版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领
文档简介
1、固态发酵漆酶活性测定:酶液制取:5g发酵样品以1:20(W/V)比例用蒸馏水悬浮,200 r/min摇3h,之后5000 r/min离心20min。(上清用0.45m滤纸过滤,于-20保存滤液,取能整除的滤液体积用于漆酶活性测定。)酶活反应体系3.0mL(2.3mL 0.2mol/L醋酸-醋酸钠缓冲液;pH=4.5 0.5mL粗酶液稀释液;0.2mL 1mmol/L的ABTS)420nm处测定吸光值的变化。此实验固态发酵漆酶活性计算公式:N:酶液稀释倍数V总: 漆酶酶活测定反应体体系的终体积(mL)V 酶: 反应添加的酶液体积(mL)OD420: t时间内反应液在420nm处吸光度的增加值36
2、000: 420nm处ABTS氧化态的摩尔吸光系数(L/molcm)T:反应时间(min)L为比色皿的直径(cm)。100mL/(0.5mL5g):固态变成液态的稀释倍数液态发酵漆酶活性测定:酶活反应体系3.0mL(2.3mL 0.2mol/L醋酸-醋酸钠缓冲液;pH=4.5 0.5mL粗酶液稀释液;0.2mL 1mmol/L的ABTS)N:酶液稀释倍数V总: 漆酶酶活测定反应体体系的终体积(mL)V 酶: 反应添加的酶液体积(mL)OD420: t时间内反应液在420nm处吸光度的增加值36000: 420nm处ABTS氧化态的摩尔吸光系数(L/molcm)T:反应时间(min)L为比色皿的
3、直径(cm)。固态发酵锰过氧化物酶(MnP)活性测定: 酶液制取:粗酶液制备发酵过程中每隔 2 d 取 5 g 发酵物于 250 mL 三角瓶中,加入 100 mL H2O,在 200 r / min 的摇床中振荡提取 3 h,之后5000 r/min离心20min。(用滤纸过滤后,取滤液用于测定MnP 酶活性。)在 4 mL 反应体系中含 50 mmol/L( pH 4 5) 的乳酸钠缓冲液 3. 4 mL,1. 6 mmol/L 的硫酸锰溶液0. 1 mL,酶液 0. 4 mL,预热至 37 时,加 1. 6 mmol / L的 H2O2溶液 0. 1 mL 启动反应。在 238 nm 紫
4、外光处,测定反应 4 min 内OD238差值。在对照组中,以煮沸灭活 15 min 酶液代替原酶液,以蒸馏水代替H2O2溶液,其他反应物不变。每分钟使1 mol/L的 Mn2 +转化为 Mn3 +所需的酶量为 1 个酶活力单位( U) 。(238 = 6.5mM-1.cm-1)此实验固态发酵MnP活性计算公式:N:酶液稀释倍数V总: 漆酶酶活测定反应体体系的终体积(mL)V 酶: 反应添加的酶液体积(mL)OD420: t时间内反应液在420nm处吸光度的增加值6500: 238nm处Mn2 +转化为 Mn3 +摩尔吸光系数(L/molcm)T:反应时间(min)L:比色皿的直径(cm)10
5、0mL/(0.4mL5g):固态变成液态的稀释倍数液态发酵锰过氧化物酶(MnP)活性测定:锰过氧化物酶(MnP)活性测定在 4 mL 反应体系中含 50 mmol/L( pH 4 5) 的乳酸钠缓冲液 3. 4 mL,1. 6 mmol/L 的硫酸锰溶液0. 1 mL,酶液 0. 4 mL,预热至 37 时,加 1. 6 mmol / L的 H2O2溶液 0. 1 mL 启动反应。在 238 nm 紫外光处,测定反应 4 min 内OD238差值。在对照组中,以煮沸灭活 15 min 酶液代替原酶液,以蒸馏水代替H2O2溶液,其他反应物不变。每分钟使1 mol/L的 Mn2 +转化为 Mn3
6、+所需的酶量为 1 个酶活力单位( U) 。(238 = 6.5mM-1.cm-1)此实验固态发酵MnP活性计算公式:N:酶液稀释倍数V总: 漆酶酶活测定反应体体系的终体积(mL)V 酶: 反应添加的酶液体积(mL)OD420: t时间内反应液在420nm处吸光度的增加值6500: 238nm处Mn2 +转化为 Mn3 +摩尔吸光系数(L/molcm)T:反应时间(min)L:比色皿的直径(cm)固态发酵木质素过氧化物酶(LiP)活性测定:酶液制取:5g发酵样品以1:20(W/V)比例用蒸馏水悬浮,200 r/min摇3h,之后5000 r/min离心20min。(上清用0.45m滤纸过滤,于
