含生化黄腐酸的有机肥料 种子发芽指数检测方法编制说明

团体标准《含生化黄腐酸的有机肥料种子发芽指数检测方法》（征求意见稿）编制说明一、项目来源、起草单位等根据《广西肥料协会团体标准管理办法（试行）》的相关要求以及广西肥料协会下达的《广西肥料协会关于下达2023年第二批团体标准项目计划的通知》文件精神，由广西壮族自治区分析测试研究中心提出，广西壮族自治区分析测试研究中心、广西西大检测有限公司、广西勤德科技股份有限公司、广西金穗生态科技集团股份有限公司、桂平市环海肥业有限公司、广西力源宝科技有限公司、广西兴嘉农生态科技有限公司、广西桂本生物科技有限公司、融水县融丰农业生产资料有限责任公司、广西马山县百龙肥业有限公司、广西深博农业科技有限公司、安琪酵母股份有限公司、广西丹宝利酵母有限公司、广西好生宝肥料科技有限公司、广西对比生物科技有限公司、广西上思县华桂生物科技有限公司、广西鑫燊生态环境科技有限公司、南宁市俄罗菲化肥有限公司、广西博冠农业科技有限公司、南宁市三鑫复合肥料厂、广西壮族自治区新材料技术工程院等单位共同起草的团体标准《含生化黄腐酸的有机肥料种子发芽指数检测方法》已获批立项。二、项目背景、必要性和意义 蔗糖产业是广西支柱产业，由蔗糖加工延伸的副产品糖蜜积水、酵母发酵废液、酒精发酵废液等所制备得到的生化黄腐酸相关产品，深受肥料行业及种植终端的喜爱，具有促进根系生产、增强作物抗逆性、提高肥料利用率、增加农作物产量和提高农产品品质等作用，从而经常被添加到各类肥料产品中。NY/T525-2021有机肥料新标准自2021年6月实施以来，新增加了种子发芽指数检测指标，以判定有机肥料发酵的腐熟程度，同时增加了有机肥料生产原料使用类目录及评估类原料安全性评价要求。根据NY/T525-2021有机肥料的规定，由蔗糖产业延伸制备得到的生化黄腐酸属于评估类原料（食品及饮料加工有机废弃物）。广大有机肥料生产企业喜欢在其产品中添加上述生化黄腐酸，以提高其肥效，有关情况由来已久，并得到市场的广泛好评。但因生化黄腐酸具有小分子、全水溶等特征，以其为原料制备成有机肥料，如按1:10固液比的检测标准测量种子发芽指数，则达不到新标准的要求，并且尚未有相关标准可参考，这给肥料产品登记、市场监督检测等带来了极大困扰。NY/T525-2021有机肥料新标准中，附录F对“种子发芽指数(GI)的测定”进行了详细方法介绍，同时也指出“注：评估类原料可依据专家评估结果确定固液比”，即评估类原料可以不参照“1:10”的固液比来检测测量种子发芽指数。本标准立足于NY/T525-2021的基本要求，在“评估类原料”的基础上，以生化黄腐酸为主要研究对象，开展种子发芽指数固液比的相关验证试验，并以此为依据制定本标准，为肥料产品登记、市场监督检测提供参考依据，对促进广西有机肥料健康发展及蔗糖产业废弃物高效利用具有重要的现实意义。三、项目编制起草过程（一）成立标准编制工作组团体标准《含生化黄腐酸的有机肥料种子发芽指数检测方法》项目任务下达后，广西壮族自治区分析测试研究中心成立了标准编制工作组，制定了起草编写方案，明确任务职责，确定工作技术路线，开展标准研制工作。具体标准编制工作由广西壮族自治区分析测试研究中心、广西西大检测有限公司等单位相关人员配合开展相关种子发芽指数研究及生化黄腐酸检测标准的修订；由广西勤德科技股份有限公司、安琪酵母股份有限公司、广西丹宝利酵母有限公司等多家企业单位负责进行了试验样品配置和生产工作。（二）收集整理文献资料NY/T525-2021有机肥料NY/T3162-2017肥料中黄腐酸的测定容量滴定法GB/T34765-2017矿物源黄腐酸含量的测定HG/T5334-2018黄腐酸钾GB/T8576复合肥料中游离水含量的测定真空烘箱法GB/T42513.1-2023镍合金化学分析方法第1部分:铬含量的测定硫酸亚铁铵电位滴定法（三）研讨确定标准主体内容标准编制工作组在对收集的资料进行整理研究之后，标准编制工作组召开了标准编制会议，对标准的整体框架结构进行了研究，并对标准的关键性内容进行了初步探讨。