江西省上饶2024-2025学年高三TOP20三月联考（全国II卷）生物试题含解析

江西省上饶2024-2025学年高三TOP20三月联考（全国II卷）生物试题注意事项：1．答卷前，考生务必将自己的姓名、准考证号、考场号和座位号填写在试题卷和答题卡上。用2B铅笔将试卷类型（B）填涂在答题卡相应位置上。将条形码粘贴在答题卡右上角"条形码粘贴处"。2．作答选择题时，选出每小题答案后，用2B铅笔把答题卡上对应题目选项的答案信息点涂黑；如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其他答案。答案不能答在试题卷上。3．非选择题必须用黑色字迹的钢笔或签字笔作答，答案必须写在答题卡各题目指定区域内相应位置上；如需改动，先划掉原来的答案，然后再写上新答案；不准使用铅笔和涂改液。不按以上要求作答无效。4．考生必须保证答题卡的整洁。考试结束后，请将本试卷和答题卡一并交回。一、选择题：（共6小题，每小题6分，共36分。每小题只有一个选项符合题目要求）1．如表表示某研究组在相同条件下对几种芦苇1，5-二磷酸核酮糖羧化酶（该酶参与光合作用中二氧化碳的固定）的研究结果，下列叙述正确的是（）酶活性/μmolCO2·（mgRuBPCase·h）-1酶含量/mgpr·（g·frw）-1叶片CO2固定量/μmolCO2·（g·frw）-1水生芦苇0.9127.677.001沙生芦苇0.7807.575.675盐化草甸芦苇0.8795.144.518A．据表可知水生芦苇的表观光合速率最大B．1，5-二磷酸核酮糖羧化酶催化产物的元素组成是C、H、OC．若沙生芦苇的酶含量下降，则短时间内RuBP含量会下降D．盐化草甸芦苇光合速率比沙生芦苇低的主要原因与水生芦苇光合速率比沙生芦苇高的主要原因不同2．某兴趣小组探究乙醇的浓度和铁离子对纤维素酶活性的影响时进行了相关实验，结果如图所示，下列相关叙述错误的是（）A．该实验的因变量是酶活性，温度是无关变量之一B．铁离子可降低纤维素酶催化纤维素水解时的活化能C．铁离子的增加促进了乙醇对纤维素酶活性的影响D．改变实验所使用的底物种类，可以验证该酶的专一性3．图表示两个变量之间的关系，下列有关叙述与图示不相符的是（）A．X表示卵原细胞减数分裂的过程，Y表示细胞内染色体组的数量B．X表示氧气浓度，Y表示哺乳动物成熟红细胞吸收葡萄糖的速率C．X表示人体内细胞分化的过程，Y表示细胞核内DNA的数量变化D．X表示数量呈“J”型增长的种群所经历的时间，Y表示种群数量的增长率4．2018年1月美国学术期刊《免疫》报道，记忆T细胞会储存在脂肪组织中。下图是研究人员进行的有关实验，下列叙述错误的是A．在抗原刺激下，小鼠T细胞增殖分化形成记忆T细胞和效应T细胞B．接受脂肪组织移植前的实验鼠B不应接种相应的病原体C．实验鼠B不患病可能与移植的脂肪组织有关D．该实验足以证明脂肪组织中有记忆T细胞5．下列关于人体激素的叙述，正确的是（）A．胰岛β细胞和腺垂体都可分泌促进蛋白质合成的激素B．卵巢通过输卵管将孕激素分泌到血液中从而抑制妊娠时子宫的运动C．在甲状腺激素分泌调节中，腺垂体细胞只能接受下丘脑释放的信号物质D．腺体通过垂体门脉运输促甲状腺激素到甲状腺，促进甲状腺激素的合成和分泌6．下列有关基因重组的叙述，正确的是（）A．基因重组是随机的不定向的B．基因重组发生在受精作用过程中C．基因重组可以产生新的性状D．基因重组是生物变异的根本来源二、综合题：本大题共4小题7．（9分）回答下列（一）、（二）小题：（一）开发山楂果醋恰好让山楂中的有机酸丰富了果醋的酸味，同时也弥补生食山楂酸味大的缺陷，具体酿制山楂果醋分为以下三个阶段，请将具体过程补充完整。（1）制备山楂果原汁：选成熟的山楂果，在清水冲洗山楂果_______（填“之前”或“之后”）去梗。将山楂果切片并去籽，再添加_______，酶解适宜时间后压榨取果汁。（2）乙醇发酵：由于山楂果原汁_______，故发酵液中添加适量蔗糖，以获得酒精含量较高的果酒。果汁中加入活化的________后，在适宜环境下发酵一段时间，当发酵液中停止_______，发酵完毕待过滤，或发酵至_______，上清液即为果酒，用虹吸法取出。（3）醋酸发酵：将醋化醋杆菌进行扩大培养后，经检查菌体生长正常并无杂菌污染后接种于山楂酒-水中进行发酵，整个发酵过程需要通入_______。在发酵后期加入1．3~1．4%的食盐，其目的是调味和_______，以防止果醋被发酵分解。（二）下图为转基因抗虫烟草的培育流程，①②③④表示过程，其中②表示利用农杆菌转入受体细胞。回答下列相关问题：（1）在①过程构建重组质粒时，若用同一种限制性核酸内切酶处理Ti质粒和含目的基因的DNA片段，使两者形成粘性末端用于拼接，这种方法的明显缺点是目的基因和质粒________（答出2点即可）。