《游离DNA保存采血管》

ICS

CCS

团体标准

T/FJASXXX—XXXX

游离DNA保存采血管

CellFreeDNAPreservativeTubes

（征求意见稿）

2023-xx-xx发布2023-xx-xx实施

福建省标准化协会发布

游离DNA保存采血管

1范围

本标准规定了游离DNA保存采血管的产品总体要求、试验方法、检验规则及色标、生产

商提供的信息、生产条件、运输及贮存、有效期等要求。

本标准适应于游离DNA保存采血管制造商、开展游离DNA生物学功能及临床应用研究的

科研院所、开展游离DNA检测（如NIPT、肿瘤液体活检、病原微生物宏基因组检测等）的

医学检验实验室等。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本条款的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其

随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修改版均不适用于本标准，凡是不注日期的引用

文件，其最新版本适用于本标准。

WS/T224-2018真空采血管的性能验证

YY/T0314-2021一次性使用人体静脉血样采集容器

GB15979-2002一次性使用卫生用品卫生标准

3术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。

3.1

游离DNAcell-freeDNA

存在于外周血中、游离于细胞外的机体内源性DNA。

3.2

游离DNA保存液cellfreeDNApreservationsolution

为了进行预定的检验，放置在采血管内的便于血样中游离DNA保存的物质（不包括用于

内表面处理的不能清除掉的物质）。

3.3

保存容器container

采血管上除去附加物和丁基胶塞、安全帽用于装血样的部分。

3.4

丁基胶塞butylrubberclosures

1

用丁基橡胶制成用于密闭保存容器的组件。

3.5

安全帽protectivecap

避免手指或机械装置触及到丁基胶塞与血样接触的部分，以免造成污染所设计的屏障，

一般为塑料注塑件。

3.6

保水性water-retainingproperty

容器保存液体和防止液体流失、挥发方面的性能。

3.7

无创产前基因检测NIPTNoninvasiveprenataltesting

通过抽取孕妇外周血，提取血浆中的游离DNA，采用高通量测序技术，结合生物信息分

析方法，评估胎儿患21三体综合征、18三体综合征和13三体综合征疾病风险的临床检验

方法。

3.8

肿瘤液体活检LiquidBiopsy

通过检测或分析外周血等体液中肿瘤细胞来源的游离DNA的相关信息，实现对肿瘤的早

筛、诊断、预后评估和治疗指导等。

3.9

病原微生物宏基因组检测mNGSMetagenomicsNextGenerationSequencing

对感染样本（包括血液样本）中微生物的核酸(DNA/RNA)进行高通量测序，将获得的序

列与微生物数据库进行比对，从而确定样本中存在的病原体，为临床疑似感染病例的诊断提

供病原学证据。

3.10

YY/T0314-2021中确定的术语和定义适用于本标准。

4总体要求

4.1材料及结构

4.1.1丁基胶塞和安全帽，应光亮洁净无锐边；保存容器外观应无杂质，没有会导致使用者

的皮肤或手套受到意外划伤、刺破或磨伤的锐边、毛刺或粗糙表面。

4.1.2保存容器与丁基胶塞配合不应松动，安全帽应完全盖住丁基胶塞，塞子与保存容器

2

紧密结合；应能经受至少4次取下和装上塞子，不出现泄漏。

4.1.3需要对保存容器、丁基胶塞的材料和预期的适用性进行确认，充分考虑其材料的可承

受离心力、耐压、防摔、抗冻、耐辐照等性能。按规定的方法进行试验时，采血管纵轴方向

应能承受最小3000g的离心加速度，且无断裂、坍塌、裂缝或其他可见缺陷。

注：无菌管采用辐射（辐照）的灭菌方法，要求其材料满足耐辐照的能力，辐照应是一个确

认的过程。

4.2游离DNA保存液

4.2.1应为清亮透明液体，不得有沉淀、颗粒或絮状物及体积变少等现象。

4.2.2应充分考虑保存液的稳定性，pH值、光照、贮存温度和时间等因素对其影响，PH值

5.5±10%。

4.2.3保存液的体积应在规定体积的90%-110%之间。

4.3非无菌、无菌和无DNA管

4.3.1非无菌管

4.3.1.1采血管内部的细菌菌落数≤10cfu/mL。

4.3.1.2采血管内部不得检测出大肠菌群。

4.3.1.3采血管内部不得检测出致病性化脓菌（绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌与溶血性链球