经过研究，标准的主体内容确定为范围、规范性引用文件、术语和定义、仪器、试剂、试验步骤和允许差。（四）调研及形成草案、征求意见稿2023年5月，标准起草工作小组进行了广泛实地调研工作，查阅了大量的国内外文献资料，经编制组反复讨论，形成了标准研制的方案和基本构架，对主要内容进行了讨论并对项目的工作进行了部署和安排。2023年5-8月，标准起草工作小组研制了一批试验样品。其中由并开展有机肥料中黄腐酸的测定方法研究；2023年7月-2024年5月，进行了试验样品的田间试验安全性测试。2024年5-6月，进行了本标准试验方法验证。2024年6-7月起草了完成团体标准《含生化黄腐酸的有机肥料种子发芽指数检测方法》（征求意见稿）。四、标准制定原则1、实用性原则本文件是在充分收集相关资料和文献，并在开展大量试验研究基础上制定的团体标准，符合当前广西有机肥料健康发展及蔗糖产业废弃物高效利用的发展方向与需求，为肥料产品登记、市场监督检测提供参考依据，具有较强的实用性和可操作性。2、协调性原则本文件编写过程中注意了与NY/T525-2021有机肥料种子发芽指数检测方法的协调问题，在内容上与现行法律法规、标准协调一致。3、规范性原则本文件严格按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的要求和规定编写本标准的内容，保证标准的编写质量。4、前瞻性原则本文件在兼顾当前NY/T525-2021有机肥料种子发芽指数检测方法的同时，还考虑到了生化黄腐酸属于评估类原料（食品及饮料加工有机废弃物）的有小分子、全水溶等特征。本文件在兼顾当前NY∕T3162-2017肥料中黄腐酸的测定方法，还考虑到了有机肥料中肥料自身颜色对检测方法的干扰问题，借鉴参考“GBT

42513.1-2023”标准中的电位滴定法，能更精准测定本有机肥料中生化黄腐酸的含量，在标准中体现了个别特色性、前瞻性和先进性条款。五、标准主要内容及依据来源（一）标准主要内容本标准主要章节内容包括：含生化黄腐酸的有机肥料种子发芽指数检测方法的范围、规范性引用文件、术语和定义、仪器、试剂、试验步骤、分析结果的表述、允许差、附录A。（二）主要技术指标、参数、试验验证的论述本标准主要以NY/T525-2021《有机肥料》所对应“附录F种子发芽指数（GI）的测定”以及NY∕T3162-2017《肥料中黄腐酸的测定容量滴定法》标准的检测方法为基础，结合本标准所对标的物料特性（生化黄腐酸、有机肥料）进行研究，在原有检测方法的基础上进行调整，具体调整的主要技术指标、参数、试验验证详见如下：1、种子发芽指数检测的种子数量的调整NY/T525-2021《有机肥料》“附录F种子发芽指数（GI）的测定”，所用种子数量为10粒。经多次测试，受种子质量影响较大，重复误差较大，为此以腐熟牛粪为原料，进行了10粒、20粒、30粒、40粒、50粒种子的对比的测试研究(注：每个培养皿仍为10粒种子，通过增加培养皿数量而增加试验种子的总粒数)，试验情况详见下表1：表1不同种子数量的种子发芽指数检测表重复1重复2重复3重复4重复5绝对差值10粒82.32%94.96%70.37%72.48%89.95%8.47%20粒83.45%86.18%74.23%78.78%89.45%4.73%30粒87.42%79.11%78.16%85.79%87.48%3.97%40粒85.14%80.23%83.16%84.21%78.76%2.24%50粒78.32%86.27%84.34%82.45%84.23%2.19%备注：根据NY/T525-2021《有机肥料》，按1:10检测供试验牛粪种子发芽指数为82.7%。