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文档简介
1、粗提取和鉴定,DNA,选择实验材料,材料:鱼卵,猪肝,花椰菜,香蕉,鸡血,猕猴桃,洋葱,豌豆,菠菜,液体培养基中培养的大肠杆菌可以考虑含有DNA的生物物质,但是DNA含量比较高如果鸟类的血液核很大,DNA很多,就不需要破坏细胞壁问题:采访鸡血细胞溶液后,在实验前需要特殊处理吗?柠檬酸钠抗凝剂,1,实验原理,NaCl溶液浓度不同的DNA在0.14 mol/L的NaCl溶液中溶解度最低。利用这个原理,可以在氯化钠溶液中析出溶解的DNA。 DNA不溶于酒精溶液,但细胞内的某些物质溶于酒精溶液。利用这个原理,可以进一步提取杂质较少的DNA。DNA会把二苯胺(沸水浴)染成蓝色。因此,二苯胺可以用作确认D
2、NA的试剂。第二,目的要求早期掌握DNA的粗提取和识别方法,观察提取的DNA物质。第三,材料:鸡血细胞液(5-10毫升),体积分数为95%的酒精溶液(冷却),蒸馏水,质量浓度为0.1g/毫升的柠檬酸钠溶液,物质的量浓度分别为2mol/l和0.015毫升此时,血细胞沉入离心管底部,去除上清液,就能得到鸡血细胞液。问:从鸡血中提取DNA时,为什么要从血液中去除上等液?4,方法:1,鸡血细胞液体准备,鸡血细胞液体,a:上清液是血清,不含血细胞,DNA在鸡血细胞中,所以要去除上清液。添加0.1g/ml浓度的柠檬酸钠溶液(抗凝剂):防止鸡血细胞的凝固。提取新鲜鸡血,2,鸡血细胞的核物质,制备5-10毫升
3、好鸡血细胞液体,注入烧杯,在添加20毫升蒸馏水的同时,用玻璃棒快速搅拌,加速和过滤血细胞的细胞膜和核膜破裂。鸡血细胞液体,添加20毫升蒸馏水。目的是吸收水,释放细胞的DNA。将物质的量浓度为2mol/l的氯化钠溶液40毫升加入滤液中,搅拌均匀,DNA就会溶解在溶液中。3,在细胞核内溶解DNA,加入DNA溶解液,浓度为2mol/L的氯化钠溶液40ml,沿鼻杯内壁慢慢加入蒸馏水,轻轻搅拌,灯丝就会出现,蒸馏水越来越多,直到氯化钠浓度约为0.14mol/l为止,不会持续增加。过滤出含有,5,DNA的黏稠物,析出含有,4,DNA的黏稠物,加入蒸馏水。目的是降低NaCI的浓度,释放DNA。获取DNA的粘
4、性物质(白牛奶),将20毫升物质的量浓度为2毫升/l的氯化钠溶液注入烧杯,使粘合剂在溶液中溶解得尽可能多。6,将DNA的粘度再溶解,用纱布过滤,将DNA溶解在滤液中,7,将包含DNA的氯化钠过滤,加入20毫升含DNA/l浓度的氯化钠溶液,加入溶液中冷却的酒精溶液50米,溶液中杂质较少的长丝(其主要成分是DNA),8,进一步提取杂质少的DNA,冷却酒精溶液50毫升,含DNA的滤液,较少杂质的蚕丝,9,确认DNA,2个20毫升试管,每种加入5毫升0.015毫升氯化钠溶液的浓度,将长丝放入试管中,用玻璃棒搅拌然后将4毫升的二苯胺试剂分别添加到两个试管中。均匀搅拌后,将试管放入沸水中加热5分钟,然后在
5、2个试管中观察和比较溶液颜色的变化,直到试管冷却。,0.015氯化钠溶液5毫升,无钢丝4毫升的二苯胺试剂,蓝色,0.015氯化钠溶液5毫升,钢丝,添加4毫升的二苯胺试剂,如在“DNA的粗提取和鉴定”实验装置下,回答问题。(1)作为实验材料,使用鸡血细胞液,而不是鸡的全血,主要原因是鸡血细胞液的含量高。(2)在图a所示的实验阶段添加蒸馏水20毫升的目的是通过图b所示的步骤获得滤液,然后在该过滤器中添加2 mol/L的NaCl溶液。图c所示的实验阶段添加蒸馏水的目的是:(3)为了检查而得到的灯丝的主要成分是DNA,如图d所示,进行实验,使溶液脱落。(4)试管是对照组,试管是实验组。试管现象;b试管现象。在沸水中加热的目的是DNA抗高温。试管在实验中的作用如下。b试管中溶液颜色的变化程度主要相关。加快颜色反应速度,DNA,血细胞水分吸收和分解,释放DNA,将滤液DNA溶解在浓盐溶液中,DNA析出,二苯胺,溶液不变蓝,溶液变蓝,耐受性,对照组,添加多少细丝,步骤再溶(2 mol/L的NaCl),过滤(包含DNA的滤液),932n附加片剂(体分率为95%的冷却酒精),9321确认,准备鸡血液,情景
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