T-UNP 179-2024 解酒护肝饮品制备方法

ICS67.160.01CCSX50解酒护肝饮品制备方法Methodforthepreparationofantioxidantandliver-protectingdrinkT/UNP179—2024I前言 2规范性引用文件 3术语和定义 4原辅料 4.1原料 4.2化学试剂 6制备流程 26.1清洗消毒 26.2醇溶蛋白提取 26.3溶液配制 26.4自组装 2T/UNP179—2024本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由北京中科先新中药研究院提出。本文件由中国联合国采购促进会归口。本文件起草单位：北京中科先新中药研究院、安徽中科先新生态科技有限公司、安徽修养正本健康科技有限公司。本文件主要起草人：周海涛、周百永、胡芸芸。T/UNP179—20241解酒护肝饮品制备方法本文件规定了解酒护肝饮品制备的原辅料、设备、制备流程。本文件适用于解酒护肝饮品的制备。2规范性引用文件本文件没有规范性引用文件。3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4原辅料4.1原料制备解酒护肝饮品所需的原料包括：a)高粱白面粉；e)脱胶海带粉；f)碱性蛋白酶。4.2化学试剂制备解酒护肝饮品所需的化学试剂包括：b)偏亚硫酸氢钠；g)磷酸二氢钾；h)磷酸盐缓冲液；i)醇溶蛋白溶液。5设备制备解酒护肝饮品所需的设备包括：a)烧瓶；d)水浴震荡处理器；f)高速剪切分散仪；T/UNP179—20242h)超滤管；i)磁性搅拌器；j)分光光度计。6制备流程6.1清洗消毒制备前，应对使用的器具内外表面进行彻底清洗消毒，保证所有器具无残留料垢、污物等。6.2醇溶蛋白提取6.2.1脱脂和初提取处理在湿度低于30%的环境中，称取高粱白面粉20g，加入至2L75%的乙醇水溶液，充分混合后，向溶液中加入0.5g偏亚硫酸氢钠和0.348g冰乙酸，于70℃水浴震荡处理1h，将处理液于2000rmp离心处理10min，上清溶液浓缩，冷冻干燥后，得到冻干粉12.3g。将12.3g冻干粉充分分散于50mL六已烷中，搅拌充分混合后，挥干溶剂，对冻干粉进行脱脂多次洗涤，即可得到脱脂的粗品。6.2.2酶解将11.6g粗品分散在350ml去离子水中，制得粗品悬浮液，用1M氢氧化钠将其pH调整至8.3，分别加入0.333g碱性蛋白酶，最终酶底物比为0.8Au/g。将烧瓶用橡胶塞密封，并转移到50℃水浴摇瓶。将上述反应体系先于沸水浴中处理20min，再于常温孵育11h冷却后，用1M盐酸或1M氢氧化钠调整溶液至pH7.0，4℃离心25min，收集上清液，冻干处理，-4℃保存至进一步分析，得到酶解上清液。6.2.3超滤处理使用超滤杯进行超滤，分子量截止为10kD。将超滤管的滤膜在去离子水中浸泡24h，期间更换去离子水至少3次，去除预处理后的甘油残基残留物。将滤膜装载后，向超滤管中加入酶解上清液，搅拌单元以60rpm的速度放置在磁性搅拌器上，压缩氮气以最大60psi的压力连接到搅拌单元，进行超滤处理，收集超滤液，冷冻干燥，得到超滤冻干粉。6.2.4凝胶色谱纯化取超滤冻干粉250mg溶解在于15mL去离子水中，并上样至预平衡后的凝胶纯化柱，上样完成后，用去离子水洗脱10倍柱体积的去离子水洗脱，收集洗脱液，用分光光度计的吸光度测定收集的等分的洗脱光谱。将组成主要峰的洗脱液组分组合成几个组分，得到醇溶蛋白的最终冻干粉。6.3溶液配制6.3.1磷酸盐缓冲液取磷酸二氢钾0.68g，加0.1mo1/L氢氧化钠溶液29.1m1，用水稀释至100m1。6.3.2含有护肝成分的溶液准确称取橙皮粉40g、杨梅果粉80g、人参粉15g和脱胶海带粉30g充分混合后，溶解于1L95%的乙醇溶液中，于1500rmp4℃离心，取上清液即为含有护肝成分的溶液。6.3.3醇溶蛋白溶液称取2.5g冻干粉，充分溶解于50mL70%的乙醇溶液中。6.4自组装T/UNP179—20243取50mL磷酸盐缓冲液，利用高速剪切分散仪在15000rpm的转速下进行剪切