另外，影响拼接效率的主要因素，除以上缺点和盐离子浓度、渗透压、温度等环境因素外，还有_______（答出2点即可）。（2）在②过程中，将图示重组Ti质粒导入农杆菌时可用______处理农杆菌，以提高转化效率。操作之后，需要特定的培养基对农杆菌进行筛选，其原因是_______，最终筛选到的对象在相应选择培养基上的存活情况是________。（3）在③过程常通过调节_______的适当配比，从愈伤组织诱导出芽和根的_____，并由此再生出新植株。获得转基因烟草后，再通过[④]_______过程实现多个世代组织培养。8．（10分）现代医学研究发现，人们在使用阿片类镇痛药缓解疼痛的同时会产生依赖性，且过量使用会致死。高等动物痛觉形成过程如下图所示，请回答下列问题：（1）图中甲神经元兴奋后通过______________（填结构）传递给乙神经元，最终传至痛觉中枢而产生痛觉。若产生痛觉的过程发生在患者打针（手臂注射）时，患者的手不会缩回，这说明人体神经中枢之间的联系是_________________________。（2）已知阿片类药物A能减少兴奋性神经递质的释放，阿片类药物B能促进钾离子外流，两者均作用于神经元之间，阻止兴奋的传导而起到镇痛作用。若药物A和药物B分别置于甲、乙神经元间，预测乙神经元膜电位很可能都是______________，两者电位差是否相同？______________（填“相同”或“不相同”）（3）阿片类镇痛药上瘾的患者经常通过共用注射器注射药物而感染艾滋病，由于艾滋病患者易发生恶性肿瘤，说明免疫系统具有_____________________功能。9．（10分）蜘蛛丝是自然界中机械性能最好的天然蛋白纤维，其强度高于制作防弹衣的凯夫拉纤维，有广泛的应用前景，但如何大量获取蜘蛛丝纤维的问题一直未解决。近期，中国科学家利用基因工程技术成功的在家蚕丝腺细胞中大量表达蜘蛛丝蛋白。（1）在转基因过程中，若利用图所示质粒构建基因表达载体，需要用_____________酶来切割目的基因，该切割方法的优点是_____________________________________________(答出一点即可)。（2）为获取大量的蜘蛛丝基因，常采用_______________技术对该基因进行扩增。扩增蜘蛛丝基因前，需根据目的基因的核苷酸序列设计__________种引物。进行扩增时需先加热至90～95℃，加入引物后冷却至55~60℃，以上调控温度操作的目的是____________________。（3）载体中的启动子是____________酶的识别结合位点，以便于驱动遗传信息的表达过程；而载体本身的扩增，需借助于载体上的_________________；载体上的标记基因的作用是_____________________________。（4）研究人员发现若将蛛丝蛋白31号位的色氨酸替换为酪氨酸，蛛丝韧性可提高50％，这项成果用到的生物工程技术为____________________________。10．（10分）科学家卡尔文将小球藻装在一个密闭容器中，通入14C标记的14CO2，给予充足的光照，每隔一定时间取样、分离、鉴定光合产物。实验结果：若光照30s后检测产物，检测到了多种带14C标记的化合物（C3、C4、C5、C6等）；若将光照时间逐渐缩短至几分之一秒，90%的放射性出现在一种三碳化合物（C3）中；在5s的光照后，同时检测到了含有放射性的五碳化合物（C5）和六碳糖（C6）。请根据材料分析下列问题：（1）卡尔文不断缩短光照时间，是为了确定___________________，从而推理出CO2中C的转移途径为___________________________。（2）取样时，卡尔文和同事每次将小球藻放入热的乙醇中，从代谢的角度分析，这样做的目的是____________________，然后用纸层析法分离出各种化合物，这种方法的原理是_____________。11．（15分）酶是一种具有生物活性和催化作用的特殊蛋白质。（1）酶制剂都有其最适反应温度，温度对酶促反应速率的影响有两种效应：一方面是当温度升高时，反应速度也加快，这与一般化学反应一样。另一方面，随温度升高而使_____________，从而降低酶促反应速度。酶的最适温度就是这两种效应平衡的结果，在低于最适温度时，_____________（填“前一种”或“后一种”）效应为主，在高于最适温度时，_____________（填“前一种”或“后一种”）效应为主。（2）为了保证酶活性，酶制剂要在低温下保存。某生物兴趣小组想验证这一观点，实验所用淀粉酶的最适温度为50℃。实验基本思路：①将等量的淀粉酶制剂，分别置于0℃，25℃，50℃保存一段时间。②在_____________的温度下测其残余酶活性。（3）除温度外，以下哪些因素也会影响酶活性_____________（填字母）。A．酸碱度B．酶浓度C．底物浓度D．抑制剂

