DB51T 3006-2023 水稻对南方水稻黑条矮缩病抗性鉴定技术规程　

DB51I 2 4 6 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定1水稻对南方水稻黑条矮缩病抗性鉴定技术规程本文件适用于水稻品种（资源）对南方水稻黑条矮缩病的抗NY/T2631南方水稻黑条矮缩病测报技术规范感病对照品种TN1susceptiblec无毒白背飞虱non-toxicwhite-back4试剂与设备2可调控温光的养虫室，温度保持于26℃±1℃范围内，相对湿度80%～90%，光照每天15.1.1鉴定病圃的选择与设置5.1.2.1分行初步筛选将不同播期TN1秧苗充分混合移栽做保护行和诱发行，每行TN1单本移栽6株，保护行或诱发行之间预留10株参试品种空间。水稻参试品种按同样规格单本移栽于TN1保护行或诱发行之间，各品种移栽35.1.2.2小区重复鉴定在常年第一代白背飞虱迁入或发生高峰前7d～10d播种感病对照品种TN1，每隔10d再播种一次，共播种时期较当地生产常规播种期晚5d～10d。种子经浸泡、催芽、育苗移栽方式种植。育秧方式为湿润育秧，苗床上感病对照品种TN1撒播，参试品种分行条播，苗床首尾及每10行参试品种间隔播种一行感灌溉水与常规管理一致。秧田期较常规管理增施尿素5kg/667m2。本田管理较常规肥水管理增施尿5.1.5.1虫量调查35.1.5.2带毒率调查头以上，从中随机选取100头，用RT-PCR检测（参照本附录A）小批量白背飞虱或Dot-ELISA（参照5.1.5.3有效传毒虫量计算FVS=N×PVS………………（1）FVS——田间鉴定的有效传毒虫量，单位为头每公顷（头/hm2N——白背飞虱虫量，单位为头每公顷（头/hm25.2.1.1拔节期调查5.2.1.2抽穗黄熟期调查5.2.2.1分蘖、拔节期症状5.2.2.2抽穗黄熟期症状基部可见纵向皱褶；在茎秆下部节间和节上可见蜡白色或黑褐色瘤状突起。以黄熟期初期植株有1个以上不孕、不实（结实粒少于全穗1/3）分蘖症状为感病单株判4Rif=(nif+nd)/(ntf+nd)×100%…………（2）式中:Rif——抽穗黄熟期感病株率，单位为百分率（%ntf——抽穗黄熟期存活总株数，单位为株。式中:Rr——抽穗黄熟期相对发病率，单位为百分率（%Rif——抽穗黄熟期感病株率，单位为百分率（%）；Rsf——抽穗黄熟期感病对照的感病株率，单位为百分率（%选取饲喂白背飞虱的水稻种子用水浸种24h后，纱布覆盖，恒温箱32℃±2℃催芽24h～48h，选取发芽良好的种子25粒～30粒均匀播于盛有自然肥力土壤的内径80mm～110mm塑料杯中；大约6d～7d后，待苗长至1.5叶期时，将待产的单头白背飞虱移入杯中产卵，约3d后将成虫移出，单独保存，7d～10d在重病区采集表现南方水稻黑条矮缩病疑似症状的水稻5采病株叶片按照NY/T2631附录C的规定或参考附录A进行检测，确认感染南方水稻黑条矮缩病毒则将7.2的病株种于内径100mm～200mm大烧杯中,土面覆盖滤纸,将适量1龄～2龄无毒白背飞虱移入其中,并用60目防虫网封口。饲毒2d后将虫移入内径80mm～110mm，预先育有白背飞虱喜食品种如TN1参试品种，含感病对照经5.1.3方法浸种、催芽；选取30粒左右发芽良好的种子均匀播于盛有自然IVS=N×PVS………………（4）式中:N——接种白背飞虱数量，单位为头。当IVS值处于1～2头/株范围内，方可认为试杀，将秧苗移出塑料杯，至15℃~30℃条件下培育，常规管理，定期观察植株发病情况。（按照NY/T2631附录C的规定）或RT-PCR检测确认（参考附若出现感病对照的平均感病株率小于30则重复进行试验。按6Rit=nit/ntt×100%…………（5）式中:Rit——苗期感病株率，单位为百分率（%nit——苗期感病株数，单位为株；7除特别说明以外，本文件所用试剂均为分析纯，所有试剂均用无RNA酶污染的容器，可用1A.1.1液氮：可保存于液氮罐或保温桶中。A.1.7琼脂糖。A.1.9冰乙酸。A.1.1150×TAE配方:Tris碱242g；冰乙酸57.1ml；EDTA（0.5mol/L）100ml，定容至1000ml。A.1.14Gelred核酸染色工作液（国产，购于上海李记生物科技有限公司）参照使用说明进行。A.2仪器设备A.2.1称量天平：精度等级为0.0A.2.3冰箱（2℃~8℃和-20℃两种）。A.2.4微量可调移液器（2μL、10μL、100μL、1000μL）及配套带滤芯吸头。A.3检测引物正向引物SRB-S10-F5’-CCACATCGCGTCATCTCAAACTAC-3’反向引物SRB-S10-R5’-CGGTCTTACGCAACGATGAACC-3’A.4试验操作A.4.1采样工具），8A.4.2样品采集置于装有液氮的保温桶内，尽快运回实验室4℃条件下保存待检，存放不能超过7d。A.4.3样品保存新鲜样品若需长期保存应置于-70℃以下，避免反复冻融（冻融不超A.4.4样品处理A.4.4.2按照0.1g样品/1mLTRIzolreagent,加入适量TRIzolreagenA.4.4.3每1mLTRIzolreagent加入0.2mL氯仿，盖好管盖，充分震荡15s，室温静置5min；A.4.4.512000r/min，4A.4.5检测A.4.5.1扩增试剂准备A.4.5.2循环条件设置将A4.5.1中离心后的PCR管放入PCR仪内，记录样本9A.5结果判定A.5.1结果分析条件设定根据成像结果，凝胶中根据DNAMarker标识在920bp的水平位置，如果阳性对照和检测样品均具有0全株所有分蘖均能正常抽穗、结实，无明显矮化分蘖，感全株1-2个分蘖明显矮化，顶部有小穗结实，但结实率低南方水稻黑条矮缩病品种抗性调查记载表—分蘖拔节表C.1南方水稻黑条矮缩病品种抗性调查记………南方水稻黑条矮缩病品种抗性调查记载表—分蘖拔节表C.2南方水稻黑条矮缩病品种抗性调查记………