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文档简介
1、第17章生物技术在其他方面的应用,试验点44dna,血红蛋白的提取,试验点45植物的有效成分的提取,试验点44DNA,血红蛋白的提取,试验法突破,试验法1DNA和蛋白质的提取和分离,试验基础必要,试验基础必要,DNA和蛋白质的分离提取的比较,(1) DNA提取实验操作分析4次过滤的比较,试验法突破试验法1DNA和蛋白质的提取和分离,1.DNA的粗提取和鉴定,加入2次蒸馏水的作用a .加入到鸡血球液中,使血球吸水膨胀的b .含有DNA的2mol/LNaCl溶液中,稀释后析出DNA 纱布的作用a .使用3次血球破裂液,提取核物质(DNA在滤液中),过滤0.14mol/LNaCl溶液,过滤DNA (
2、DNA在粘稠物中)。 c .过滤溶解了DNA的2mol/LNaCl溶液(DNA在滤液中)。 使用3次NaCl溶液的作用a.2mol/LNaCl溶液,溶解DNA,除去了不溶于该溶液的杂质的b.0.14mol/LNaCl溶液,析出DNA的c.2mol/LNaCl溶液,溶解提取的DNA粘稠物。 (2)DNA的鉴定: DNA在沸水浴条件下遇到二苯胺时变蓝。 (1)常用的蛋白质分离方法凝胶色谱法(通过香港分子质量的大小分离蛋白质),【注意】a .凝胶柱的直径的大小对分离效果没有影响,但直径过大的话洗脱液的体积大,样品稀释度大的凝胶柱的高度与分离度有关b .加快干凝胶膨胀的方法:将加了洗脱液的湿凝胶用沸水
3、浴加热,慢慢升温至接近沸腾的温度,通常为12h即可。 这种方法不仅可以节省时间,还可以去除可能附着在凝胶上的微生物,排出胶体粒子内的空气。 2 .血红蛋白的提取和分离方法,电泳法(带电粒子在电场的作用下移动) a .在一定的pH下,某生物高分子(多肽、核酸等)能解离的基带正或负电,在电场的作用下,这些带电分子向与其相反的电极移动。 b .由于样品中不同分子的带电特性不同和分子本身的大小、形状不同,使带电分子产生不同的移动速度,实现样品中不同分子的分离。 判断纯化蛋白质是否达到要求的是SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法。 (2)蛋白质提取过程中应注意的问题红血球清洗和离心要求:在红血球清洗过程中,清洗
4、3次后,上清仍为黄色,可以增加清洗次数,否则无法去除血浆蛋白质的离心中旋转速度低,时间短则白血球等一起沉淀,无法得到分离效果。 蒸馏水和甲苯的作用:在血红蛋白释放中,蒸馏水的作用是使红血球膨胀,甲苯的作用主要是溶解细胞膜。 江苏生物201525, 3、3分钟图1、2分别示意性地表示了“DNA的粗提取和鉴定”实验中的操作步骤的一部分,以下正确的是(多个回答) a .图1, 在2中用蒸馏水稀释目的相同的b .在图1中过滤完成后残留滤液c .在图2中过滤完成后丢弃滤液d .在图1的鸡血细胞液中加入一点儿若肉粉有助于除去杂质,例图1中加入蒸馏水的目的是使鸡的血细胞吸水破裂,放出其中的核物质. 在图2中
5、加入蒸馏水的目的是降低NaCl的浓度,降低DNA的溶解度使其析出,错误a的DNA溶于水,因此,图1中过滤的DNA存在于滤液中,需要留下滤液,b正确的图2的DNA析出后,过滤后扔掉滤液,残留粘稠物, c在正确的图1的鸡血球液中加入一点嫩肉粉,其中木瓜蛋白酶有利于分解DNA中的杂质蛋白,去除杂质,d是正确的。 【答案】从BCD、试验点45的生物材料中提取有效成分,突破高试验法,必须考试基础,试验法4胡萝卜素的提取,结合试验法3和实例考察植物芳香油的提取;(1)植物芳香油的由来和特征由来:天然香料的主要来源是动物和植物。 动物香料主要来源于麝、灵猫、海狸和抹香鲸等,植物香料广泛,可以从50多科植物中