参考答案一、选择题：（共6小题，每小题6分，共36分。每小题只有一个选项符合题目要求）1、D【解析】

叶片二氧化碳的固定量表示真正光合速率大小，此题不清楚呼吸作用速率，无法判断表观光合速率；若沙生芦苇的酶含量下降，则短时间内RuBP的消耗量会减少，其含量会上升；根据表格信息可知酶的活性和含量都会影响光合作用速率，其中沙生芦苇的酶含量和水生芦苇的酶含量无显著差异，但酶活性比水生芦苇低，所以水生芦苇光合速率高的原因主要是酶活性高。盐化草甸芦苇的酶活性和沙生芦苇的酶活性差距不大，但酶含量比沙生芦苇明显低，所以盐化草甸芦苇光合速率低的原因主要是酶含量低。【详解】A、叶片二氧化碳的固定量表示真正光合速率大小，此题不清楚呼吸作用速率，无法判断表观光合速率，A错误；B、1，5-二磷酸核酮糖羧化酶催化的产物是三碳酸，其元素组成是C、H、O、P，B错误；C、若沙生芦苇的酶含量下降，则短时间内RuBP的消耗量会减少，其含量会上升，C错误；D、根据表格信息可知酶的活性和含量都会影响光合作用速率，其中沙生芦苇的酶含量和水生芦苇的酶含量无显著差异，但酶活性比水生芦苇低，所以水生芦苇光合速率高的原因主要是酶活性高。盐化草甸芦苇的酶活性和沙生芦苇的酶活性差距不大，但酶含量比沙生芦苇明显低，所以盐化草甸芦苇光合速率低的原因主要是酶含量低，D正确。故选D。2、C【解析】

根据柱形图分析，实验的自变量是乙醇的浓度和有无铁离子，因变量是酶活性。看图可知：随着乙醇浓度的增大，纤维素酶的活性逐渐降低，可见乙醇对纤维素酶的活性有抑制作用，铁离子对纤维素酶的活性有促进作用。据此答题。【详解】A、根据该实验的目的可知，该实验的自变量是乙醇浓度和有无铁离子，温度属于无关变量，A正确；B、乙醇浓度为零时，有铁离子组酶的活性较高，说明铁离子可使纤维素酶催化纤维素水解时的活化能降低，B正确；C、从图中信息可知，乙醇对纤维素酶的活性有抑制作用，铁离子的增加抑制了乙醇对纤维素酶活性的影响，C错误；D、验证特定酶的专一性，实验的自变量是底物的种类，D正确。故选C。本题考查乙醇的浓度和无机盐离子对酶活性的影响，要求考生识记分析柱形图，得出自变量和因变量，以及实验结论的能力，能运用所学的知识准确判断各选项，属于考纲识记和理解层次的考查。3、A【解析】

