临床免疫学和免疫检验第五章凝集反应讲义

临床免疫学和免疫检验第五章凝集反应讲义第五章凝集反应细菌、红细胞等颗粒抗原，或可溶性抗原（或抗体）与载体颗粒结合成致敏颗粒后，它们与相应抗体（或抗原）在适当电解质存在下，形成肉眼可见的凝集现象，称为凝集反应。第一节凝集反应的特点凝集试验是一个定性的检测方法，即根据凝集现象的出现与否判定结果阴性或阳性；也可进行半定量检测，即将抗体作一系列稀释，与抗原结合产生凝集的最高稀释倍数作为其效价或滴度。凝集反应分为两个阶段：①抗原抗体的特异性结合；②出现可见的颗粒凝聚。第二节直接凝集反应一、原理细菌、螺旋体和红细胞等颗粒性抗原，在适当的电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集。参加凝集反应的抗原称凝集原，抗体则称为凝集素。二、方法有玻片法和试管法两类。（一）玻片凝集试验主要用于抗原的定性分析，短时间便能观察结果。一般用来鉴定菌种或分型；也用于人类ABO血型的测定。（二）试管凝集试验是用定量抗原悬液与一系列梯度倍比稀释的待检血清混合，保温静置后，根据每管内颗粒凝集的程度，以判断待检血清中有无相应抗体及其效价。可以用来协助临床诊断或流行病原调查研究。例如肥达试验、外斐试验、输血时也常用于受体和供体两者间的交叉配血试验。第三节间接凝集反应一、原理间接凝集反应是将可溶性抗原（或抗体）先吸附于适当大小的颗粒性载体表面，然后与相应抗体（或抗原）作用，在适宜电解质存在的条件下，出现特异性凝集现象。二、间接凝集反应的类型（一）正向间接凝集反应可溶性抗原致敏载体，用以检测标本中待测抗体的凝集反应，称为正向间接凝集反应。（二）反向间接凝集反应特异性抗体致敏载体，用以检测标本中待测抗原的凝集反应，称为反向间接凝集反应。（三）间接凝集抑制反应先将可溶性抗原（或抗体）与相应的抗体（或抗原）混合，然后再加入抗原（或抗体）致敏的载体颗粒，则能抑制原先的凝集现象，称为正向（或反向）间接凝集抑制试验。间接凝集抑制试验可用于检测抗体、自身抗体、变态反应性抗体，也可测定抗原。（四）协同凝集反应协同凝集反应与间接凝集反应的原理相类似，但所用载体为金黄色葡萄球菌A蛋白（SPA）。SPA具有与IgG的Fc段结合的特性，因此当这种葡萄球菌与IgG抗体连接时，就成为抗体致敏的颗粒载体。如与相应抗原接触，即出现反向间接凝集反应。协同凝集反应也适用于细菌的直接检测。间接凝集反应适用于各种抗体和可溶性抗原的检测。以载体来分，常用的为红细胞、胶乳颗粒及明胶颗粒等。三、间接凝集反应的载体分类（一）间接血凝试验1.原理：抗原（或抗体）包被于红细胞表面，成为致敏载体，然后与相应的抗体（或抗原）结合，从而使红细胞被动的凝聚在一起，出现可见的红细胞凝集现象。2.载体：最常用的为绵羊、家兔、鸡的红细胞及O型人红细胞。致敏的新鲜红细胞保存时间短，且易变脆、溶血和污染，只能使用2～3天。为此一般在致敏前先将红细胞醛化，可长期保存而不溶血。常用的醛类有甲醛、戊二醛、丙酮醛等。红细胞经醛化后体积略有增大，两面突起呈圆盘状。3.致敏：致敏用的抗原或抗体要求纯度高，并保持良好的免疫活性。4.血凝试验：可在微量滴定板或试管中进行，将标本倍比稀释，一般为1:64。凡红细胞沉积于孔底，集中呈一圆点的为不凝集（－）。