1-2-1-微生物的基本培养技术-课件

微生物的培养技术及应用什么是培养基？如何配制？什么是无菌技术？怎样进行酵母菌的纯培养？录目Contents1234培养基的配置Mediumconfiguration无菌技术Aseptictechnique微生物的纯培养Pureculture习题巩固Exercisestoconsolidate问题探讨Problemsdiscussed

向经过杀菌处理的牛奶中添加某些对人体有益的细菌，再经过发酵就可以制成酸奶，由于制作工艺并不复杂，一些人会在家里自制酸奶，自制酸奶虽然方便，但是食用自制酸奶导致肠胃不适的事件屡见不鲜，主要原因是在制作过程中有杂菌混入。那么，怎样才能保证无处不在的杂菌不混入发酵物中呢？

应该先对制作用具和原料进行灭菌处理，再接种纯的菌种，并控制发酵条件，避免杂菌进入。这需要应用无菌技术和微生物的培养技术微生物的类群Thetaxaofmicroorganisms微生物个体无法用肉眼观察的微小生物。无细胞结构原核细胞真核细胞真菌：酵母菌、毛霉等；原生生物：草履虫、变形虫等微生物的类群病毒：SARS病毒、新冠病毒等RAN病毒；噬菌体等DNA病毒细菌:蓝细菌、大肠杆菌、乳酸菌等；放线菌:链霉菌等培养微生物的条件Conditionsforcultureofmicroorganisms①要为人们需要的微生物提供合适的___________条件。②要确保

，并将需要的微生物分离出来。营养和环境其他微生物无法混入微生物结构简单、形体微小，眼睛看不到，若想得到纯净的微生物，就必须对其进行培养和分离。实验室培养微生物的条件——培养基——无菌技术Part1培养基的配置Mediumconfiguration培养基的配置Mediumconfiguration培养基1.概念：3.类型：2.作用：人们按照微生物对

的不同需求，配制出供其_________的营养基质。营养物质生长繁殖用以培养、分离、鉴定、保存微生物或

。（①提供微生物繁殖所需各种营养，②异养微生物的能源）积累其代谢物固体培养基液体培养基有无琼脂分离、计数、鉴定等扩大培养、工业生产培养基的配置Mediumconfiguration注意说明①加入培养基中的凝固剂（如琼脂），一般不能被微生物

利用，只起到凝固作用。②微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。③扩大培养获得大量菌种时，常用液体培养基。一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体培养基的配置Mediumconfiguration4.营养构成：（1）基本成分：碳源、氮源、水、无机盐①碳源：无机碳源：CO2、CO32-、HCO3-有机碳源：葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等自养微生物异养微生物②氮源：无机氮源：NH4＋、NO3-、NH3等有机氮源：牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等含C、H、O、N的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源③无机盐：Ca、K、Mg为大量元素Zn、Cu、Mn、Co、Mo等微量元素牛肉膏、蛋白胨来源于动物，含有糖、维生素和有机氮等营养物质各种有机物蛋白质、核酸培养基的配置Mediumconfiguration（2）特殊需求：满足微生物对

、

、

的需求。特殊营养物质pHO2④培养厌氧微生物时，需要提供

的条件。①培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加

；②培养霉菌时，需要将培养基调至

；③培养细菌时，需要将培养基调至

；维生素酸性中性或弱碱性无氧表1-11000ml牛肉膏蛋白胨培养基的营养组成组分含量提供的主要营养牛肉膏5g碳源、磷酸盐和维生素等蛋白胨10g氮源和维生素等NaCl5g无机盐H2O定容至1000ml水维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等

主要提供碳源的是牛肉膏，主要提供氮源的是蛋白胨。划分标准培养基种类特点用途物理性质化学成分用途不加凝固剂加凝固剂，如琼脂工业生产观察微生物的运动、分类鉴定微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种含化学成分不明确的天然物质工业生产培养基成分明确分类、鉴定在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长培养、分离出特定微生物在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物鉴别不同种类微生物选择培养基液体培养基半固体培养基固体培养基天然培养基合成培养基鉴别培养基培养基的类型及用途培养基中加氨苄青霉素具有抗氨苄青霉素能力的菌落没有氨苄青霉素抗性的细菌选择培养基培养基+氨苄青霉素培养基没有抗氨苄青霉素能力的菌落被淘汰怎样选择出抗氨苄青霉素能力的细菌?培养基的类型及用途具体处理原理目的选择培养基加入青霉素青霉素能抑制细菌生长，对真菌无作用不加氮源固氮微生物能利用空气中的氮气不加有机碳源自养型微生物能利用无机碳源鉴别培养基加入酚红培养基尿素被分解产生氨，培养基呈碱性，酚红指示剂变红。加入刚果红

