠杆菌为材料进行微生物培养与分离纯化的方法。,一 目标导航,一、培养基与无菌技术 1培养基 (1)概念：人们按照微生物对_的不同需求，配制出供其_的_。 (2)成分：一般含有_、_、_、_，此外还要满足微生物对_(即生长因子)、_以及氧气的需求。,营养物质,生长繁殖,营养基质,水,无机盐,碳源,氮源,特殊营养物质,pH,2,微量有机物,碳元素,细胞物质,代谢产物,能源物质,氮元素,3,(1)不同种类的微生物，对碳源的需要差别较大。,

2、(2)微生物最常利用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖；最常利用的氮源是铵盐、硝酸盐。,(3)对异养微生物来说，含 C、H、O、N 的化合物既是碳源又是氮源和能量来源。,(4)微生物之所以需要补充生长因子，往往是由于缺乏合成这些物质所需要的酶或合成能力有限。,备注：,拓展深化,.葡萄糖、氨基酸、氨气、牛肉膏、玉米粉等物质在微生物营养中的作用？,葡萄糖,提供C源和能源,构成生物体的细胞物质和代谢产物.,氨基酸,提供生长因子,N源,C源和能源,氨气,提供N源和能源（硝化细菌的化能合成作用）,4,微生物培养与植物组织培养的营养成分区别？,大肠杆菌、硝化细菌、乳酸菌等微生物营养类型。,牛肉膏,天然培养基，主要

3、提供C源、磷酸盐和维生素、N源。,玉米粉,主要提供C源与能量,大肠杆菌：异养兼性厌氧型,硝化细菌：自养需氧型,乳酸菌：异养厌氧型,根据不同的微生物营养类型不同，选择配制不同的培养基。,由可以得到什么结论？,5,1不同的微生物对营养物质的需要各不相同。下列有关一种以CO2为唯一碳源的自养微生物营养的描述中，不正确的是() A氮源物质为该微生物提供必要的氮素 B碳源物质也是该微生物的能源物质 C无机盐是该微生物不可缺少的营养物质 D水是该微生物的营养要素之一,B,自养微生物与异养微生物的营养什么区别呢？,6,(3)培养基的种类,液体,固体,工业生产,分离,鉴定,琼脂,天然,合成,选择,抑制,促进,

4、分离,鉴别,鉴别,7,纯化大肠杆菌、分离分解尿素微生物、分离细菌与真菌混合菌的培养基类型是什么？,拓展深化,病毒目前的利用人工培养基来培养方法？,需接种在动、植物组织细胞中才能繁殖。常用于培养病毒的是活鸡胚。,2下列说法正确的是() A培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质 B培养基只有两类：液体培养基和固体培养基 C除水以外的无机物只能提供无机盐 D无机氮源不可能提供能量,选择培养基,A,8,植物组织培养技术、微生物培养技术和无土栽培技术的比较,在无菌条件下，将离体的植物体器官或组织接种在适当的培养基上进行培养，最终发育成完整植物体,在无菌条件下，在适宜的营养和环境条件下对微生物的培养,将

5、植物生长发育过程中所需各种矿质元素按一定比例配成营养液，并利用这种营养液栽培植物,水、矿质元素、蔗糖、维生素、有机添加物和植物激素等,水、无机盐、碳源、氮源（异养微生物还加生长因子）等,水、必需矿质元素,严格控制无菌操作，在培养过程中要更换培养基，调节细胞分裂素和生长素的比例和添加顺序。,严格控制无菌操作，整个培养过程无需更换培养基,适宜的环境条件，基质垫底并固定幼苗，不需要保证无菌条件，注意溶氧和矿质元素的浓度。,9,3.下列关于植物组织培养、微生物培养和无土栽培技术的比较的有关说法中，不正确的是（ ）,A 微生物培养和无土栽培技无需更换培养基，植物组织培养需更换培养基,B 植物组织培养、微

