DB51T 3014-2023 家畜螨病诊断与防控技术规范　

DB51I 3 3 3 3 8 9 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的3家畜螨病诊断与防控技术规范GB/T36195-2018畜禽粪便无害化处理NY/T5030-2016无公害农产品兽药使用准则由绵羊痒螨（Psoroptesovis）寄生于家4.1疥螨病、痒螨病和足螨病的临床症状4.1.1疥螨病44.1.2痒螨病4.1.3足螨病4.2疥螨病、痒螨病和足螨病的显微镜镜检4.2.1病料的采集疥螨病病料的采集痒螨病病料的采集足螨病病料的采集4.2.2显微镜镜检热源法将4.2.1采集的病料放入平皿内，将平皿放入25℃~37℃的恒温箱中0.5h～1h后，将平皿置于显直接涂片法浓集法当螨虫数量较少或病料采自死亡家畜时，可采用浓集法收集螨虫镜检。将4.2.4.2.3镜检结果判定病料中镜检到疥螨虫体或虫卵（见附录D.1），判定病料中镜检到绵羊痒螨虫体或虫卵（见附录D.2），判定病料中镜检到足螨虫体或虫卵（见附录D.3），判定为显微镜5试剂2M硫酸（2MH2SO4）、LB液体培养基辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗：HRP-羊抗牛IgG，用于检测牛血清；HRP-兔抗羊测羊血清；HRP-羊抗猪IgG，用于检测猪血清；HRP-羊抗兔Ig阳性血清和阴性血清对照样品重组抗原制备4.3.2操作步骤抗原包被用碳酸盐缓冲液将抗原稀释到最佳浓度（rSar-Eno14.5μg/mL，rPsoc2746.0μg/mL）后加入96孔聚乙烯板，每孔100μL，4℃包被过夜。次日，弃孔内液体，每孔加入PBST缓冲液300μL，洗板3次，每加封闭液加血清样品加酶标二抗加底物显色终止反应6ELISA检测结果判定以空白孔调零，用酶标仪测定450nm的吸光值（OD450值），若阳性对照OD450值/阴性对照OD450值的比值大于2.1,则实验结果成立。P为待检血清孔OD450值，N为阴性对照孔OD450值，以P/N≥2.1判为阳性，4.4.1材料的准备4.4.2试剂对照样品和待检样品书方法提取疥螨虫体的基因组DNA，从而获得疥螨D试剂盒的说明书方法提取DNA，获得的DNA立即进行后续PCR扩增或放入-20℃pmol/μL,引物序列5’-GTGTGGAACTGGTAGAGG-3’，5’-CAGATCAAGCAAAAAGAGTTAAG-3’），灭菌蒸馏水加至25.0μL。同时设置疥螨DNA的阳性对照组和设置灭菌蒸馏水的阴性对照组。扩增条件如下：94°C预变性3min；94°C变性30s,54°C复性20s，72°C延伸20s，制板将1.6g琼脂糖放入8mL1×TAE缓冲液中，加热融化，待温度降至56℃左右，加入GoldViewII核酸染料8μL，倒入预先放置好的制胶台，插上梳子，厚加样与电泳经5V/cm电泳，电泳30min，于紫外凝胶成像仪或凝胶成像系统中观察结果，并拍照在实验结果成立的情况下，待检样品出现212bp的条带，则判定为疥螨核酸阳性（见附录F74.5综合判定4.5.1疑似患病动物4.5.2确诊患病动物5.1.1保持畜舍清洁干燥、通风、透光、不拥挤。5.1.3螨病常发地区，定期对家畜采用本文件中“4诊断立即隔离治疗，并使用外用杀虫药物对圈舍进行杀螨5.1.4养殖场严格使用药物进行定期驱虫。可选用伊维菌素、多拉菌素等药物，按药物生产厂家5.1.5放牧家畜螨病的预防可在每年春、秋两季选用氰戊菊酯、双甲脒和二嗪农等外用杀虫药物进行药浴或喷淋，按药物生产厂家推荐的用量与用按药物生产厂家推荐的用量与用法规范使用。对小型笼舍还可采用火焰喷烧进行杀5.1.7肉用或乳用家畜使用杀螨药物进行预防时要严格注意其休药期。5.1.8圈舍垫料、毛发等废弃物进行集中堆积发酵等方式杀灭螨虫或虫卵处理，具体按照GB/T5.2.1确诊患螨病的动物可采用化学药物进行治疗，药物的选择应符合《中华人民共和国兽药典》规5.2.2可选用伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素等进行治疗，按药物生产厂家推荐的用量与用法规5.2.3可选用氰戊菊酯、双甲脒和二嗪农等外用杀虫药物进行喷淋或药浴治疗，按药物生产厂家推荐8现症状最明显。