细胞染色专题

关键词：DAPI，胞浆，胞核，示踪，细胞器飞跃的载体干货|一眼就让人爱了爱了的各色荧光染料合集在实验中，为了能够清楚地观察到目标组织或细胞，通常会采用染色的方式进行直观验证。面对形态各异的组织和细胞，研究学者们想到了多种多样的染色方法以佐证自己的实验结果。但是实际操作中也会遇到各种各样的的困难：选购的染料类不符合染色的细胞区域和应用类型；历经数月/年保存下来的样本形式不符合预期染色实验的要求；实验仪器不符合荧光染料的拍摄要求，导致样本和染料的浪费；染料的配色不准确，导致不能实现细胞的多方位染色。通常，细胞染色类型主要分为如下五大类，对应的染料类型如下：染色类型染料类型细胞核染色核染料胞浆染色胞浆染料胞膜染色膜染料细胞示踪染色细胞示踪染料区室和细胞器染色细胞器染料分类品名货号描述核酸染料Ethidium

Homodimer-1

(EthD-1)

BMD0060溴乙啡锭二聚体是一种红色的高亲和性荧光核酸染料,检测溶液中或者解体细胞中的核酸（DNA/RNA），不能穿过活细胞膜。Hoechst

33258BMD0061细胞核染色（DNA）

一般是细胞固定后再染色。Hoechst

33342

BMD0062细胞核染色（DNA）毒性更小，可活细胞直接染色。DAPI

BMD00634',6-二脒基-2-苯基吲哚是细胞核染色（DNA）。细胞质染料Calcein

AM

BMD0064活细胞染色5(6)-CFDA/5(6)-CFDA,

SE

BMD0066可对活细胞进行荧光标记的细胞示踪染料，不仅可用于细胞增殖的体外实验，还可用于追踪细胞在体内的分裂增殖过程(酯酶活性)。细胞膜染料DiI

(DiIC18(3))

BMD0071橙色，亲脂性膜染料DiO(DiOC18(3))

BMD0072绿色，亲脂性膜染料DiD

(DiIC18(5))

BMD0073红色，亲脂性膜染料DiR

(DiIC18(7))

BMD0074深红色，亲脂性、近红外膜染料，配合其他多色使用示踪染料LiveCellTrackingKitKTA1002对活细胞示踪，记录细胞的生长、分裂和移动等活动区室细胞器染料TraKine™线粒体染色试剂盒KTC4003，KTC4004线粒体染色

TraKine™F-actin染色试剂盒及其染料KTC4008/9，BMD0082/83/84细胞骨架染色TraKine™

Pro

活细胞微管染色试剂盒(红色、绿色)KTC4100，KTC4110活细胞微管探针TraKine™

Pro

活细胞溶酶体染色试剂盒(红色、绿色)KTC4200，KTC4210活细胞溶酶体探针而样本制备对于细胞染色效果也是至关重要，如下为四种样本类型的主要处理方法：对于贴壁细胞，有2种方法：

先将洁净的盖玻片在70%乙醇中进行浸泡处理，然后用干净无菌的镊子放置到培养皿中，用无菌PBS洗去残留的乙醇。待细胞接近长成单层后取出盖玻片，操作小心，防止细胞脱片（可用多聚赖氨酸浸泡盖玻片）。将细胞在培养皿或者孔板内铺板，控制细胞生长密度后进行染色。对于悬浮细胞，有2种方法：先在悬浮液中进行固定步骤，然后把细胞滴加在载玻片上，干燥后细胞会紧贴在载玻片上。先在悬浮液中进行固定和染色步骤，离心洗脱，然后用移液管移至盒式玻片进行后续染色步骤。对于冷冻切片：切片放置在载玻片上后，可以直接进行固定等后续操作。

对于石蜡切片：免疫荧光中石蜡切片较少，要先进行脱蜡和抗原修复处理。不同染料对仪器类型的选择性也是千差万别的，如下为细胞染色实验的常用仪器：为了实现细胞的多方位染色，我们常常需要进行多种染料的配合染色，其中最为经典的是细胞器与细胞核染料的多重染色，如下图所示：Q1:TraKine™Pro活细胞微管染色试剂盒（绿色荧光）与Hoechst33342配合染色：1.Hoechst33342与该染料可以配合使用，且都几乎无毒性，不影响细胞存活；2.这个tubulin-green染料荧光是比较稳定的，荧光激发累计时长可以到达350s以上，拍200帧以上的图片。Hoechst33342的稳定性更高一些。Q2:Trakine™pro染料是否可以和普通的染料一起染？是否会影响探针透膜？如果可以，建议染色顺序怎样，染色步骤是否需要调整？Trakine™pro探针可以和普通探针一起染色，但针对需要用到buffer的探针，要先孵育需要用到buffer的探针，再孵育其它探针。针对不需要buffer的透膜探针，可以和客户想用的其它探针一起孵育。总结：当想要两个或三个探针共标一个细胞的时候，所有用到buffer的探针可以一起先孵育（可共用buffer），自身透膜的探针后孵育。细胞染色技术还有很大的发展空间，将来会应用到更多的实验领域，在生物行业发展中具有举足轻重的地位，正持续获得越来越多生物学家的关注。abbkine的技术专家为了给广大读者提供学习生物知识的平台，经过不懈努力，将多种高端生物实验的干货整理出来，后期陆续在微信公众号中刊登，请广大热爱科学的读者持续关注Abbkine公众号。Abbkine专注于蛋白学和细胞学领域，致力于创新和研发各类抗体、蛋白质、分析试剂与试剂盒，以期成为生命科学研究发展、药物研发等领域的关键推动者。我们为您提供蛋白和免疫研究用户最喜爱的产品，从免疫学基础产品，如蛋白提取定量，到免疫学实验的内参标签抗体、一抗及二抗等；细胞研究用户最喜爱的产品，从用于检测细胞状态的染料及试剂盒，细胞器提取试剂盒，细胞亚结构染色示踪及细胞代谢检测产品，到用于细胞培养的细胞因子及蛋白类检测试剂盒，只为助力您的研究事业！产品推荐BMD0060，BMD0061，BMD0062，BMD0063，BMD0064，B