题图分析：图中曲线表示随着自变量X的增大，因变量Y始终保持OA值不变。据此分析结合题目相关问题判断即可。【详解】A、卵原细胞减数分裂的过程中，不同时期细胞内染色体组数是不同的，A错误；B、哺乳动物成熟红细胞吸收葡萄糖是协助扩散，与氧气浓度无关，B正确；C、人体内细胞分化的过程是基因选择性表达过程，细胞核中的DNA数量是不变的，C正确；D、“J”型增长的种群其增长率随时间吧变化是固定不变的，D正确。故选A。4、D【解析】

据图分析，实验鼠A注射抗原，发生免疫反应，产生的记忆T细胞会储存在脂肪组织中，将脂肪组织移植到实验鼠B中，当其感染病原体时会发生二次免疫反应因而不患病。【详解】A、根据细胞免疫可知，在抗原刺激下，小鼠T细胞增殖分化形成记忆T细胞和效应T细胞，A正确；B、为了排除自身记忆细胞的影响，接受脂肪组织移植前的实验鼠B不应接种相应的病原体，B正确；C、实验鼠B不患病可能与移植的脂肪组织中含有记忆T细胞有关，发挥特异性免疫，C正确；D、实验不以证明脂肪组织中有记忆T细胞，还应做相应的对照试验，D错误。故选D。5、A【解析】

1、生长激素促进生长，促进蛋白质合成和骨生长。2、孕激素主要生理功能为：（1）抑制排卵，促使子宫内膜分泌，以利受精卵植入，并降低子宫肌肉兴奋度，保证妊娠的安全进行。（2）促进乳腺腺泡的生长，为泌乳作准备。（3）提高体温并使血管和消化道平滑肌松弛。【详解】A、胰岛β细胞分泌的胰岛素能促进蛋白质的合成，也能促进葡萄糖转运蛋白和合成，垂体分泌生长激素能促进蛋白质的合成和骨骼的生长，A正确；B、卵巢属于内分泌腺，没有导管，B错误；C、在甲状腺激素分泌调节中，腺垂体细胞除了接受下丘脑释放的信号物质，还接受甲状腺释放的信号物质，C错误；D、下丘脑分泌的多种调节激素通过垂体门脉到达腺垂体，D错误。故选A。6、A【解析】

基因重组：（1）概念：在生物体进行有性生殖的过程中，控制不同性状的非等位基因重新组合。（2）类型：①自由组合型：减数第一次分裂后期，随着非同源染色体自由组合，非同源染色体上的非等位基因也自由组合。②交叉互换型：减数第一次分裂前期（四分体），基因随着同源染色体的非等位基因的交叉互换而发生重组。（3）意义：①形成生物多样性的重要原因之一。②是生物变异的来源之一，对生物的进化也具有重要的意义。【详解】A、突变和基因重组是随机的、不定向的，是生物进化的原始材料，A正确；B、基因重组发生在减数分裂过程中，B错误；C、基因重组不能产生新的性状，只能将原有性状进行重组组合，C错误；D、基因突变是生物变异的根本来源，D错误。故选A。本题考查基因重组的相关知识，要求考生识记基因重组的概念、类型及意义，能结合所学的知识准确判断各选项。二、综合题：本大题共4小题7、之后果胶酶（和果胶甲酯酶）含糖量较低干酵母（悬液）出现气泡酵母下沉无菌空气/氧气抑制杂菌反向拼接/倒接、（自身）环化且的基因的浓度、质粒的浓度、反应时间氯化钙CaCl2不是所有的农杆菌都接纳了重组质粒在含四环素培养基上存活，在含青霉素培养基上死亡营养物质和生长调节剂/植物激素项端分生组织继代培养【解析】