如红细胞凝集，则分布于孔底周围。以＋＋凝集（红细胞沉积于管底呈环状，四周有凝集的小块）的孔为滴度终点。（二）胶乳凝集试验载体为聚苯乙烯胶乳，是一种直径约为0.8μm大小的圆形颗粒，带有负电荷，可物理性吸附蛋白分子，但这种结合牢固性差。胶乳凝集试验分试管法和玻片法两种。（三）明胶凝集试验将病毒抗原或重组抗原吸附于粉红色明胶颗粒上，当致敏颗粒与样品血清作用时，若血清含有抗病毒抗体则可形成肉眼可见的粉红色凝集。该方法具有高灵敏度、简便、快速等优点，应用于HIV-1抗体和抗精子抗体检测等。四、间接凝集反应的应用间接凝集反应具有快速、敏感、操作简便、无需特殊的实验设备等特点，而且能用于抗原或抗体的测定，因此在临床检验中广为应用。（一）抗原的检测反向间接凝集试验用于检测病原体可溶性抗原，也可用于检测各种蛋白质成分。（二）抗体的检测可用于检测细菌、病毒和寄生虫等感染后产生的抗体，例如间接凝集试验或明胶颗粒凝集试验用于检测抗人类免疫缺陷病毒（HIV）抗体以诊断艾滋病、胶乳凝集试验用于检测抗溶血素O等。第四节自身红细胞凝集试验原理：抗人O型红细胞的单克隆抗体能与任何种血型的红细胞结合，但不引起凝集反应，这种抗体与另一特异性抗体（或抗原）连接成，检测标本中的抗原（或抗体）。该反应中的红细胞是未经致敏的受检者新鲜红细胞，因此反应中的标本为受检者的全血。自身红细胞凝集可用于HIV抗体、HBsAg的检测，灵敏度与间接血凝试验相仿。第五节抗球蛋白试验又称Coombs试验，检测抗红细胞的不完全抗体。直接Coombs试验——检测红细胞上的不完全抗体间接Coombs试验——检测游离在血清中的不完全抗体。不完全抗体就是半抗体，即能与相应的抗原结合，但结合后在盐水介质中不出现肉眼可见的凝集反应。Coombs试验应用于血液病的检测：如自身免疫性溶血性贫血、药物诱导的溶血、新生儿溶血症等。还可采用专一特异性的抗球蛋白的血清如抗IgG血清、抗IgA或抗IgM以及抗补体血清等，分析结合于红细胞上的不完全抗体的免疫球蛋白亚类。【习题】颗粒性抗原在适当的电解质参与下与相应的抗体结合，出现凝集的试验称为A.正向间接凝集反应B.反向间接凝集反应C.直接凝集反应D.协同凝集法E.间接凝集机制反应『正确答案』C『答案解析』直接凝集反应的原理是细菌、螺旋体和红细胞等颗粒性抗原，在适当的电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集。以下物质属于颗粒性抗原的有A.破伤风杆菌及其外毒素B.SRBC和破伤风外毒素C.SRBC和伤寒沙门菌D.白喉棒状杆菌和青霉素E.糖蛋白和脂蛋白『正确答案』C『答案解析』SRBC和伤寒沙门菌属于颗粒性抗原。目前实验室常采用的以肺炎支原体细胞膜成分致敏人工明胶粒子检测血清中相应的抗体属于A.协同凝集反应B.反向间接凝集反应C.间接凝集抑制反应D.明胶凝集试验E.直接凝集反应『正确答案』D『答案解析』明胶凝集试验也是一种间接凝集试验，将病毒抗原或重组抗原吸附于粉红色明胶颗粒上，当致敏颗粒与样品血清作用时，若血清含有抗病毒抗体则可形成肉眼可见的粉红色凝集。该方法具有高灵敏度、简便、快速等优点，广泛应用于HIV-1抗体和抗精子抗体检测等。下述试验方法中，不能用于可溶性抗原检出的是A.