6、生物培养需要严格控制无菌操作，植物组织培养不需要,C 三者都需要加入水、矿质元素和一些必要的有机物,D 三者培养的目的和原理各不相同,C,10,知识总结归纳,1.加入青霉素的培养基:,分离酵母菌、霉菌等真菌,2.加入高浓度食盐的培养基:,分离金黄色葡萄球菌,3.不加氮源的无氮培养基:,分离固氮菌,4.不加含碳有机物的无碳培养基:,分离自养型微生物,5.如何鉴定饮用水和奶制品中含有大肠杆菌？,加入伊红-美蓝试剂，如果菌落出现深紫色并伴有金属光泽，就证明有大肠杆菌。,11,【配对练习 2】关于配制培养基的叙述中，正确的是(,),A制作固体培养基必须加入琼脂 B加入青霉素可得到放线菌 C培养自生固氮

7、菌不需氮源 D发酵工程一般用半固体培养基 解析：固体培养基需加入凝固剂，琼脂是常用的，但不是 唯一的；青霉素可抑制细菌和放线菌的生长；发酵工程一般用 液体培养基；自生固氮菌能够将空气中的氮还原成氨，故培养 基配制时不需加氮源。 答案：C,12,(1)概念：防止一切外来杂菌的侵入，并保持灭菌物品及无菌区域不再被污染的方法，称为无菌技术。 注意在微生物的实验室培养中，无菌技术的核心是_，_。 (2)无菌技术的具体内容 对实验操作的_、操作者的_进行清洁和消毒。 将用于微生物培养的_、接种用具和培养基等进行_。 为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在_进行。 实验操作时应避免已_处理的材料用具与

8、周围的物品相接触。 (3)消毒和灭菌的概念 消毒：消毒是指使用_的物理或化学方法杀死物体表面或内部的_(不包括芽孢和孢子)。 灭菌：灭菌是指使用_的理化因素杀死物体内外_，包括_。 消毒与灭菌的区别：两者最大的区别是_。,2无菌技术,防止杂菌污染,保证培养的纯度,空间,衣着和手,器皿,灭菌,酒精灯火焰附近,灭菌,较温和,部分微生物,强烈,所有的微生物,芽孢和孢子,芽孢和孢子是否存活,13,拓展深化 某些细菌在其生长发育后期，可在细胞内形成一个圆形的抗逆性休眠体，称为芽孢。每个细菌细胞仅形成一个芽孢，故它无繁殖功能。芽孢有极强的抗热、抗辐射、抗化学药物和抗静水压的能力。芽孢的休眠能力十分惊人，可

9、保持几年到几十年的生活力。 孢子是微生物产生的一种有繁殖或休眠作用的细胞。一般是单细胞，个体微小，通常是适应于从不利环境条件中存活下来，并在条件改变时产生新的营养体，能直接发育成新个体。,(4)消毒与灭菌的常用方法,煮沸法,巴氏消毒法,化学药剂法,14,紫外线灭菌,灼烧灭菌,干热灭菌,高压蒸汽灭菌,(一)配制培养基 1配制原则 (1)_(根据微生物的种类、培养目的等)，如培养基可由简单的无机物组成；生产用培养基内可加入化学成分不明确的天然物质，而分类鉴定用培养基内必须加入已知化学成分的物质。 (2)_，注意各种营养物质的浓度和比例。 (3)_，各种微生物适宜生长的pH范围不同，细菌6.57.5

10、、放线菌7.58.5、真菌5.06.0。,二、实验操作,目的要明确,营养要协调,pH要适宜,15,判断下列各项是否需要消毒或灭菌。如需要，选择合适方法。 （1）豆浆 （2）游泳池 （3）超净工作台 （4）玻棒、试管、吸管、锥形瓶 （5）培养细菌用的培养皿 （6）无菌水 （7）牛肉膏蛋白胨培养基 （8）接种针和接种环 （9）实验操作者的双手,灭菌（灼烧）,消毒（巴氏）,消毒（化学）,消毒（先化学后紫外线）,消毒（化学）,消毒（化学）,灭菌（干热）,灭菌（高压蒸汽）,灭菌（高压蒸汽）,16,),【例 3】下列操作与灭菌无关的是( A接种前用火焰灼烧接种环 B接种前用酒精擦拭双手 C接种在酒精灯火焰

