葡聚糖检测方法

1、葡聚糖检测方法(试剂盒法翻译)一、试剂的提供瓶子1:外切-1，3-葡聚糖酶(100微升/毫升)加-葡萄糖苷酶(20微升/毫升)悬浮液，2.0毫升瓶2:淀粉葡萄糖苷酶(1630u/ml)加转化酶(500u/ml)溶液，50% v/vglycero，20ml瓶子3:gopodriat缓冲液、缓冲液(48毫升，ph 7.4)、对羟基苯甲酸和吖嗪钠(0.4% w/v)。瓶子4:地鼠酶。瓶5:在0.2%重量/体积苯甲酸中的d-葡萄糖标准溶液(5毫升，1.00毫克/毫升)瓶子6:控制年-葡聚糖制剂。二。试剂的处理1.向瓶1中加入8毫升醋酸钠缓冲溶液，分装并在-20下储存。2.直接使用瓶2中的试剂，并将其稳

2、定在4C 2年或-20C 4年。3.用纯净的稀释水将3号瓶中的GOPOD试剂的体积固定到1L，并将其稳定在4C 2年。4.使用纯化的稀释水将4号瓶中的GOPOD试剂的体积固定到1L，在黑暗环境中储存，并在4下稳定2-3个月、在-20或12个月。5.直接使用瓶5中的试剂，并在室温下稳定4年。6.直接使用瓶6中的试剂，并在室温下稳定5年。三。未提供试剂的制备(缓冲液的配置)1.乙酸钠缓冲液(200 mM，pH 5.0)将11.6毫升冰醋酸(1.05克/毫升)加入900毫升去离子水中，用4M氢氧化钠(16克/100毫升)调节ph=5.0，并在4储存。2.醋酸钠缓冲液(1.2 M，酸碱度3.8)将69

3、.6毫升冰醋酸加入800毫升去离子水中，用4M氢氧化钠(16克/100毫升)调节ph=3.8，室温储存。3.氢氧化钾(2 M)将112克氢氧化钾加入800毫升去离子水中，溶解并在室温下储存。4.盐酸(37% v/v；在室温下稳定10年四.检测空白试剂的配置1.试剂空白加入0.2毫升乙酸钠缓冲液(200毫摩尔，pH 5.0)和3毫升OPOD试剂。2.葡萄糖标准向0.1毫升葡萄糖标准溶液(1毫克/毫升)和0.1毫升缓冲溶液(200毫升，pH 5.0)中加入3.0毫升OPOD试剂溶液。V.1，3:1，6-6-葡聚糖的测量和待测样品的制备答：测量总葡聚糖1.压碎待测样品。用20-30目筛过筛。2.准确

4、称取100毫克待测粉碎样品，放入培养管中，确保样品沉入培养管底部。3.向培养管中加入浓盐酸(37% v/v)，密封并用涡流混合器充分混合。置于30水浴中45分钟，每15分钟搅拌一次(确保样品完全溶解)4.向每个培养管中加入10毫升去离子水，并混合均匀。5.在100的沸水浴中培养2小时。6.冷却至室温，加入10毫升氢氧化钾(2毫升)。7.使用乙酸钠缓冲液(200 mM，pH 5.0)将体积固定至100毫升，冲洗培养管，并混合均匀。8.1800转/分钟，离心10分钟，得到离心溶液。9.将0.1毫升离心机移至试管(2份)。10.从瓶子1中加入0.1毫升处理溶液，在40水浴1小时。11.加入3毫升OP

5、OD试剂，40水浴20min。12.测量510nm处的吸光度。-葡聚糖含量的测定1.准确称取100毫克待测粉碎样品，放入培养管中，确保样品沉入培养管底部。2.加入2Ml 2m氢氧化钾溶液，在冰浴中搅拌20分钟。3.加入8毫升1.2m醋酸钠缓冲液(酸碱度=3.8)并搅拌。立即加入0.2毫升小瓶2试剂，搅拌均匀，在40水浴30分钟，用涡旋混合器间歇混合。4.当样品含有10%的-葡聚糖时，将上述溶液转移至100毫升容量瓶中(使用洗瓶水)定容，充分混合，1800转/分钟，离心10分钟。5.当样品含有10%的-葡聚糖时，该样品的最终体积约为10.3毫升，1800转/分钟，离心10分钟(不稀释)6.将0.1毫升离心机移至试管(2份)。7.从1号瓶中加入0.1毫升处理液，加入3毫升OPOD试剂，40水浴20min8.测量510nm处的吸光度。六.计算公式和描述右旋糖酐总量(% W/W)=E x F/W x 90。-葡聚糖(% w/w)=e x