DB51T 3065-2023 克氏原螯虾斑综合征诊断和防控技术规程

CCSB52DB512023-06-19发布I 4 4 4 5本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。1克氏原螯虾白斑综合征诊断和防控技术规程本文件规定了由白斑综合征病毒(whitespotsyndromevirus，WSSV)引起的克氏原螯虾本文件适用于克氏原螯虾白斑综合征的诊断以及四川行政区域内稻田和池塘养殖克氏原螯虾白斑GB/T6682分析实验室用水规格GB/T28630.2-2012白斑综合NY/T5361无公害农产品淡水养殖产地环境条件克氏原螯虾白斑综合征whitespotsyndromeofProtocrayfishclarkii4.1试剂和材料4.1.1试剂检验中所需试剂的配制按照GB/T28630.2-2012和SC/T7014.1.2水2用来从第一步PCR扩增的1447bp产物中再扩增出941bp的产扩增十足类动物DNA中848bp的片段产物，-4.2设备与器械设备和器械应当符合GB/T28630.2患病克氏原螯虾主要临床症状为体色变暗、摄食4.3.2剖检4.4实验室样品采集4.5.1样品准备制的75%酒精中5min，无菌水充分清洗两次后，方4.5.3微量分光光度计测定核酸浓度和纯度4.5.3.1在上样孔处点入1.5μL无菌水，点样时不要有气泡残留，对仪器进行校准。使用内参引物F3和R3，按照GB/T28630.2-2012中6.4的规定进行样品提取质量及反应34.8.1琼脂糖凝胶制作4.8.3PCR扩增产物纯化、测序及序列比对4.8.3.2按每0.1g琼脂糖凝胶加0.1mL酚，将酚加入4.8.3.1含有目的条带胶块的离心管中，漩涡震荡4.8.3.337℃水浴将冻结的凝胶融化后，在漩涡震荡仪上震荡1min～2min；14000r/min离心5min，取上层水相转入另一个离心管中，加入等体积的酚-三氯甲烷-异戊醇(25:24:1)，混匀，12000r/min4.8.3.614000r/min离心10m4.9.1提取质量及体系监控DNA提取质量和体系监控中，所有样品在848bp处应有一条特定4.9.2各对照组空白对照无任何条带；第二步PCR，经琼脂糖凝胶电泳后，阳性对照在941bp处有条带，阴性4.9.3被检测样品后在1447bp处无条带且第二步PCR后在941bp处电泳条带的亮暗表示PCR产物数量的多少，但并不对4.10综合判定4——临床症状与4.3相符；——套氏PCR扩增结果与4.9相符；5.1养殖环境前，应用1%～3%氯化钠对苗种进行浸泡，浸泡时间为7min～10mi稻田每亩放养规格为150尾/kg～200尾/kg的苗种30kg～40kg，池塘约5.4免疫增强剂防控每年4月至7月，在饲料中添加β-葡聚糖、壳聚糖、多种维生素等免疫增强剂，每间隔15天连续投5.5微生态防控在疾病流行季节或发病时，用聚维酮碘对养殖水体泼洒消毒，隔天1次，连续泼在疾病流行季节或发病时，按饲料质量1.5%等比添加板蓝根、大蒜素，连续投喂75(资料性)白斑综合征病毒基因参考序列1ACTACTAACTTCAGCCTATCTAGTAAAAC61CTTCCCTGCCGCCCTCACCTGCGCTTCTCACCTCATGCTTTCTTCCATGGATTCCCATAC121AAAGTCATCTTTCATGGACAACATCAAA181GAACATTGAACGATTTGAGAAATTCTTGGGAAGATATGGGGACGAATACGCCATGTC241CAAGCAAAATTGTAACTGccCcTTCCATCTCCACCACACTTTTACTC301GCATCTGGTATCCTCTTTCGCATTCGCCCGCCCAGAAGTCTC361CACACCCTATCAGGCCAACAAGCTTATTAGTGACAAACATTACGTGATGAACATGTCCAA421GATCGATTCTAGAGTAACAGGATCTTCCCTCCTTAAGAAGGTTAGCGAATGGACTGAAAT481GAGAATGAACTCCAACTTTAATGGAACATTTGAACCATCAAGACTCGCCC541TGGCATGACAACGGCAGGAGTCAACCTCGACGTTATTGTCAAACCAAATAATGCAAGAAG601TGTACTAGGAATATTGGAATGTCATCGCCAGCACGTGTGCACCGCCGACGC661TGTCGCTTCAGCCATGCCAGCCGTCTTCCAGGCAACCGATGGAAACGGTAACGAATCTGA721ACTGATCCAGAATGCTCTGCCAAGGAACAGATACATCCAAAAGAG781AACTGTCGTGTTTGCTAATGTTTTGGAACAACTTATCGCCGATCT841GAACGAACTGGCCGGCACCATCGCTGAATCTGTACCAGAAAGCGTATATGAA901GGAAATGATTGATAGACTAGGCTCTGACGACCTCTTCAAATCTAATAATAATGGAGGAGT961AGAATCAATGGATTATGAAGATAGCGAAACAACATCCAACAATG1021AGAAGCCATGAAGAATGCCGTCTATCACACACTAATTTCCGGCAAGGCAGCTCGCC1081AAATGTACCATTCGCCTCATGCGCCAGCGGCCCTCTCGCCTTTGATTTCCTTCTGTCAAA1141GGGAGATACATTCGAAGAAAAGAACGCGAACAAGGTGC1201CTATTCTTCCTCTTCTAACACTACTCTTCGTAAGCATTTGGCTCGAGTTTTCGAAGC1261CTCTAAGCAA