11、旁完成 D将平板倒置，放入培养箱中培养,无菌操作是微生物培养的必要前提，学生必 须树立“无菌概念”。前三项都是无菌操作的规范要求，第四 项将平板倒置(为了防止皿盖上的冷凝水落入培养基中，造成污 染)，放入培养箱中培养与灭菌无关。,【答案】：D,17,注意,不同微生物对营养需求不同，因此，首先根据不同微生物的营养需求配制针对性强的培养基。,营养物质浓度过低不能满足微生物营养需要，过高对微生物的生长有抑制作用，另外，培养基中各营养物质浓度比直接影响微生物的生长繁殖和代谢产物的形成和积累，其中碳氮比(C/N)的影响较大。例如，在谷氨酸生产中，当培养基中的碳源与氮源的比为41时，菌体大量繁殖，而产生的

12、谷氨酸少；当碳源与氮源的比为31时，菌体繁殖受抑制，但谷氨酸合成量大增。,2配制方法(以制备牛肉膏蛋白胨固体培养基为例),(1)培养异养菌的牛肉膏蛋白胨固体培养基的营养构成,18,(2)实验流程,倒平板,计算,称量,溶化,调节pH,分装,灭菌,先加牛肉膏少量水，加热，溶化取出称量纸；再加蛋白胨和氯化钠，玻棒搅拌溶解；加琼脂，玻棒搅拌，完全熔化，补加蒸馏水至100毫升。,19,合格的培养基必须灭菌效果好。培养基配制好后，要放在恒温箱中保温12 d，若无菌落生长则说明制备的培养基是合格的。,提醒,4下列为某同学在培养金黄色葡萄球菌实验中的部分操作步骤，其中正确的是() A培养基中蛋白胨、牛肉膏溶化

13、后，直接补充蒸馏水至100 mL B培养基配制完毕可直接使用 C加压至100 kPa之前，要彻底排出锅内的冷空气 D将接种环放在酒精灯火焰上灼烧，灭菌后立即伸入菌液试管内挑取少量菌种,纯化大肠杆菌就是为了获得大肠杆菌的纯种菌落，这需在培养时，尽量使菌落中的菌体来自于一个大肠杆菌的分裂，即这个菌落的细菌群体由一个大肠杆菌繁殖而来，这就需接种时尽量接种单个的大肠杆菌。,(二)纯化大肠杆菌,C,20,1微生物接种的方法 微生物接种的方法最常用的是_和_两种。 (1)_通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。 将_放在酒精灯火焰上灼烧，直到接种环烧红。 在

14、火焰旁冷却接种环，并打开盛有菌液的试管的_。 将试管口通过酒精灯的_。 将已冷却的接种环伸入菌液中，_一环菌液。 将试管口通过酒精灯的火焰，并迅速塞上棉塞。 _将培养皿皿盖打开一条缝隙，_将沾有菌种的接种环迅速伸入_，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基。 灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将_的划线与_相连。,将_，放入培养箱中培养。,平板划线法,稀释涂布平板法,平板划线法,接种环,棉塞,火焰,沾取,左手,右手,平板内,最后一区,第一区,平板倒置,21,(2)_则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀

15、释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。 系列稀释操作 a取盛有9 mL水的6支试管灭菌，并按101106的顺序编号。 b用_吸取1 mL培养的菌液，注入101倍稀释的试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀。 c从101倍稀释的试管中吸取1 mL稀释液，注入102倍稀释的试管内吹吸均匀，获得102倍液。依此类推。 涂布平板操作 a将_浸在盛有酒精的烧杯中。 b取不超过0.1 mL的_，滴加到培养基表面。 c将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却810 s。 d用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使菌液分布均匀。,稀释涂

16、布平板法,移液管,涂布器,菌液,22,2注意事项 (1)平板划线法 操作第一步即取菌种之前及每次划线之前都需要进行_，划线操作结束时，仍需灼烧_。 从第二次以后的划线操作总是从_开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落,(2)稀释涂布平板法 稀释涂布平板的操作比较复杂，且各个细节均需保证“_”，应特别注意： 酒精灯与培养皿的距离要合适。吸管头不要接触任何其他物体。 吸管要在酒精灯火焰周围使用。,3微生物分离纯化培养的结果作出分析与评价 (1)培养未接种培养基的作用是对照，若有菌落形成，说明培养基灭菌不彻底。 (2)在肉汤培养基上，大肠杆菌菌落呈白色，为圆