7、-20保存滤液,取能整除的滤液体积用于木质素过氧化物酶活性测定。)测酶活:3mL反应混合液包括3.4mL酒石酸钠(250mM, pH 3.0),0.1mL 10mM藜芦醇,0.4mL酶样品。在301下温浴5min后,于反应加入0.1mL 10mM H2O2启动酶促反应,以煮沸灭活 15 min 酶液代替原酶液,以蒸馏水代替H2O2溶液作对照,测OD310(310= 9.3103M1cm1)处反应5min前后反应液吸光度的变化。一个酶活力单位(U)的定义:每min氧化藜芦醇生成1M藜芦醛消耗的酶量。此实验固态发酵LiP活性计算公式:N:酶液稀释倍数V总: 漆酶酶活测定反应体体系的终体积(mL)V
8、 酶: 反应添加的酶液体积(mL)OD420: t时间内反应液在420nm处吸光度的增加值9300: 310nm处摩尔吸光系数(L/molcm)T:反应时间(min)L:比色皿的直径(cm)100mL/(0.4mL5g):固态变成液态的稀释倍数液态发酵木质素过氧化物酶(LiP)活性测定:测酶活:3mL反应混合液包括3.4mL酒石酸钠(250mM, pH 3.0),0.1mL 10mM藜芦醇,0.4mL酶样品。在301下温浴5min后,于反应加入0.1mL 10mM H2O2启动酶促反应,以煮沸灭活 15 min 酶液代替原酶液,以蒸馏水代替H2O2溶液作对照,测OD310(310= 9.3103M1cm1)处反应5min前后反应液吸光度的变化。一个酶活力单位(U)的定义:每min氧化藜芦醇生成1M藜芦醛消耗的酶量。此实验固态发酵LiP活性计算
温馨提示
- 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
- 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
- 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
- 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
- 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
- 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
最新文档
- D打印技术在建筑设计绿色环保的应用考核试卷
- 机织服装设计美学基础考核试卷
- 城市配送中心库存管理与优化考核试卷
- 花画工艺品制作与当代艺术发展考核试卷
- 日用杂品市场促销活动策划与实施考核试卷
- 企业变革管理与组织发展策略考核试卷
- 家禽饲养业国际标准对接与市场准入策略研究考核试卷
- 清洁服务企业客户关系维护与忠诚度提升考核试卷
- 艺术品拍卖会特殊拍品处理考核试卷
- 肉类副产品在食品添加剂领域的应用研究考核试卷
- 解读《保守国家秘密法》2024年修订专题课件
- 美国史智慧树知到期末考试答案章节答案2024年东北师范大学
- 2024上半年上海市虹口区社区工作者招聘129人历年高频考题难、易错点模拟试题(共500题)附带答案详解
- 常用母材与焊材选用表 焊条型号牌号对照表
- SL721-2015水利水电工程施工安全管理导则
- 幼儿园美术色彩搭配培训
- 胰岛素抵抗相关临床问题专家共识解读(2022版)
- (正式版)QBT 5935-2024 白酒工业绿色工厂评价要求
- 监控维保实施方案
- Unit2HealthyLifestyleVideoTime课件高中英语人教版选择性
- 数字贸易学 课件 马述忠 第13-22章 数字贸易综合服务概述- 数字贸易规则构建与WTO新一轮电子商务谈判
评论
0/150
提交评论