刚果红与纤维素能形成红色复合物，当纤维素被分解后，复合物就无法形成，培养基中会出现以菌落为中心的透明圈。分离酵母菌、霉菌等真菌分离固氮菌分离自养微生物鉴别分解尿素的细菌鉴别纤维素分解菌Part2无菌技术Aseptictechnique无菌技术Aseptictechnique1.获得纯净的微生物培养物的关键是

。防止杂菌污染①消毒：是指使用较为

的物理、化学或生物等方法

杀死物体表面或内部一部分微生物。②灭菌：是指使用强烈的理化方法杀死

的微生物，

包括芽孢和孢子。2.防止杂菌污染的方法：温和物体内外所有目的：①防止培养物被污染；②防止感染实验操作者。避免已经灭菌的材料用具与周围物品接触；为了避免周围环境微生物污染，操作应在超净工作台并在酒精灯火焰旁进行。无菌技术Aseptictechnique消毒使用较为温和的物理、化学或生物等方法，杀死物体表面或内部一部分微生物。（1）概念：（2）消毒的方法：①煮沸消毒法：②巴氏消毒法：③化学药剂消毒法：④紫外线消毒法：用紫外灯照射接种室、接种箱、超净工作台。100℃煮沸5-6min。62-65℃下煮30min或80-90℃下煮30s-1min。

用70%酒精擦拭双手；氯气消毒水源。无菌技术Aseptictechnique灭菌湿热灭菌法、干热灭菌法、灼烧灭菌法1.湿热灭菌法高压蒸汽灭菌锅内100kPa、121℃下维持15-30min1.原理：高温蒸汽破坏蛋白质、核酸等结构使其变性。2.优点：操作简便，效果可靠，可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体。基本保持培养基的营养成分不被破坏。3.对象：培养基等。无菌技术Aseptictechnique灭菌②干热灭菌法干热灭菌箱内160~170℃下加热2~3h。1.原理：使微生物细胞膜破坏、蛋白质变性和原生质干燥等2.对象：耐高温，需保持干燥的物品，适用于玻璃器皿

(如试管、培养皿、吸管、注射器)金属器具(如针头、镊子、剪刀等)的灭菌无菌技术Aseptictechnique灭菌③灼烧灭菌法常用于涂布器、接种环、接种针、试管口或其它金属用具等的灭菌。直接在酒精灯火焰的充分燃烧层（外焰）灼烧。1.效果：最彻底2.原理：使微生物燃烧3.对象：接种工具如接种环、接种针，以及接种过程中的试管口或瓶口等易被污染部位类型适用范围操作方法消毒灭菌较为温和理化方法，杀死部分微生（不包括芽孢、孢子）强烈的理化方法，杀死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法日常生活100℃煮沸5～6min巴氏消毒法不耐高温的液体62～65℃煮30min或80-90℃煮30s-1min化学药剂生物活体、水源等擦拭等,如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源紫外线紫外线照射30min灼烧灭菌接种的金属工具、接种时用的试管口或瓶口等直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧干热灭菌耐高温、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿和金属用具等物品放入干热灭菌箱,160～170℃加热2～3h湿热灭菌培养基、培养皿等,生产和实验室常用高压蒸汽灭菌锅内,100kPa,温度121℃,15～30min接种室、接种箱，超净工作台Part3微生物的纯培养Pureculture微生物的纯培养Pureculture1.培养物：在微生物学中，将接种于

