（高清版）DB51∕T 1317-2011 蜜蜂白垩病诊断规程

ICS65.202.30备案号：30920-2011DB51/T1317—2011蜜蜂白垩病诊断规程I 12规范性引用文件 13术语和定义 14诊断人员 25发病规律 26现场检测 27实验室检测 28结果判定 3DB51/T1317—2011本标准由四川省畜牧食品局提出并归口。本标准由四川省质量技术监督局批准。本标准由四川省蜂业管理站、四川省蜂产品质量检验中心起草。本标准主要起草人：王顺海、邹志坚、赵平、李念周、罗勤、唐友海。1DB51/T1317—2011蜜蜂白垩病诊断规程本标准规定了蜜蜂白垩病的发病规律、现场检测、实验室检测等方面的内容。本标准适用于蜜蜂白垩病的诊断、检疫。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682-2008分析实验室用水规格和试验方法DB51/T657-2007蜜蜂检疫技术规范3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。由受精卵发育而成的生殖器官发育不完全的雌性蜂，具有二倍染色体，是蜂群的主体，担负着蜂群内外的主要工作。由未受精卵发育而成，具单倍染色体，头近圆形，身体粗壮。主要是寻求与处女王交配，只有在蜂群需要时才出现。由12日-18日龄的工蜂分泌蜡鳞筑造成蜂巢排列而成，是蜜蜂繁衍生息、储藏食粮的场所。每片培育蜜蜂卵、幼虫、蛹的巢脾称为子脾；储存蜂蜜、花粉的巢脾称为蜜脾、粉脾。封了盖的巢脾。封盖子一般位于巢脾的中下部，呈黄褐色，形状规则，轮廓清晰；封盖蜜一般位于巢脾的上部，色浅，轮廓不清晰，具波浪纹。2DB51/T1317—20113.5蜜蜂白垩病beechalkbrooddisease又名“石灰质病”,是蜜蜂球囊菌寄生而引起的蜜蜂幼虫死亡的传染性真菌病。一般4日龄的蜜蜂幼虫，特别是雄蜂幼虫易感染。4诊断人员4.1诊断人员符合DB51/T657-2007蜜蜂检疫技术规范中对检疫人员的要求。5.1发病条件多流行于初夏、秋季节，特别是阴雨潮湿，温度变化频繁的气候条件下易产生。5.2病原来源被病原污染的饲料、患病的幼虫尸体或被病原污染的巢脾是病害传播的主要来源。5.3典型症状渐变成灰色至黑色。虫尸干枯后，变成一块似白垩状的质地较为坚硬的块状物，表面覆盖白色的菌丝与深墨绿近黑色孢囊。6现场检测6.1箱外检查蜂箱外巢门近旁有被工蜂拖出的幼虫干尸，质硬，有的干尸呈苍白色，表面有一层绒毛膜，劈开幼虫干尸可见内心为浅棕色；有的干尸为部分或全部黑色，表面有一层黑色颗粒状物质。6.2开箱检查在已封盖的子脾上有呈星点式分布的被工蜂咬开的巢房，巢房内有向一侧帖壁的幼虫干尸，形态完整，质地柔软，无光泽，无臭味，干尸有的为白色，有的为部分或全部黑色。7.1设备、材料和试剂低倍光学显微镜、恒温培养箱、超净工作台。7.1.2材料3DB51/T1317—2011无菌培养皿、载玻片、试管(10ml)、无菌镊子、接种针。7.1.3试剂实验室用水(符合GB/T6682-2008中三级水的规格要求)、马铃薯酵母膏琼脂培养基、青霉素、链霉素、75%酒精。7.2抽样7.2.1抽样比例当蜂群数量小于或等于10群时，均采样；在10群～100群时，以10群采样量为基础，每增加10群，采样量增加1群；在101群～200群时，按总群数的15%采样；在201群以上时，按总群数的10%采样。采样时，每群蜂取10只~20只幼虫送实验室检查。若现场诊断有疑似感染蜜蜂球囊菌时，可以根据实际情况，增加采样的比例。7.2.2抽样方法从每个蜂群中随机抽取子脾一张，按照5点式采样方法，分别从巢脾四角与中央各开启相邻的封盖幼虫房5个，观察是否有患病幼虫存在。采样时，若发现明显变色或死亡的幼虫则不受所圈定的部位限制，应尽量采集送实验室检查。7.3实验室检测7.3.1镜检法取幼虫尸体样品于无菌培养皿中，刮取样品表层物于干净的载玻片上，加一滴无菌蒸馏水，制成水浸片，等5分钟后在低倍光学显微镜下观察。放大倍数为400或600。有呈白色似棉花状的菌丝和椭圆形内含有孢子的孢囊，可初诊为白垩病。7.3.2分离培养将马铃薯酵母膏琼脂培养基加热溶化冷却至47℃时加入青霉素、链霉素各50万单位抑制杂菌生长，然后用接种针取病死幼虫体表物接种到培养基上，一般接种3个点~4个点，置27℃~29℃培养，72小时后进行观察，当真菌在培养基上产生孢囊后，用接种针取少许孢囊置载玻片上，做水浸片，在低倍光学显微镜下观察，可看到菌丝内有许多细胞核，圆形孢子囊内含有孢子球，球内含有孢子，孢子表面平滑。8结果判定在现场检查时，若见到巢门前、箱底或巢脾上长有白色菌丝或黑白两色的幼虫尸体等临床症状时，可做出初步判断。在分离