17、形，光滑有光泽，边缘整齐。 (3)培养12 h和24 h后的菌落大小不同，菌落分布位置相同。原因是时间越长，菌落中细菌繁殖越多，菌落体积越大，而菌落的位置不动，只是菌落数增多。 (4)频繁使用的菌种利用临时保藏法保存，长期保存菌种的方法是甘油管藏法。前者利用固体斜面培养基培养后，保存在4冰箱中，第36个月转种培养一次，缺点是保存时间较短，菌种容易被污染或产生变异；后者将菌种与无菌甘油等量混合后保存在20的冷冻箱中。,火焰灼烧灭菌,接种环,上一次划线末端,无菌,23,4菌种的保存 为了保持菌种的纯净，需对菌种进行保藏。对于频繁使用的菌种，我们可以采用_法；对于需要长期保存的菌种，可以采用_法。将

18、菌种放在低温环境中保藏的目的是_，但时间长了菌种还是要老化的，因此对临时保存的菌种_个月后需重新接种。,4有关平板划线操作的叙述，不正确的是() A第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物 B每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上的菌种 C在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液 D划线结束后，灼烧接种环，能及时杀死接种环上的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者,临时保藏,甘油管藏,降低微生物的新陈代谢速率,36,C,24,一、选择题 1关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基，叙述错误的是() A操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌 B将称好的牛肉膏连同

19、称量纸一同放入烧杯C待培养基冷却至50左右时进行倒平板 D待平板冷却凝固约510 min后，将平板倒过来放置 2金黄色葡萄球菌有很强的致病力，常引起骨髓炎等，还可能引起食物中毒，下述实验结束后的做法错误的是() A对接种环进行灼烧处理B带菌培养基必须经高压蒸汽灭菌锅灭菌后才能倒掉 C带菌培养基必须经加热后才能倒掉 D接种后双手必须经肥皂洗净，再用75%的酒精棉球擦拭,3防止杂菌入侵，获得纯净的培养物，是研究和应用微生物的前提。下列叙述错误的是() A实验室里可以用紫外线或化学药物进行消毒 B接种环、接种针等金属用具，直接在酒精灯火焰的内焰部位灼烧灭菌,A,C,B,25,C在实验室中，切不可吃东

20、西、喝水，离开实验室时一定要洗手，以防止被微生物感染 D使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境,4下列叙述错误的是() A右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞，为避免污染需放在酒精灯火焰附近 B倒平板整个过程应在火焰旁进行 C打开培养皿盖，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖 D为避免水滴滴入培养基，平板应倒过来放置 5有关稀释涂布平板法的说法中，错误的是() A用移液管把菌液从一支试管转移到下一支试管后，要用手指轻压移液管的橡皮头，吹吸三次，目的是使菌液与水充分混匀 B移液管需经过灭菌 C试管口与移液管应在离火焰12 cm处 D涂布时可转动涂布器，使菌液

21、涂布均匀,C,D,26,6以下关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作顺序正确的是A计算称量倒平板溶化灭菌 B计算称量溶化倒平板灭菌 C计算称量溶化灭菌倒平板 D计算称量灭菌溶化倒平板 7为了保持菌种的纯净，需要进行菌种的保藏，下列有关叙述不正确的是() A对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法 B临时保藏的菌种一般是接种到试管的斜面培养基上 C临时保藏的菌种容易被污染或产生变异 D对于需要长期保存的菌种，可以采用低温4保藏的方法 8有关平板划线操作的叙述，正确的是() A使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌 B打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞 C把皿盖打开，

22、将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线即可,C,D,D,27,D最后将平板倒置，放入培养箱中培养,二、简答题 9某学校打算开辟一块食用菌栽培基地，以丰富学生的劳动技术课内容。首先对食用菌实验室进行清扫和消毒处理，准备食用菌栽培所需的各种原料和用具，然后从菌种站购来各种食用菌菌种。请回答下列问题： (1)对买回来的菌种进行扩大培养，首先制备试管培养基，写出制备牛肉膏蛋白胨固体培养基所需的原料：_、_、_、_、_。其中提供氮源的是_；提供碳源的主要物质是_。 (2)微生物在生长过程中对各种成分所需量不同，故配制培养基时各成分要有合适的_。在烧杯中加入琼脂后要不停地_，防止_。 (3)将

