体外受精胚胎移植技术IVFET16课件

1体外受精-胚胎移植技术（IVF-ET）IVF-ET的操作步骤（1）控制性超排卵；（2）卵泡监测；（3）取卵；（4）取精；（5）体外受精/显微授精；（6）胚胎体外培养；（7）胚胎移植；（8）黄体支持；（9）胚胎移植后第14天验尿确定是否妊娠；（10）妊娠后14天，B超检查胎儿数及胚胎着床部位。IVF-ET的操作步骤过程简介：IVF-ET的操作步骤指以药物的手段在可控制的范围内诱发多卵泡的发育和成熟。控制性超排卵由于自然周期中通常只有一个优势卵泡发育，受精后只能形成一个胚胎，而移植一个胚胎的妊娠率是很低的。所以需要采用控制性超排卵来增强与改善卵巢功能，以达到不受自然周期的限制、获得多个健康卵子的目的，提供多个胚胎移植。为评价卵巢刺激效果与决定取卵时间，须利用阴道B超来监测卵泡大小，并配合抽血检查E2值(雌激素)，调整用药量。当二至三个以上的卵泡直径大于1.8cm，且1.4cm以上的卵泡数与E2值相当，便可注射人绒毛促性腺激素（hCG），促使卵泡成熟。在注射hCG后34～36小时取卵。监测卵泡IVF-ET的操作步骤IVF-ET的操作步骤最常用的取卵方式是在局部麻醉下，经阴道B超引导，将取卵针穿过阴道穹窿，直达卵巢吸取卵子，并立即在显微镜下将卵子移到含胚胎培养液的培养皿中，置37℃的培养箱中培养。取卵IVF-ET的操作步骤精子取出的时间与取卵的日子为同一天。取精前洗净双手，用自慰法留取精液。所给的小杯是无菌的，留取时不要触摸杯缘及杯内。取出的精液采用上游法或Percoll密度梯度离心法处理。取精IVF-ET的操作步骤取卵后4～5小时将处理后的精子与卵子放在同一个培养皿中，共同培养18小时后，可在显微镜下观察受精情况。若精子质量太差，无法自然受精，则必须以显微注射法授精(参考卵细胞浆内单精子显微授精)。体外受精卵细胞浆内单精子显微授精

IntracytoplasmicSpermInjection(ICSI)定义：指用显微操作术将单个精子注入卵胞浆的过程适应症：

①严重精子质量异常

②既往常规IVF失败患者

③严重的抗精子抗体患者

④无精子症患者

⑤未成熟卵以及冷冻保存的卵母细胞

⑥常规IVF失败未受精卵母细胞ICSI技术发展史PZDSUZIICSI

透明带部分分离术

透明带下人工授精术

单精子胞浆内显微注射术1988年，Cohen等1990年，Fishel等1992年，Palermo等ICSI操作过程ICSI操作前准备；卵母细胞的准备；固定针与注射针的安装和调整；精子的准备；精子制动；显微注射；体外培养。ICSI操作前的准备显微操作针：持卵针、注射针；试剂：G-MOPS-PlusorG-MOPS+5%HSA，PVP（聚乙烯吡咯烷酮），G-IVF-PlusorG-IVF+10%HSA，透明质酸酶；操作皿、授精培养皿；ISCI示意图卵母细胞的准备一般为取卵后的3-5小时内，对MⅡ期卵母细胞行ICSI。卵母细胞的脱颗粒细胞：卵丘复合物移入透明质酸酶中，颗粒细胞松散后移入配子洗涤液中，用内径适宜的拆卵针反复吹吸，使颗粒细胞脱落。卵母细胞评估：去除颗粒细胞后，观察卵母细胞。卵周间隙见第一极体提示卵子核成熟，可用于ICSI。脱颗粒卵子形态ICSI精子的准备射出精液处理同常规IVF，收集活动精子备用，冷冻精子解冻后应用；附睾手术所取精子可直接装入注射皿或洗涤后使用；睾丸组织需要机械法拆碎曲精小管，制成精子悬液备用。ICSI精子制备方法ICSI﹥1×106/ml上游0.1～1×106/ml密度梯度离心＜0.1×106/ml直接离心精子制动目的：使精子胞浆膜失去稳定性，膜通透性增加，精子胞液内的细胞因子释放出来，激活卵母细胞。未经制动或制动不充分的精子行ICSI受精率降低。方法：对精子尾部后1/3进行压迫、轻击、摩擦挤压或者激光灼烧等，精子尾部形成折角、卷曲、打圈或者黏住皿底，或尾部断裂均说明制动成功。精子制动后尽快注射。精子注射目的：以最小的损害程度，将单个有活力的精子注入到成熟的卵母细胞中；方法：用持卵针施以少许负压固定卵母细胞，使第一极体处于11点至12点（或6点至7点）的位置，调节注射针至与卵母细胞赤道面同一水平，于3点处快速进针至卵内1/2位置，对注射针缓慢施以负压吸引细胞膜，直到看见注射针内的胞质突然回流加速，确认细胞膜破裂，然后缓慢进针，同时将吸入的胞质及精子一同注入到卵母细胞的3/4处，缓慢回针退出卵母细胞，完成对一个卵母细胞的ICSI。注射后的卵子移入培养皿内，放入培养箱，同IVF胚胎培养。胞浆内单精子注射a.将精子自尾部吸入穿刺针内b.将精子注入卵胞浆单精子胞浆内显微注射注意事项核对程序；涉及卵母细胞的操作都必须在加热板或加热孔板中进行；保护卵母细胞（脱颗粒，固定，破膜）；尽量选择最优精子；尽可能少的注入PVP和操作液；每个皿体外操作时间在20分钟内。IVF-ET的操作步骤受精卵在体外培养48～72小时可发育到8～16细胞期胚胎。此时依据患者的年龄、曾经怀孕与否及胚胎的质量，决定移植胚胎的数目，多余的胚胎可冷冻保存。胚胎移植一般不需麻醉。目前多在受精后2～3天移植胚胎。胚胎移植IVF-ET的操作步骤目前多采用注射法给予黄体酮支持黄体。如果确定妊娠，则改用hCG继续补充到怀孕10周。胚胎移植后14天，可由验尿或抽血确定是否妊娠。胚胎移植后补充激素马卵巢构造示意图IVF-ET的操作步骤