6、提取。提取的植物芳香油具有强挥发性,组成复杂,主要含有萜化合物及其衍生物。 特点:植物芳香油挥发性高,易溶于有机溶剂。 1 .植物芳香油的提取,(2)植物芳香油的提取方法:蒸馏法、压制法、提取法等。 具体采用哪种方法取决于植物原料的特征。 考试基础是必要的,(3)实验设计玫瑰精油的提取a .玫瑰精油的化学性质:化学性质稳定,难溶于水,易溶于有机溶剂,可与水蒸气一起蒸馏。 b .实验的流程:鲜花的水水蒸气蒸馏油水混合物(NaCl)加)分离油层(无水Na2SO4)加)除水(过滤)玫瑰油。 c .分析:加入NaCl的作用是提高水层的密度,形成油和水分层。 加入Na2SO4的作用是吸收油层中的水分,通
7、过过滤除去精制玫瑰精油中的固体Na2SO4。 橘皮精油的提取(一般采用压制法) a .橘皮精油的主要成分是柠檬烯,主要储存在橘皮部分。 b .实验流程:石灰水浸渍漂洗压缩过滤静置再过滤橙油。 c .分析:石灰水浸渍的目的是防止橘皮冲压时滑落,提高油的排出率。 (1)胡萝卜素的性质和提取方法胡萝卜素的性质:橙色结晶、化学性质比较稳定,不溶于水,不溶于乙醇,容易溶于石油醚等有机溶剂。 胡萝卜等蔬菜是提取天然胡萝卜素的原料。 提取方法:工业上获得天然胡萝卜素的方法主要有三种:一是从植物中提取,二是从大面积养殖的岩藻依聚糖中提取;三是利用微生物的发酵生产。 (2)实验流程:胡萝卜粉碎干燥提取过滤浓缩胡
8、萝卜素。 (3)影响提取的因素:主要取决于提取剂的性质和用量,同时受原料颗粒大小、密度、含水量、提取温度和时间等条件的影响。 一般来说,原料颗粒小,提取温度高,时间长,应提取的有机物充分溶解,提取效果好。 (4)鉴定方法:纸色谱。 2 .胡萝卜素的提取,1 .植物有效成分的提取方法的比较,试验法2结合实例调查植物芳香油的提取,试验法取得了突破,(1)共同点:基本原理相同。 (2)不同点:原料的位置不同。 水中蒸馏:原料放入蒸馏容器的水中,水完全浸在原料中。 水上蒸馏:容器的水上有筛网,原料放在筛网上,水量最好不要在沸腾时弄湿原料。 水分蒸馏:蒸馏容器下面有排气孔,连接外来的水蒸气,上面有屏幕,
9、上面放有原料。 三种方法中,水中蒸馏设备简单,成本低,操作容易,水上蒸馏和水分蒸馏时间短,油率高。 2、水蒸气蒸馏三种常用方法的比较,(1)提取玫瑰精油时玫瑰花瓣与清水的质量比为14。 (2)提取玫瑰精油玫瑰的采集时间:在花盛开的时期采集,花的含量最多。 (3)蒸馏时影响玫瑰精油的因素:蒸馏温度过高,时间过短,产品质量差。 为了提高品质需要延长蒸馏的时间。 (4)去除液体中固体杂质的一般方法是过滤,3 .提取植物芳香油的注意事项,4 .比较玫瑰精油、橙子精油和胡萝卜素的性质、提取方法、原理,(1)玫瑰精油适合用水蒸气蒸馏法提取,理由是玫瑰精油具有_的性质。 蒸馏时采集的蒸馏液,因为_,所以是纯
10、粹的玫瑰精油。 (2)蒸馏瓶的水和原料量一定时,蒸馏过程中影响精油提取量的主要原因是蒸馏时间和. 原料量等其他条件一定的情况下,提取量随蒸馏时间的变化倾向是。 (3)如果在蒸馏中不进行冷却,精油的提取量最好保存在未密封的瓶装玫瑰精油的温度下。例如,古典大学入学考试问题以下是关于提取芳香油的问题,(5)一种植物花中精油的相对含量随花的生长时期而变化的趋势如图所示。 提取精油时提取的最佳时间为_天左右。 (6)从薄荷叶中提取薄荷油时,_填补“能”或“不能”。 采用从玫瑰花中提取玫瑰精油的方法。 (1)水蒸气蒸馏法的原理是,用水蒸气运送挥发性强的植物芳香油,形成油水混合物,冷却后,混合物再次分为油层