23、配制好的培养基分装到试管中，加棉塞后若干个试管一捆，包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入_中灭菌，压力_kPa，温度_，时间_。灭菌完毕拔掉电源，待锅内压力自然降到0时，将试管取出。如果棉塞上沾有培养基，此试管_。 (4)使用高压蒸汽灭菌锅时注意，先向锅内倒入_，把锅内水加热煮沸并将其中原有冷空气彻底排出后将锅密闭。 (5)从一支试管向另一支试管接种时注意，接种环要在酒精灯_(“内”或“外”)焰灭菌，并且待接种环_后蘸取菌种，试管口不能离开酒精灯火焰附近，将接种的试管放入_冰箱中保藏。,牛肉膏,牛肉膏,蛋白胨,水,无机盐,琼脂,蛋白胨,琼脂糊底引起烧杯破裂,比例,搅拌,废弃,高压蒸汽灭菌锅,100,12

24、1,1530 min,适量水,外,冷却,4,28,10下表是用于从土壤中分离纯化土壤细菌的牛肉膏蛋白胨培养基的配方。请回答 ：,(1)培养基的类型很多，但培养基中一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。上述培养基配方中能充当碳源的成分是_和_。培养基配制完成以后，一般还要调节pH并对培养基进行_处理。 (2)分离纯化微生物最常使用的接种方法是_和_两种。在接种过程中，接种针或涂布器的灭菌方法是_。 (3)假设某同学发现培养基上细菌数目过多地连成一片，可能的原因是什么？。,菌液浓度过高；培养过程中被杂菌污染；利用接种针划线时，划下一个区域前没有对接种针进行灭菌处理,牛肉膏,蛋白胨,灭菌,平板划线法,稀

25、释涂布平板法,蘸取酒精；引燃灭菌,29,目标导航1.研究培养基对微生物的选择作用。 2.进行微生物数量的测定。,第2课时土壤中分解尿素细菌的分离与计数,一、研究思路 1筛选菌株 (1)实验室中微生物筛选的原理 人为提供有利于_生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时_或_其他微生物生长。 (2)选择培养基 在微生物学中，将允许_种类的微生物生长，同时_或_其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。,目的菌株,抑制,阻止,特定,抑制,阻止,30,(3)分离分解尿素的细菌的选择培养基 在该培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是_，提供氮源的是_，琼脂的作用是凝固剂。 该培养基对微生物具有选择

26、作用。其选择机制是_才能在该培养基上生长。 土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们体内能合成_，将尿素分解的反应式是_。 Taq细菌能忍受93左右的高温，是在美国黄石国家公园的一个热泉中发现的，这说明，在寻找目的菌株时，要根据_。,2统计菌落数目的方法 (1)稀释涂布平板法(也叫活菌计数法) 原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的_，通过统计平板上的_，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 操作,葡萄糖,尿素,只有能够以尿素作为氮源的微生物,脲酶,CO(NH2)2H2O CO22NH3,脲酶,它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找,一个活菌,菌落数,31

27、,第一，设置重复组，增强实验的说服力与准确性。将待测样品经一系列10倍稀释，然后选择_稀释度的菌液，分别取0.1 mL接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂布整个平板表面，放在适宜的温度下培养并计算菌落数。为使结果接近真实值，可将同一稀释度涂布到三个或三个以上的平板上，培养并计算出_。 第二，为了保证结果准确，一般选择菌落数在_的平板进行计数，若设置的重复组中结果相差太远，意味着操作有误，需重新实验。 计算公式：每克样品中的菌株数C/VM，其中C代表_ _ ，V代表_ _(mL)，M代表_。 (2)显微镜直接计数法 原理：此法利用特定的_或_，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数

28、量，但不能区分细菌的死活。计数板是一块特制的载玻片，上面有一个特定的面积1 mm2和高0.1 mm的计数室，在1 mm2的面积里又被划分成25个(或16个)中格，每个中格进一步划分成16个(或25个)小格，计数室由_个小格组成。,三个,菌落平均数,30300,某一稀释度下平板上生长的平均菌落数,涂布平板时所用的稀释液的体积,稀释倍数,细菌计数板,血细胞计数板,400,32,操作：将稀释的样品滴在计数板上，盖上盖玻片，然后在显微镜下计数45个中格中的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数，再按公式求出每毫升样品中所含的细菌数。 计数公式：每毫升原液所含细菌数每小格平均细菌数40010 000稀释

