《烟草主要病毒核酸恒温扩增检测工作报告》

PAGEPAGE1烟草主要病毒核酸恒温扩增检测工作报告一、工作简况《烟草主要病毒核酸恒温扩增检测》项目为国家烟草专卖局2010年下达的标准预研项目，属标准类技术报告，由中国农业科学院烟草研究所主持实施，本项目自2010年1月份国家烟草专卖局下达了项目任务后，积极自筹经费，在中国烟草资源平台的支持下，依据目标任务、起止时间按照技术路线、实施方案、预期成果开展相关技术研究。项目从论证、立项、实施至总结计划开展2年研究，到2011年10月结束，项目按期完成。二、本项目的适用范围1、适用范围本研究为烟草主要病毒病原检测技术，适用于烟草育苗和田间植株的现场监测，预防病毒感染，切断病毒传播，保障我国烟草行业健康持续发展。2、相关领域的国内外研究情况目前用于烟草病毒检测的方法主要有生物学诊断、电子显微镜、酶联免疫吸附技术（ELISA）以及分子生物学等方法：生物学方法主要是鉴别寄主反应或指示植物等，这种仅仅以鉴别寄主反应或指示植物为依据的方法,虽曾广泛运用,却由于其检测速度慢、受环境和季节影响较大等诸多因素限制而运用较少。电子显微镜技术虽然可以直接观察到病毒粒子的存在，但其操作复杂、耗费时间长；酶联免疫吸附技术（ELISA）虽具简便、快速等优点,但灵敏度较差,且存在非特异性反应，在PVY尚未引发感染或感染的极早期很难用抗体法检测出来；上述三种方法均不能快速、简便、准确地检测烟草普通花叶病毒。近年来发展起来的以分子生物学技术为基础的病毒检测方法主要有RT-PCR法以及PCR微量板杂交等检测方法，克服了上述三种方法的缺点，在实验室条件下实现了烟草普通花叶病毒的相对快速、准确检测。由于常规的PCR检测需要昂贵的PCR仪，凝胶电泳和成像系统，使得RT-PCR检测法难以用于现场的快速检测，这大大限制了RT-PCR检测方法在生产中的推广应用。进行烟草主要病毒病早期检测并采取预防措施是烟草生产中降低烟草病毒病流行风险、减少发病造成巨额经济损失的有效手段，所以建立简单、快速、高灵敏的检查方法，并开发适于现场应用的烟草主要病毒检测方法就显得极为重要。三、项目的主要研究成果（1）提供详细的技术研究报告，可形成烟草TMV、PVY病毒病检测的技术规范或标准。（2）发表SCI论文一篇。YanhuaLiu，ZhideWang，YumeiQian，etal“Rapiddetectionoftobaccomosaicvirususingthereversetranscriptionloop-mediatedisothermalamplificationmethod”[J]，ArchVirol(2010)155:1681–1685。（3）申请发明专利两项。烟草普通花叶病环介导等温扩增检测方法，申请号：2009102299106；一种用于检测马铃薯Y病毒的试剂盒及检测方法，申请号：2011100474061。四、项目预期可产生的社会、经济效益由国家烟草专卖局牵头，将本研究成果尽快形成技术规范或标准发布，为漂浮育苗苗期检疫以及栽培土壤环境的监测，预防病毒感染，切断病毒传播，保障我国烟草生产的健康持续发展。1．社会经济效益通过本研究提供烟草普通花叶病毒、马铃薯Y病毒环介导等温扩增检测方法，简化检测程序，比普通PCR检测灵敏度高100倍，且不需要特殊、昂贵的实验仪器，一把热水壶或普通金属浴即可满足实验要求，检测的特异性强，实现了方便、快捷的田间、现场检测。为烟草生产中病毒病的检测及防治提供科学依据。在国内外同领域研究属领先水平。2．在经济发展中的作用该研究成果预计在形成技术规范或标准后可快速、准确地鉴定烟草普通花叶病、马