根据NY/T525-2021《有机肥料》“附录F种子发芽指数（GI）的测定”的允许差“绝对差值”不能超过5%。而10粒种子的绝对差值达到8.47%，20粒、30粒、40粒、50粒种子都符合要求。考虑到试验统计的工作量，种子发芽指数检测的种子数量建议由10粒调整为20粒。有机肥料中生化黄腐酸含量的测定方法研究目前，国内涉及到黄腐酸检测的方法主要有NY/T3162-2017《肥料中黄腐酸的测定容量滴定法》、GB/T34765-2017《矿物源黄腐酸含量的测定》、HG/T5334-2018《黄腐酸钾》。其试验原理基本相同，都是提出到黄腐酸后，采用重铬酸钾将黄腐酸的碳氧化成二氧化碳，用硫酸亚铁标准滴定液反滴定，根据重铬酸钾消耗量和黄腐酸的碳系数计算有机肥料中生化黄腐酸钾的含量。主要区别在于前端处理方法，本标准主要针对有机肥料，即生物源类物质，因此主要参考NY/T3162-2017《肥料中黄腐酸的测定容量滴定法》的方法。但NY/T3162-2017《肥料中黄腐酸的测定容量滴定法》的方法在检测中，在提取生化黄腐酸溶液过程中，溶液通常带有染色（有机肥料其他颜色），如采用原方法中“邻菲罗啉”为指示剂通过颜色判定滴定终点则干扰较大。因此经过研究调整，改为采用电位滴定仪来判断滴定终点，通过滴定过程中电位差的变化来判断终点更准确，不受浸提溶液颜色干扰。另“生化黄腐酸的碳系数”没有参考NY/T3162-2017《肥料中黄腐酸的测定容量滴定法》的标准。而是参考HG/T5334-2018《黄腐酸钾》标准中的生物源黄腐酸的碳系数0.45。经过实际测试，更准确。有机肥料的水分含量检测方法的调整经过市场调研，几乎所有机肥料生产都是在有机肥料发酵配料时，添加酵母或酒精浓缩废液，比例约2%-20%左右（折算干基约1%-10%，添加的黄腐酸含量约0.3%-3.4%），20%（折算干基约10%）以上酵母或酒精浓缩废液则因为其本身物料属性，则无法添加到有机肥料中（添加后物料粘稠，很难发酵，干燥成本高），即市场上几乎没有添加酵母或酒精浓缩废液超过20%的有机肥料产品。但市场上常见将酵母或酒精浓缩废液作为母液，通过喷雾干燥的方法，获得粉状全水溶的有机肥料，因其还有较高的钾含量，市场称之为“生化黄腐酸钾”。生化黄腐酸钾经本标准检测，其黄腐酸含量约34%左右。有机肥料中生化黄腐酸的含量X≤6.2%的，其水分含量检测参照GB/T8576的规定执行（真空烘箱法）；有机肥料中生化黄腐酸的含量X≥34%的，因其已干燥，自身具有较强吸水性，如还用真空烘箱法测量水分，则会出现倒吸潮的情况，出现烘干后的重量比烘干前还重（生化黄腐酸钾采用真空烘箱法测量水分，实测值为-18.22%）。经过试验研究，有机肥料中生化黄腐酸的含量X≥34%的，则采用GB/T6283的规定执行（卡尔费休法）。不同原料的发酵腐熟有机肥料生化黄腐酸的含量检测选择纯牛粪、纯猪粪、纯鸡粪、纯蘑菇渣、纯剑麻渣、纯薯粮渣、纯蔗髓蔗皮共7种原料，在不添加酵母或酒精浓缩废液的情况下，独立进行有机肥堆肥发酵，有氧发酵时间3-5个月，每间隔10天检测种子发芽指数，当种子发芽指数超过70%以后；记录达到种子发芽指数所需时间，再进行生化黄腐酸的检测，以探讨在未添加酵母或酒精浓缩废液的前提下，常规有机肥料的生化黄腐酸的含量，具体检测情况如表2；表2不同原料的发酵腐熟有机肥料生化黄腐酸的含量检测及发酵所需时间序号物料成分所需时间（天）实测生化黄腐酸含量（以干基计,%）1纯牛粪702.952纯猪粪902.643纯鸡粪1203.084纯蘑菇渣702.175纯剑麻渣802.066纯薯粮渣702.457纯蔗髓蔗皮601.81由表2得知，腐熟的有机肥料中生化黄腐酸最高值为纯鸡粪，其次为纯牛粪，最低为纯蔗髓蔗皮。粪便类原料的生化黄腐酸平均值都高于植物源类。而粪便类中纯牛粪、纯猪粪、纯鸡粪的数值相近，而牛粪的发酵时间最快（70天）能达到种子发芽指数≥70%，并且生化黄腐酸含量介于三种禽畜粪便之间，仅略低于鸡粪。