内，在合适条件下形成的含

的群体。培养基特定种类微生物3.纯培养：获得纯培养物的过程就是纯培养。2.纯培养物：由

所获得的微生物群体。单一个体繁殖步骤：1）配制培养基2）灭菌3）接种4）分离5）培养酵母菌的纯培养Purecultureofyeast菌落1.概念：2.特征：

分散的微生物(单一个体)在适宜的

表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的

。

固体培养基子细胞群体形状、大小、光泽度、颜色、透明度等。——是鉴定菌种的重要依据3.获得单菌落的方法：①平板划线法②稀释涂布平板法酵母菌的纯培养Purecultureofyeast方法步骤接种和分离培养酵母菌制备培养基1.制备培养基配制培养基灭菌倒平板1）配制培养基称取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1000ml，加热煮沸至马铃薯软烂，用纱布过滤。向滤液中加入20g葡萄糖、15-20g琼脂，用蒸馏水定容至1000ml。酵母菌的纯培养Purecultureofyeast方法步骤2）灭菌将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞，包上牛皮纸，并用皮筋勒紧，再放入高压蒸汽灭菌锅中，在压力为100kPa、温度为121℃的条件下，灭菌15-30min。将5-8套培养皿包成一包，用几层牛皮纸包紧，放入干热灭菌箱内，在160-170℃灭菌2h。包器材酵母菌的纯培养Purecultureofyeast方法步骤3）倒平板待培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。倒平板注意事项：①温度：50℃左右②操作：在酒精灯火焰附近③冷凝后平板倒置酵母菌的纯培养Purecultureofyeast平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。酵母菌的纯培养Purecultureofyeast方法步骤2.接种和分离酵母菌通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。经数次划线后培养，可以分离得到单菌落。平板划线法平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体。单个细胞微生物群单个菌落连续划线分散或稀释生长繁殖①灼烧接种环，直至接种环金属丝烧红②在火焰旁冷却接种环，拔出酵母菌培养液试管的棉塞④在火焰附近用接种环蘸取一环菌液⑥将皿盖打开一条缝隙，将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划3-5条平行线，盖上皿盖。⑤试管口通过火焰，并塞上棉塞③试管口通过火焰⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次划线。平板划线法Platemarking连续划线法分区划线法划3个平板（重复实验）1个不划线（空白对照）1）一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；2）存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。“平板划线”实验操作平板划线法Platemarking分区划线法12345①接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次②划线首尾不能相接③每次划线前接种环进行灭菌④划线后,培养皿倒置培养平板划线法注意事项:平板划线法Platemarking1.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？以免接种环温度太高，杀死菌种。2.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。平板划线法Platemarking3.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗？为什么？灼烧时期目的取菌种前每次划线前接种结束后杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者杀死上次划线时残留菌种，使下一次划线的菌种直接来源上次划线的末端，从而使每次划线时菌种数目逐渐减少，直至得到单个细胞杀死接种环上原有微生物酵母菌的纯培养Purecultureofyeast方法步骤3.培养酵母菌

完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28℃左右的恒温培养箱中培养24-28h。既可以防止培养基表面的水分挥发；又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染作对照，该培养皿无菌落说明培养基没有污染酵母菌的纯培养Purecultureofyeast方法步骤4.结果分析与评价1.在未接种的培养基表面是否有菌落生长？

如果有，说明了什么？

在未接种的培养基表面应该没有菌落生长，如果有，说明培养基被杂菌污染或灭菌不彻底。2.你是如何记录实验结果的？

可以在培养12h和24h后，观察菌落的大小、形状、颜色。培养24h后，菌落的大小、形状是否发生变化，菌落颜色是否加深，光泽度是否增加，等等酵母菌的纯培养Purecultureofyeast方法步骤4.结果分析与评价3.在接种酵母菌的培养基上，你是否观察到了单菌落？这些菌落的颜色、形状和大小是否一致？如果你观察到了不同形态的菌落，你能分析出可能是由哪些原因引起的吗？

在接种酵母菌的培养基上可观察到单菌落。如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合酵母菌菌落的特点，则说明纯化酵母菌的操作成功；如果观察到了不同形态的菌落，可能是接种的菌种不纯或者无菌操作不规范等原因引起的。酵母菌的纯培养Purecultureofyeast评估论点的可信程度

所谓“酵素”，就是“酶”的另一种说法。“酵素”制作就是利用微生物进行无氧呼吸的原理，进行像制作泡菜一样的发酵。这样制作的“酵素”中可能有糖类(包括-些简单的糖和膳食纤维等)、蛋白质(包括多种酶)、有机酸等成分，不存在它独有的、特殊的营养物质，其中甚至可能含有微生物发酵产生的有毒物质，食用后可能会危害人体健康。因此，“吃水果酵素可以美容、减肥、促进消化和提高免疫力”的论点值得怀疑。稀释涂布平板法平板划线法Part4习题巩固Exercisestoconsolidate习题巩固Exercisestoconsolidate1.微生物的纯培养既需要适宜的培养基，又要防止杂菌污染。判断下列相关表述是否正确。（1）培养基中的营养物质浓度越高，对微生物的生长越有利。

（）（2）消毒和灭菌的杀菌程度存在差异。（）（3）微生物的纯培养物就是不含有代谢废物的微生物培养物。

（）×√×习题巩固Exercisestoconsolidate2.日常生活中保存食品的方法有哪些？这些方法是如何阻止或抑制微生物生长的？日常生活中保存食品的方法有干制、腌