29、倍数。 (3)设置重复和对照 设置重复：培养过程中应设置重复组，同一稀释度下应涂布_个平板，才能增强实验的说服力与准确性。 设置对照：实验中应设置对照，主要目的是_对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。如_对照组，观察培养物中是否有杂菌污染；设置_培养基，观察选择培养基是否具有_作用。,二、实验设计 实验步骤 1土壤取样：从肥沃、湿润的土壤中，用无菌小铁铲铲去表层土3 cm左右，迅速取土壤并装入_密封或事先准备好的_中。,至少3,排除实验组中非测试因素,空白,完全,筛选,无菌信封,烧杯,33,2制备培养基：制备_培养基作为对照组，尿素为唯一氮源的培养基作为_，用来判断选择培养基是否具有_。

30、放宽稀释范围，如稀释倍数为103107范围内的要分别涂布，而每个稀释度下需要_个选择培养基、_个牛肉膏蛋白胨培养基，因此需要15个选择培养基和5个牛肉膏蛋白胨培养基。 两种培养基应各有一个作为_对照，此外还需准备8个灭菌的试管和1个灭菌的移液管。 3样品的稀释与涂布平板：参考下面的实验流程示意图，将10 g土样加入盛有90 mL无菌生理盐水的锥形瓶中(锥形瓶体积为250 mL)，充分摇匀，吸取上清液1 mL，转移至盛有_ mL生理盐水的无菌大试管依次等比稀释至107稀释度，并按照由107103稀释度的顺序分别吸取_mL进行平板涂布操作。按照浓度从低到高的顺序涂布平板，不必更换移液管。,牛肉膏蛋

31、白胨,实验组,选择作用,3,1,空白,9,0.1,34,说明：图中的1、2、3平板是_，4为_作对照，判断选择培养基是否具筛选作用，还有两个空白对照，即不涂布稀释后菌液的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基，验证培养基中是否_。 4将涂布好的培养皿放在30温度下培养，及时观察和记录。 5挑选选择培养基上不同形态的菌落接入含_培养基的斜面中，观察能否产生颜色反应。,选择培养基,牛肉膏蛋白胨培养基,含有杂菌,酚红指示剂,35,6细菌的计数 当菌落数目稳定时，选取菌落数在_的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出_，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。同时仔细观察所

32、分离到的菌落，并记录菌落特征。 7统计表格 表一平板上的菌落数记录表,30300,平均值,36,表二菌落特征记录表,注：一般来说，在一定的培养条件下(相同的培养基、温度及培养时间)，_表现出_的菌落特征。 三、操作提示 1取土样用的小铁铲和盛土样的信封在使用前都要_。 2应在_旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入_中，塞好棉塞。 3在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在_旁操作。 4实验时要对_做好标记。注明_等。 5为了提高效率，在操作时更加有条不紊，应当_。,同种微生物,稳定,.灭菌,火焰,锥形瓶,火焰,培养皿,培养基类型、培养时间、稀释度、培养物,事先规划时间,37,四、结果分析与评价,

33、无,偏高,其他氮源,大于,30300,接近,38,菌落计数规则： 选择平均菌落数在30300间的平板 1、只有一个稀释度符合，以该稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数报告； 2、有两个稀释度符合，取决于二者比值（高稀释度的菌落数除以低稀释度的菌落数的值） 1）若0.5比值2，以两稀释度的菌落数乘稀释倍数所得的值的均值报告。 2）若2比值或比值 0.5，则取其中较少的菌落总数进行报告。 3、若所有稀释度的菌落平均数均大于300，则按稀释倍数最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告； 4、若所有稀释度的菌落平均数均小于30，则按稀释倍数最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告； 所有菌落数均不在30300间，以最接近3

34、0或300的平均菌落数乘稀释倍数。,39,40,特别注意:测定真菌放线菌与细菌数量时,稀释度的选择,2.放线菌一般选择10-3,10-4,10-5,1.真菌一般选择10-2,10-3,10-4,3.细菌一般选择10-4,10-5,10-6,41,五、课题延伸 在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的_将尿素分解成了_。氨会使培养基的碱性增强，_升高。因此，我们可以通过检测培养基_来判断该化学反应是否发生。 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入_指示剂，培养某种细菌后，如果pH升高，指示剂将_，这样，我们就可以准确地鉴定该种细菌能够分解尿素。,脲酶,氨,pH,pH的变化,酚红,变红,知识点一研究思路