11、和水层。 玫瑰精油具有易挥发、难溶于水、化学性质稳定等性质,适合用水蒸气蒸馏法提取,回收的蒸馏液为油水混合物。 (2)蒸馏时很多因素影响产品的质量。 例如蒸馏温度、蒸馏时间等。 在一定范围内,随着蒸馏时间的延长,精油的提取量增加,但由于原料量等其他条件一定,超过一定时间后,提取量就不增加。 (3)蒸馏过程中冷却,将混合物重新分成油层和水层。 如果不冷却,部分玫瑰精油会因水蒸气的挥发而失去,精油的提取量会下降。 (4)玫瑰精油容易挥发,所以难以密封的瓶装玫瑰精油保存在温度低的地方,减少玫瑰精油的挥发。 (5)根据图,提取精油时最适合采摘的时间是,花中精油的相对含量最高的时间,即a天左右。 (6)
12、薄荷醇油和玫瑰精油的化学性质相似,也可以用和玫瑰精油同样的方法提取。 (1)易挥发、难溶性、化学性质稳定的不是玫瑰精油与水蒸气一起蒸馏,而是油水混合物(2)随着蒸馏温度在一定时间内蒸馏时间的延长,提取量增加,一定时间后提取量不增加;(3)一部分精油因水蒸气挥发而流失减少挥发(5)a(6)薄荷醇油和玫瑰精油的化学性质相似,(1)萃取剂的种类:常用的乙醇和丙酮是水溶性萃取剂。 (2)从胡萝卜中提取胡萝卜素的注意事项干燥过程必须控制温度和时间,防止胡萝卜素的分解。 提取过程中应采用水浴加热方式,防止温度过高。 浓缩提取液前需要过滤,其目的是过滤不溶物。 参考法3胡萝卜素的提取,1 .胡萝卜素的提取,
13、突破高参考法,用纸色谱鉴定胡萝卜素的步骤: (1)制作色谱滤纸:从18cm30cm滤纸下端到底边2cm处制作基线,在基线上a、b、c、d (2)点样品:用最细注射针溶解在石油醚中的标准样品分别采集0.10.4mL和萃取样品,分别在a、d和b、c点采集点样品。 圆点图案请迅速细致,在基线上形成直径2mm左右的圆点。 (3)色谱法:滤纸上的样品液自然挥发干燥后,把滤纸卷成圆筒状,装在装有1cm深的石油醚的密封玻璃瓶中。 各种色素完全分离后,取出滤纸,使石油醚自然挥发。 2 .胡萝卜素鉴定,(4)观察:与标准样品胡萝卜素断层带进行比较,观察提取效果。 如图所示,甲所代表的物质是胡萝卜素,乙所代表的物
14、质是其他色素和杂质。 (5)研磨时的试剂的选择:为了研磨而充分添加石英砂的胡萝卜素是耐酸的,研磨时无需添加CaCO3。 课标全国理总201737,15分钟绿色植物甲含有物质w,该物质为无色针状结晶,易溶于极性有机溶剂,不易溶于水,容易因热和湿气分解。 其提取流程为植物甲粉碎加入溶剂振动收集提取液活性炭处理过滤除去活性炭蒸馏(包括回收溶剂)再结晶成品。 回答以下问题: (1)提取物质w时的最佳原料之一是高温干燥、干燥、新鲜)的植物甲,另外两个原因是: (2)在提取物质w时振动的作用是:(3)活性炭具有很强的吸附能力,提取过程中用活性炭处理提取液的目的是。 (4)既存的丙酮(沸点56)、乙醇(沸点约78)这2种溶剂,在提取物质w时,应该选择丙酮作为提取剂。 _ _ _ . (5)这个实验工作中应该注意的事项是:回答两点就行了。 (1)提取物质w时应该选择晾干的植物甲的理由是,物质w受热,受湿气而容易分解,新鲜植物的水分量高,影响提取效率。 (2)提取时的振动的目的是使原料和溶剂充分接触,加快w的溶解。 (3)活性炭有很强的吸附能力,所以用活性炭处理提取液可以除去提取液中的色素,吸附杂质。 (4)提取物质w时,作为提取剂应该使用丙酮。 物质w容易溶解于极性有机溶剂,不容
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