间接血凝试验B.反向间接凝集试验C.间接凝集抑制试验D.直接凝集试验E.间接凝集试验『正确答案』D『答案解析』不能用于可溶性抗原检出的是：直接凝集试验。检测抗红细胞不完全抗体可使用的凝集反应为A.协同凝集反应B.间接凝集反应C.间接血凝试验D.Coombs试验E.直接凝集反应『正确答案』D『答案解析』抗球蛋白试验，又称Coombs试验，是检测抗红细胞不完全抗体的一种很有用的方法。关于不完全抗体，下列说法正确的是A.不能与抗原结合B.与抗原结合并出现凝集C.与抗原结合不出现凝集D.常为IgM类抗体E.为多克隆抗体『正确答案』C『答案解析』不完全抗体与抗原结合不出现凝集。胶乳凝集试验属于A.沉淀反应B.直接凝集反应C.间接凝集反应D.间接血凝试验E.补体结合试验『正确答案』C『答案解析』胶乳凝集试验属于：间接凝集反应。临床中，不能用直接Coombs试验进行检测的疾病是A.新生儿溶血症B.缺铁性贫血C.自身免疫性溶血症D.检测母体Rh（D）抗体E.药物诱导溶血『正确答案』B『答案解析』Coombs试验除广泛应用于血液病的检测外，如自身免疫性溶血性贫血、药物诱导的溶血、新生儿溶血症等，还可采用专一特异性的抗球蛋白的血清如抗IgG血清、抗IgA或抗IgM以及抗补体血清等，分析结合于红细胞上的不完全抗体的免疫球蛋白亚类。临床中进行肥达试验最常采用的方法为A.正向间接凝集反应B.反向间接凝集反应C.玻片凝集法D.试管凝集法E.间接凝集抑制反应『正确答案』D『答案解析』试管凝集试验是用定量抗原悬液与一系列梯度倍比稀释的待检血清混合，保温静置后，根据每管内颗粒凝集的程度，以判断待检血清中有无相应抗体及其效价，可以用来协助临床诊断或流行病原调查研究。例如肥达试验、外斐试验、输血时也常用于受体和供体两者间的交叉配血试验。将VDRL抗原吸附于活性炭颗粒表面检测人血清中的梅毒螺旋体血清反应素试验属于A.正向间接凝集反应B.反向间接凝集反应C.协同凝集反应D.直接凝集反应E.间接凝集抑制反应『正确答案』A『答案解析』正向间接凝集反应可溶性抗原致敏载体，用以检测标本中待测抗体的凝集反应，称为正向间接凝集反应。临床中进行外斐试验最常采用的方法为A.正向间接凝集反应B.反向间接凝集反应C.协同凝集反应D.试管凝集反应E.间接凝集抑制反应『正确答案』D『答案解析』试管凝集试验是用定量抗原悬液与一系列梯度倍比稀释的待检血清混合，保温静置后，根据每管内颗粒凝集的程度，以判断待检血清中有无相应抗体及其效价，可以用来协助临床诊断或流行病原调查研究。例如肥达试验、外斐试验、输血时也常用于受体和供体两者间的交叉配血试验。临床输血时用于受体和供体两者间的交叉配血试验属于A.正向间接凝集反应B.反向间接凝集反应C.协同凝集反应D.试管凝集反应E.间接凝集抑制反应『正确答案』D『答案解析』试管凝集试验是用定量抗原悬液与一系列梯度倍比稀释的待检血清混合，保温静置后，根据每管内颗粒凝集的程度，以判断待检血清中有无相应抗体及其效价，可以用来协助临床诊断或流行病原调查研究。例如肥达试验、外斐试验、输血时也常用于受体和供体两者间的交叉配血试验。以自身红细胞或“O”型红细胞检测患者血清中冷凝集素的试验属于A.正向间接凝集反应B.反向间接凝集反应C.协同凝集反应D.直接凝集反应