35、1下表为本课题使用的培养基，分析培养基配方，回答下面的问题。,42,(1)在该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是_。 (2)按物理性质划分该培养基属于_培养基，理由是培养基中含有_；该类培养基常用于微生物的_等。,葡萄糖和尿素,固体,琼脂,纯化、分离、计数,43,(3)由于_， 所以该培养基只能用于能够合成_的微生物的培养。用此培养基培养土壤浸出液能够从土壤中筛选出_的细菌。 (4)在微生物学中，将_的培养基，称作选择培养基。 2广东省是我国甘蔗生产区之一。甘蔗是一种高光效的C4植物，单位面积产量很高，种植面积日益扩大，目前已成为南方地区燃料酒精生产的重要原料。利用甘蔗生产燃

36、料酒精的一般工艺流程为：甘蔗榨汁(蔗糖)酵母发酵蒸馏成品(燃料酒精)。,(1)具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精发酵菌种，对野生酵母菌进行诱变后通过筛选可以得到具有这些特性的突变菌，诱变及筛选过程如下： 步骤1：野生菌液体培养一段时间后接受紫外线照射诱变处理。 步骤2：制备选择培养基。在基本培养基的基础上，注意 和_，加琼脂后灭菌，制成固体平板。 步骤3：将紫外线照射后的菌液稀释涂布平板。,培养基中只有尿素一种氮源,脲酶,分解尿素,允许特定种类的微生物生长，并能抑制或阻止其他种类微生物生长,添加高浓度蔗糖(葡萄糖),调低pH,44,步骤4：根_，筛选出突变菌。 (2)上述步骤2、3和4的

37、依据分别是_ _,是否能在选择培养基上生长,提供高糖和酸性的筛选环境；,获得单菌落；,能生长的菌落具有耐高糖和耐酸的特性,知识点二实验设计 3用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是() A涂布了1个平板，统计的菌落数是230 B涂布了2个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238 C涂布了3个平板，统计的菌落数分别是21、212和256，取平均值163 D涂布了3个平板，统计的菌落数分别是210、240和250，取平均值233,D,45,4在本实验操作中对使用的平板和试管要进行标记，以下说法正确的是() A对培养皿仅

38、需注明培养基的种类即可 B一般在使用之后进行标记 C由于试管用的较多，只需对试管进行标记即可 D标记的目的主要是为了防止实验中平板、试管等的混淆,一、选择题 1在缺乏氮源的培养基上，大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌的生长；在培养基中加入10%的酚可以抑制细菌和霉菌的生长。利用上述选择培养基依次能从混杂的微生物群体中分离出() A乳酸菌、金黄色葡萄球菌、放线菌 B固氮细菌、大肠杆菌、放线菌 C固氮细菌、霉菌、放线菌 D固氮细菌、金黄色葡萄球菌、放线菌,D,C,46,2请选出下列正确的操作步骤() 土壤取样称取10 g土壤，取出加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中吸取0

39、.1 mL土壤溶液进行平板涂布依次稀释至101、102、103、104、105、106、107稀释度 A B C D 3在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂的目的是() A筛选出能分解尿素的细菌 B对分离的菌种作进一步鉴定 C作细菌的营养成分 D如指示剂变蓝就能准确地认定该菌能分解尿素,4下面对“从土壤中分离分解尿素的细菌过程中灭菌”的理解，不正确的是() A防止杂菌污染 B消灭全部微生物 C稀释土壤溶液的过程中必须在火焰旁操作 D灭菌必须在接种前进行,C,B,B,47,5下列不属于菌种记数方法的是() A平板划线法 B稀释涂布平板法 C显微镜检法 D滤膜法 6下列有关配制培养基的叙述中，正确的是() A制作固体培养基必须加入琼脂 B加入青霉素可得到乳酸菌 C培养自生固氮菌不需要氮源 D发酵工程一般用固体培养基 7用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目。在某稀释浓度下某同学做了若干个平板并统计每个平板的菌落数，最接近样品中菌体数真实