1.酿酒和制醋是最古老的生物技术。与酒和醋的生产有关的微生物分别是酵母菌和醋杆菌，它们各有不同的菌种。菌种的不同，所产生的酒和醋的风味也不同。本实验的内容是制作果酒和果醋，所用的原料是葡萄或其他果汁。葡萄酒是酵母利用葡萄糖进行酒精发酵(乙醇发酵)的产物。酵母菌只有在无氧条件下才能进行酒精发酵，即将葡萄糖氧化成乙醇，而且当培养液中乙醇的浓度超过16%时，酵母菌就会死亡。葡萄糖氧化成乙醇的反应式如下。醋杆菌在有氧条件下才能将乙醇氧化为醋酸，醋杆菌所产生的醋酸可使培养液中醋酸的含量高达13%。2.基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．【详解】（一）（1）制备山楂果原汁通常选成熟的山楂果，为了避免杂菌污染，通常在用清水冲洗山楂果之后去梗。将山楂果切片并去籽，为了提高出汁率和澄清度，通常需要添加果胶酶（和果胶甲酯酶）处理，酶解适宜时间后压榨取果汁。（2）乙醇发酵时通常需要在发酵液中添加适量蔗糖，以弥补山楂果原汁含糖量较低的不足，同时也是为了满足酵母菌发酵需要的底物量，从而获得酒精含量较高的果酒。然后在果汁中加入活化的干酵母（悬液）后，置于适宜环境下进行发酵，由于酵母菌无氧呼吸的产物是酒精和二氧化碳，所以在发酵过程中会有气泡产生，当发酵液中不再出现气泡时，意味着发酵完成，然后过滤获得果酒；也可发酵至酵母下沉后，用虹吸法取出上清液即为果酒。（3）醋酸发酵中，由于醋化醋杆菌在有氧气的条件下将酒精变为为乙醛，进而变为乙醇，所以整个发酵过程需要通入无菌空气/氧气。在发酵后期加入1．3~1．4%的食盐，食盐起到了调味和抑制杂菌的作用，进而防止果醋被其他微生物发酵分解。（二）（1）①为构建基因表达载体的过程，若用同一种限制性核酸内切酶处理Ti质粒和含目的基因的DNA片段，则两者会出现相同的粘性末端从而使得拼接变得容易，但这种方法存在明显的缺点是在拼接时会出现反向拼接/倒接、（自身）环化等情况。影响拼接效率的因素主要有盐离子浓度、渗透压、温度等环境因素，除此外，还有且的基因的浓度、质粒的浓度和反应时间也会影响拼接的效率。（2）②过程为将目的基因导入受体细胞的过程，将图示重组Ti质粒导入农杆菌时，为了提高导入的成功率，可用氯化钙CaCl2处理农杆菌，以提高转化效率。因为导入的成功率较低，也就是说，并不是所有的农杆菌都接纳了重组质粒，可能有的导入的是普通质粒，或者没有导入成功，所以需要在特定的培养基对农杆菌进行筛选，由于图中重组质粒上含有标记基因四环素抗性基因，而抗青霉素的基因被破坏，为了筛选出成功导入重组质粒的农杆菌，需要将待筛选的农杆菌分别接种在含有四环素的培养基和含青霉素的培养基上进行筛选，最终筛选到成功导入重组质粒的农杆菌在相应选择培养基上的存活情况是在含四环素培养基上存活，在含青霉素培养基上死亡。（3）③过程为再分化成植株的过程，该过程中需要通过调节营养物质和生长调节剂/植物激素的适当配比，从而实现由愈伤组织诱导出芽和根的项端分生组织的目的，并由此再生出新植株。获得转基因烟草后，再通过[④]继代培养过程实现多个世代组织培养，从而实现了转基因烟草的扩大培养。熟知果酒、果醋的制作原理以及基因工程的基本原理和操作要点是解答本题的关键，辨图分析能力是本题考查的主要能力。8、突触低级中枢受高级中枢控制（答案合理即可）外正内负不相同监控和清除【解析】