菌）。

4.3.1.4采血管内部的真菌菌落数≤10cfu/mL。

4.3.2无菌管

用辐照灭菌方式实现，在产品有效期内应是无菌的。

注：对于无菌管，通常采用辐射（辐照）的灭菌方法，具体的灭菌过程确认和常规控制，参

见GB18280（ISO11137）

4.3.3无DNA管

采血管内部不得检测出DNA残留。

4.4抽吸体积

抽吸体积加上游离DNA保存液的体积应在公称容量的90%-110%以内。

4.5保存有效期

游离DNA保存液应能在常温（6℃-37℃）静置条件下保存人体静脉血样本中游离DNA

至少7天，常温（6℃-37℃）运输条件下保存人体静脉血样本中游离DNA至少4天。

4.6凝血和溶血要求

3

4.6.1按照正确的采血步骤使用采血管采血后，充分混匀的样本在保存有效期内在采血管中

不应出现凝块。

4.6.2按照正确的采血步骤使用采血管采血后，充分混匀的样本在保存有效期内进行离心，

血浆不应出现溶血现象（临床原因除外）。

4.7游离DNA保存效果

4.7.1使用采血管收集静脉血并离心获得血浆，提取血浆游离DNA，每1mL血浆中获得的游

离DNA应不少于10ng（除提取因素外）。

4.7.2对提取的游离DNA进行片段大小检测，主峰应在166bp左右，且无大片段污染。

4.7.3临床检测项目可根据该项目的行业或企业标准来判定是否满足临床检测需求。

5试验方法

5.1材料及结构

5.1.1在平均照度为300lx～750lx范围内且无放大条件下，以目力和手感检测的方法进

行检验。

5.1.2保存容器与丁基胶塞配合采用拉拔试验进行测试；安全帽是否完全盖住丁基胶塞以目

测的方法进行；荧光泄漏试验方法参考YY/T0314-2021附录C。

5.1.3管体强度检测方法参考WS/T224—20184.3。

5.2游离DNA保存液

5.2.1保存液外观用目力检测的方法进行。

5.2.2在温度25℃条件下，用经校准的pH计对保存液进行pH值检测。

5.2.3保存液体积测量方法

5.2.3.1仪器

经校准的电子天平，精确至小数点后三位，即0.001g。

架子，在称重期间保持采血管直立且处于正确方位。

移液枪、离心机。

5.2.3.2试验步骤

5.2.3.2.1将采血管置于天平上，称皮重（置零），记录下数据A。

5.2.3.2.2将称重后的采血管置于离心机中，3000g离心1mim，取下采血管。

5.2.3.2.3轻轻打开采血管的安全帽，使用移液枪缓慢吸取游离DNA保存液，直至完全吸尽

为止后盖上安全帽。

4

5.2.3.2.4将无游离DNA保存液的空采血管置于电子天平上，称重（置零），记录下数据B。

5.2.3.2.5数据A-B即为游离DNA保存液质量，再用V=M/ρ换算成体积。

5.3非无菌、无菌和无DNA管

5.3.1非无菌管

5.3.1.1采血管内部的细菌菌落总数

按照GB15979-2002附录B2方法进行检验。

5.3.1.2采血管内部的大肠菌群

按照GB15979-2002附录B3方法进行检验。

5.3.1.3采血管内部的致病性化脓菌

5.3.1.3.1绿脓杆菌

按照GB15979-2002附录B4方法进行检验。

5.3.1.3.2金黄色葡萄球菌

按照GB15979-2002附录B5方法进行检验。

5.3.1.3.3溶血性链球菌

按照GB15979-2002附录B6方法进行检验。

5.3.1.4采血管内部的真菌菌落数

按照GB15979-2002附录B7方法进行检验。

5.3.2无菌管

无菌及验证方法按WS/T224-2018中4.7条规定的方法进行检验。

5.3.3无DNA管

任意抽取需检测的无DNA采血管3支，用10mL0.9%无菌氯化钠溶液进行振荡溶解，

作为供试液备用。取2mL供试液提取供试DNA样本。取2mL0.9%无菌氯化钠溶液作为阴性

对照。取人细胞或大肠埃希菌DNA作为阳性对照。用SYBRGreen荧光PCR法分别检测供试

DNA样本、阴性对照和阳性对照（引物参见附录A）。供试品管和阴性对照荧光PCR法检测

结果Ct值≥40或无Ct值，且阳性对照结果﹤30时，供试品管为合格。供试品管Ct值﹤40，

阴性对照Ct值≥40或无Ct值，阳性对照Ct值﹤30时，供试品管为不合格。阴性对照Ct

值﹤40或阳性对照Ct值≥30或无Ct值时，实验无效。

5.4抽吸体积

抽吸体积的验证按WS/T224—2018中4.2条规定的方法进行检验。

5.5保存有效期

5

对抽取人体静脉血样本的采血管常温（6℃-37℃）静置贮存7天或常温（6℃-37℃）运

输4天后，通过5.7游离DNA保存效果试验进行判断。

5.6凝血和溶血要求

5.6.1按照正确的采血步骤进行采血后，充分混匀血液样本，在样本保存有效期内任意一天，

在显微镜下观察血液样本应无凝块。

5.6.2按照正确的采血步骤进行采血后，充分混匀血液样本，在样本保存有效期内任意一天，

对血液样本进行离心，目力检测上层血浆，不应出现溶血现象（临床原因除外）。