由于纯腐熟牛粪的生化黄腐酸含量介于三种禽畜粪便之间，具有一定代表性，同时为减少发酵周期及试验工作量，将以纯腐熟牛粪作为有机肥料代表，作为后续试验基础原料开展试验。4.1样品配置及黄腐酸含量根据经过市场调研，几乎所有机肥料生产都是在有机肥料发酵配料时，添加酵母或酒精浓缩废液，比例约2%-20%左右（折算干基约1%-10%，添加的黄腐酸含量约0.3%-3.4%。为排出生产环节的干扰，标准起草工作小组经研究决定，采用腐熟牛粪为基础料，添加不同比例生化黄腐酸钾粉末（1-10%）来制备检测样品，具体配比及黄腐酸含量检测值如下表3：表3不同样品配比及黄腐酸含量检测值样品序号牛粪添加量（%）生化黄腐酸钾添加量（%）实测黄腐酸含量（以干基计,%）备注1100%02.95纯牛粪297.5%2.5%3.74395%5%4.52492.5%7.5%5.36590%10%6.1560%100%34.19纯生化黄腐酸钾粉末4.2不同样品的种子发芽指数固液比研究以腐熟牛粪平均的种子发芽指数为基准参考值（平均值约82.7%，按1：10固液比检测），根据试验经验和理论测算，计算出每个样品的种子发芽指数约为80%的固液比最佳值。以最佳值为中心，上下各再增加2个试验处理，即每个样品种子发芽指数设定为5个处理固液比，寻找种子发芽指数接近80%的固液比。试验设计及种子发芽指数测试结果如下表4：表4不同样品的种子发芽指数固液比试验数据样品序号处理①处理②处理③处理④处理⑤样品序号固液比种子发芽指数固液比种子发芽指数固液比种子发芽指数固液比种子发芽指数固液比种子发芽指数11:1082.7%1:2097.4%1:30105.8%1:40106.7%1:50121.0%21:1058.4%1:2079.4%1:3095.1%1:40102.9%1:50111.0%31:2043.5%1:3083.2%1:40100.3%1:5098.9%1:60108.8%41:3046.6%1:4064.8%1:5081.2%1:6091.1%1:7096.3%51:4025.7%1:5048.5%1:6065.4%1:7080.6%1:8094.5%61:2505.6%1:30042.1%1:35070.2%1:40083.0%1:45097.5%从上表数据分析，以种子发芽指数80%为基准值，样品1在固液比1:10达到82.7%；样品2在固液比1:20达到79.4%；样品3在固液比1:30达到83.2%；样品4在固液比1:50达到81.2%；样品5在固液比1:70达到80.6%；样品6在固液比1:400达到83.0%。因此，建议按下表5设置不同含量生化黄腐酸的有机肥料所对应的提取固液比来开展种子发芽指数测试。表5有机肥料中不同含量的生化黄腐酸所对应的提取固液比样品序号实测黄腐酸含量（以干基计,%）固液比对应实测的发芽指数（%）对应黄腐酸含量设置含量（以干基计,%）12.951:1082.7X≤3.0%23.741:2079.43.0%＜X≤3.8%34.521:3083.23.8%＜X≤4.6%45.361:5081.24.6%＜X≤5.4%56.151:7080.65.4%＜X≤6.2%634.191:40083.0X≥34%5、不同含量生化黄腐酸的有机肥料田间试验安全性测试情况为验证试验有机肥料样品是否存在烧苗等不良反应，将上述各处理样品开展辣椒的田间试验，以测试其安全性。样品1～样品5按每亩使用400kg，做基肥埋施；样品6为全水溶产品，则采用滴灌的方式，按1:200倍兑水，每次用量4kg/亩，每隔10～15天使用1次，共使用5次，合计20kg/亩。其他化肥按常规方法使用，并以单施化肥处理作为CK对照，试验情况如下6表：表6不同样品的田间试验情况表样品序号使用方法使用量是否出现烧苗等不良情况跟对照比增产率1基肥埋施+