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DB33PurityidentificationofMuskmelonvarietyusingmolecularmarkeranalysis浙江省质量技术监督局发布I本标准起草单位：宁波市农业科学研究院、宁波市种1厚皮甜瓜种子纯度分子标记鉴定方法农业部1485号公告-4-2010转基因植物及其产品成分检测品种在特征特性方面典型一致的程度，用本品种的种子数占供检本作物样品种子数的百分率表示仅能检测显性等位基因，不能够区分纯合和杂合基因型的遗传标记位点。2以基因组DNA为模板，以单个人工合成的随机多态核目不同，PCR扩增后获得的产物长度不同，通过高分辨率琼脂糖凝胶电泳分离、溴化乙锭染色后，在紫或者扩增片段大小不同的差异。这些差异可利用电泳图谱ACCTGGACACACACCGGAACSSR（SimpleSequenceRepeat）引物名称、序列及差异片3ATCCAACTCGACCAAGAAAC5.2琼脂糖称取80.0g氢氧化钠（NaOH），先用160），解后，冷却至室温，用按本标准5.4配置氢氧化钠溶液调pH至8.0，加水定容至100mL。在103.4kPa5.61mol/L三羟甲基氨基甲称取121.1g三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶解于800mLpH至8.0，加水定容至1000mL。在103.4kPa（121℃)条件下灭菌20min。分别量取10mL按本标准5.6配置的三羟甲基氨基甲烷-盐酸溶液和乙酸二钠溶液，加水定容至1000mL。在103.4配置的乙二胺四乙酸二钠溶液，加水定容至1000mL。使用时用水稀释成05.9加样缓冲液称取1g水溶性钠型溴酚蓝于100mL水中，涡旋直到完全溶解，配制成0.15%溴酚蓝。称取1g二甲二甲基苯腈蓝，加入100μL按本标准5.5配置的乙4将浓度为2.5mmol/L的dATP、dTTP、d抽样结束后，播种，待第一片真叶长至0.5cm～1cm时，即可单株取真叶样品，体积(μL）//5体积(μL）/5/）；电泳结束后，取出琼脂糖凝胶，置于凝胶成像仪或紫8.1.1标记的差异位点显示共显性，供试材料的带型与杂种一代双亲之一相同，则表明该材料在差异位点杂交不成功，判断为杂株；同

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