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文档简介

人类免疫缺陷病毒抗体检测（酶联免疫法）标准操作规程**生物操作方法：将试剂盒平衡至室温，取出所需的条板，剩余的即时封存。用去离子水合蒸馏水25倍稀释浓缩洗涤液。将所需数量的条板固定于支架按顺序编号设置样品孔、外部对照孔、阳性对照孔和阴性对照孔每次实验需设外部对照阳性对照2孔、阴性对照1孔。在样品孔中加入100ul待测样品，阴性、阳性对照及外部对照每孔加入100ul，轻拍混匀。置37℃温育60分钟。置洗板机用洗涤液充分洗涤5遍，扣干。每孔加入100ul酶标记物，轻拍混匀，置37℃温育30分钟。重复步骤⑥。在所有孔内加显色A、显色B剂各50ul，轻拍混匀，置37℃避光温育30分钟。每孔加入50ul终止液终止显色反应，用酶标仪（双波长450nm/630nm）测定各孔A值。结果判定：临界值Cutoff＝0.1﹢阴性对照的平均A值（阴性对照的平均A值小于0.08按0.08计算，大于0.08按实际值计算），样品的A值≥Cutoff值为艾滋病抗体阳性；样品的A值〈Cutoff值为艾滋病抗体阴性。同时满足以下条件的实验是有效的。NC<0.080PCx>0.8，抗-艾滋病-2阳性对照OD值>0.3双波长读数，显色剂空白≦0.040，单波长读数，显色剂空白≦0.080.计算COV：COV=PCxX10%（若PCx>2.5按2.5计算）初筛阳性者应重新取样进行双盲复试，复试阳性者应按照“全国艾滋病检测管理规范”送艾滋病确认实验室进行相关确认试验。

**生物操作方法：配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。编号：将样品对应微孔板按序号编号，每板应设阴性对照3孔，阳性对照1型，2型各1孔，空白对照1孔。（用双波长检测，可不设空白对照孔）。加样：分别在相应孔中加入待测样品或阴性，阳性对照100ul.温育：用封板膜封板后，置37±1℃温育60±2分钟。洗板：小心揭掉封板膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量拧干。加酶：每孔加入酶标试剂100ul，空白孔除外。温育：用封板膜封板后，置37±1℃温育30±1分钟。洗板：操作同步骤5.显色：每孔加入显色剂A，B液各50ul，轻轻振荡混匀，37±1℃避光显色30±1分钟。测定：每孔加终止液50ul，轻轻振荡混匀，10分钟内测定结果。设定酶标仪波长于450nm处（建议用双波长450nm/600-650nm），用空白孔凋零后测定各孔A值。结果判读：阴性对照孔A值≤0.10，阳性对照孔A值≥0.80，否则实验无效。若有1孔阴性对照A值大于0.1应舍弃；若两孔或两孔以上阴性对照A值大于0.1，实验无效。阴性判定：样品A值＜临界值（CUTOFF）者为艾滋病抗体阴性。阳性判定：样品A值≥临界值（CUTFF）者为艾

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