病变部可形成坚硬的灰白色痂皮，故俗称“A.3猪各种年龄和品种的猪均可感染，临床症状主要表现为A.4兔皮肤病变始发于头部、体侧、躯干及颈部，后蔓延至肩部、9物体上摩擦，或用舌舔吮患部，皮肤损伤，脱毛，渗出液剥离；邻近的皮肤亦迅速脱毛；乘马及挽马常发生于装置鞍具、颈套、鞍褥(资料性)分类上属于疥螨科(Sarcoptidae)的疥螨属(Sarcoptes),为雌雄异体，虫体可分为假头和躯体角形鳞片、棒状刺。虫体腹面有4对粗短、呈圆锥形的足；前2对位于虫体前1/3;后2对足伸向后方，短，从背面不能见到，位于虫体后1/3(见图D.1)。雄螨：虫体大小为200微米~300微米×150微米~200微米，第1、2、4对足上有吸盘，第3对足上仅雌螨：虫体大小为300微米~500微米×250微米~400微米。第1、2对足上有吸盘，第3、4对足上各有一根长刚毛；生殖孔(产卵孔)位于虫体腹面中央，近末端有一阴道。图D.1疥螨(左：成螨背面观；右：成年雌螨腹面观)分类上属于痒螨科(Psoroptidae)的痒螨属(Psoroptes)的螨虫，其成螨虫体大小500微米~900微米×200微米~520微米，肉眼可见，虫体可分为假头和躯体两部份。假头位于端有两个大结节，上有长刚毛数根；腹面后部有两个吸盘；生殖器居于第4基节之间。雄螨有性吸盘和尾突(见图D.2)。雌螨：第1、2、4对足上有吸盘，第3对足上各有两根长刚毛后端有纵裂的阴道；躯体末端为肛门(见图D.2)。图D.2绵羊痒螨(左：雄螨腹面观；右：雌螨背面观)D.3足螨(Chorioptes)分类上属于痒螨科(Psoroptidae)的足螨属(Chorioptes)的螨虫，其成螨体长300微米~500微米，虫体分为假头和躯体两个部分。假头由背面的1对螯肢、1对须肢和1个口下板组成。虫体体表有细纹；口器较短，呈锥形；足长，跗节吸盘的柄短而不分节；肛门位于虫体末端(见图D.3)。4对足之间。体末端有2个结节，结节的前方腹面有1对环状性图D.3足螨(雌螨)背面观ELISA检测试剂配制和重组抗原制备E.1.2PBST缓冲液（0.01MPBS+0.05%Tween-2KH2PO40.2g，Na2HPO4·12H2O2.Trypton5g，YeastExtract10g，NaCl5g，5’-CGGATCCATGTCCATCAAAAAGATCTACGC-3’；R：5’-CGAGCTCTCAAACTGGGTGGCGGA-3’），将目的片段连接），E.2.2痒螨丝氨酸蛋白酶抑制剂重组抗原（rPsoc27）的制备GCTCATGTTGGTCAACATC-3’诱导8h后，采用SDS电泳验证表达情况（rPsoc27约75kDa）。进一步将正确表达的菌株扩大培），(规范性)PCR检测试剂配制与PCR扩增结果参考F.1PCR检测试剂配制F.2疥螨病的PCR检测结果判定参考图注：M.DL2000标准分子量(TakaRa);1.标准阳性扩增结果；2.阴性对照GTGTGGAACTGGTAGAGGAACTGGCTGAACTATTTATCCTCCTTTATCTAGAATCACTTATCATTCAAATAACAATTGTAAGATTACATATTGCTGGAATTTCTTCTATTTTAAGTTCTATCAATTTTATTGTAACTATTTATAATATAAAATAAGATGATCAAACTTAACTCTTTTTGCTT[1]郝桂英,杨光友,赖松家,等.兔螨净等3种杀虫药物对离体兔痒螨的杀灭试验.中国兽医杂志,[3]古小彬,杨光友,郝桂英.三种杀螨药对离体兔疥螨的杀灭试验.黑龙江畜牧兽[4]贾小勇,杨光友,赵小平,等.水牛痒螨和兔痒螨的形态学观察.寄生虫与医学昆虫学[5]古小彬,杨光友,赖松家,等.不同温度和pH对离体兔疥螨存活力的影响.中国兽医杂志[8]古小彬,张晓谦,杨光友,等.11株螨虫分离株的ITS-