1、神经元未受到刺激时，K+外流，细胞膜内外表现为外正内负的静息电位，当某一部位受到刺激时，Na+内流，其膜电位表现为外负内正的动作电位。2、识图分析可知，兴奋的传递方向为由甲神经元到乙神经元，甲、乙神经元之间联系的结构为突触，图中为轴突-胞体型突触，兴奋最终经过低级中枢脊髓传至高级神经中枢大脑皮层，产生痛觉。【详解】（1）图中甲、乙神经元之间的联系的结构为突触，兴奋通过突触由甲传至乙，最终传至痛觉中枢而产生痛觉。若产生痛觉的过程发生在患者打针（手臂注射）时，患者的手不会缩回，缩手反射的低级中枢在脊髓，这说明人体的低级中枢脊髓受到高级神经中枢大脑皮层的控制。（2）根据题意可知，药物A能减少兴奋性神经递质的释放，则将其放置在甲、乙神经元之间的突触，则甲神经元产生的兴奋性神经递质释放减少，不足以引发乙神经元形成动作电位，因此乙神经元保持原来的静息状态，即膜电位为外正内负；根据题意阿片类药物B能促进钾离子外流，则将其放置在甲、乙神经元之间的突触，则其促进乙神经元钾离子外流，使其保持静息电位，但是静息电位差绝对值增大，膜电位仍然为外正内负。因此若药物A和药物B分别置于甲、乙神经元间，预测乙神经元膜电位很可能都是外正内负，但是二者作用的结果形成的静息电位的电位差不同。（3）免疫系统的功能包括：防御、监控和清除，艾滋病患者易发生恶性肿瘤，说明免疫系统具有监控和清除的功能。本题考查神经调节和免疫系统的功能的知识点，要求学生识记免疫系统的功能及其表现，把握神经调节中兴奋的产生机理，理解动作电位和静息电位的产生过程及其原因，掌握兴奋在神经元之间的传递过程和影响因素，能够结合题意和所学的知识点解决问题，这是该题考查的重点。9、XbaI和SacI防止目的基因自身环化、防止目的基因反向连接PCR2使DNA解链，然后使引物结合到互补DNA链上RNA聚合酶复制原点重组DNA的鉴别与选择蛋白质工程【解析】

1、基因工程的操作步骤包括：目的基因的获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。其中基因表达载体的构建是基因工程的核心步骤。基因表达载体的构建：①过程：一般用同一种限制酶切割目的基因和运载体，再用DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组DNA分子。②目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在并且可以遗传给下一代并表达和发挥作用。③基因表达载体的组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因。（1）启动子在基因的首段，它是RNA聚合酶的结合位点，能控制着转录的开始；（2）终止子在基因的尾端，它控制着转录的结束；（3）标记基因便于目的基因的鉴定和筛选。2、PCR扩增技术：PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：（1）模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备。（2）模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。（3）引物的延伸：DNA模板--引物结合物在Taq酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。【详解】（1）识图分析可知，构建基因表达载体时，目的基因需要插入到启动子和终止子之间，图中启动子和终止子之间存在XbaI和SacI的酶切位点，因此需要用XbaI和SacI限制酶切割目的基因，以产生与质粒相同的末端，相比用同一种酶进行酶切，用两种酶切割可以防止目的基因自身环化或防止目的基因反向连接。（2）为获取大量的蜘蛛丝基因，常采用PCR扩增技术扩增目的基因。利用PCR技术扩增蜘蛛丝基因前，需根据目的基因的核苷酸序列设计2种引物分别与2条模板链结合；进行PCR时需加热至90~95℃然后冷却至55~60℃，此操作的目的是使DNA解链，然后使引物结合到互补DNA链上。（3）基因表达载体中的启动子能够与RNA聚合酶识别和结合，才能驱动转录过程，而载体本身的扩增，需借助于载体上的复制原点进行，载体上的标记基因的作用是鉴别与筛选含有重组DNA的受体细胞。（4）研究人员发现若将蛛丝蛋白31号位的色氨酸替换为酪氨酸，蛛丝韧性可提高50％，这是对现有蛋白质进行的改造，因此利用的是蛋白质工程技术。本题考查基因工程的知识点，要求学生掌握基因工程的操作步骤，特别是把握基因表达载体的组成及其构建过程，识记启动子和复制原点的作用，理解限制酶的选择原则并结合图示正确