5.7游离DNA保存效果

5.7.1采血管对游离DNA的保存效果受到采血后样本保存的时间、环境（温湿度等）、采血

管批次等方面的影响，需要对采血管的性能进行充分验证：

a)模拟临床样本的采集、运输及试验过程，比较在预定的条件和采集样本后立即检测两种

情况下，通过对比实验参数判断采血管在预定的条件下是否满足要求。

b)模拟临床样本的采集、运输及试验过程，通过比较考察管与比对管的差异，进行采血管

的性能验证，必要时可建立新的样本采集、运输及保存的方式。

5.7.2检测方法

5.7.2.1仪器

低温离心机、核酸定量荧光计、毛细管电泳核酸分析仪。

5.7.2.2试剂

游离DNA提取试剂、荧光计配套的荧光染料法核酸检测试剂、毛细管电泳核酸分析仪配套耗

材和试剂。

5.7.2.3检测步骤

5.7.2.3.1采集3例以上血液样本。

5.7.2.3.2将采血管在4℃条件下1600g离心10分钟，将上清转移至新的离心管中，注意不

要吸取到中间层白细胞；将所得上清在4℃条件下16000g离心10分钟，将血浆转移到一个

新的离心管中备用。

5.7.2.3.3使用游离DNA提取试剂从4mL血浆中的提取游离DNA。

5.7.2.3.4使用荧光染料法核酸检测试剂和核酸定量荧光计检测游离DNA的浓度，结果应符

合4.7.1的要求。

5.7.2.3.5使用毛细管电泳核酸分析仪进行游离DNA片段大小检测，结果应符合4.7.2的要

求。

6

6检验规则

6.1检验要求

有下列情况时都应进行检验：

a)在新产品投产前或准备用于临床之前、转厂生产，应对要求中的所有指标进行充分检验。

b)产品正常生产时，每年应至少对要求中的所有指标进行检验一次。

c)原料、工艺、配方有重大改变时，应对可能影响的指标进行检验。

d）停产一年后恢复生产时。

e)新的批次在出厂和使用前应进行抽检。

f）省级以上药品监督管理部门对产品质量进行监督抽查时。

6.2判定规则

检验有一项不合格，可加倍抽样检验，经复验合格该批产品检验合格，若复验仍有一项

不合格，则该批产品检验不合格。

7色标、生产商提供的信息、生产条件、运输及贮存、有效期

7.1色标

游离DNA保存采血管应与其他真空采血管区分，安全帽及标签色彩部分使用紫色PANTONE

236C。

注1：色号参考国际标准色号：PANTONEColor（潘通色卡）。

注2：标签的色标不是指整个标签的颜色，而是指其色彩部分。

注3：安全帽颜色是指安全帽的外观颜色，不包括安全帽内部的塞子颜色。

注4：本标准中的色标为推荐色标。

7.2生产商提供的信息

7.2.1采血管应附有便于使用者能够快速识别产品的信息，将产品的正确使用方法、功能、

要求方面的信息传递给使用者。这些信息应标注在采血管的标签上和（或）一个采血管或多

个采血管的包装上（内）。

7.2.2采血管的标签不应将采血管全部环绕。标签内容正确，清晰易辨识，粘贴平整，无皱

褶翘边、划破、污渍。

7.2.3最小销售单元标签应符合《医疗器械说明书和标签管理规定》（国家食品药品监督管

理总局令第6号）要求，标签上应标明必要信息，包含但不限于以下内容：

a)制造商名称或商标和地址；

b)保存液的识别或用途；

c)相应的“无菌”标识，表明特定微生物状态或洁净程度说明；

7

d)避免二次使用标识；

e)生产许可证编号、产品技术要求编号及注册证编号；

f)批号，以批（LOT）开头或系列号；

g)采血管或其部件能安全有效使用的陈述，即有效期，以年月日（CCYYMMDD）表示；

h)公称液体容量；

i)充装线；

j)特殊存储条件和（或）处置条件；

k)如必要可有相应的警示及其他特殊信息。

7.2.4应在采血管标签上给出内装添加剂保存液及用途的说明，并用颜色进行标识。

注：标签上颜色部分应与安全帽色标一致。

7.3生产条件

游离DNA保存采血管生产应严格按照《医疗器械生产质量管理规范》要求进行生产，生

产车间应符合GB50073-2013《洁净厂房设计规范》和YY/T0033-2000《无菌医疗器具生产

管理规范》中十万级（100000级）的相关规定，实验室区域应符合万级（10000级）的规定，

其他检验设施设备应符合相应要求。

7.4运输及贮存

7.4.1未使用过的采血管应在制造商规定的温度下（一般为常温6℃-37℃）避光运输和贮存。

7.4.2采血后，可在6℃-37℃保存和运输，温度保持恒定。

7.5有效期

游离DNA保存采血管保质期为1年。

8

附录

（资料性附录）

荧光PCR引物

物种序列名称序列

正向引物5'-GTACACACCGCCCGTC-3'

18SrRNA

反向引物5'-TGATCCTTCTGCAGGTTCACCTAC-3'

正向引物5'-CCTAYGGGRBGCASCAG-3'

16SrRNA

反向引物5'-TTACCGCGGCTGCTGGCAC-3'

9

参考文献

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