基因编辑Cas9系列讲座2CRISPR-Cas9dCas9相关应用1

®CRISPR-Cas9dCas9相关应用解螺旋|

知识金牌知识金牌解

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长Contents课程目录第一部分第二部分第三部分下节课程dCas9基本原理dCas9用于转录激活

dCas9用于转录抑制CRISPR-Cas9

dCas9相关应用dCas9相关应用2dCas9基本原理01知识金牌解

螺

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成

长dCas9基本原理Nishimasu

H,

et

al.

Crystal

structure

of

Cas9

incomplex

with

guide

RNA

and

target

DNA.Cell.2014

Feb27;156(5):935-49.

PMID:

24529477ABD互补链知识金牌解

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长第一部分|

dCas9基本原理正向反向转录VP64(激活)KRAB(抑制)甲基化DNMT3A

or

MQ1(甲基化)TET1(去甲基化)组蛋白乙酰化p300(乙酰化)LSD1(去甲基化)单碱基编辑胞苷脱氨酶切割FokI位点可视化GFP//xinwenzixun/168.htmldCas9融合不同蛋白实现不同的功能dCas9用于转录激活02知识金牌第二部分|

dCas9用于转录激活PI时间机制文献PMIDRonald

D.Vale2014.10dCas9-SunTagCell25307933ZhangFeng2015.1dCas9-SAMNature.25494202Lim

WA2015.1scRNACell25533786George

Church2015.10dCas9-VPRNat

Methods25730490dCas9-SAM解螺旋|陪伴医生科研成长dCas9-VPRdCas9-SunTag知识金牌第二部分|

dCas9用于转录激活VP64转录激活因子dCas9-SunTagTanenbaum

ME,

et

al.

A

protein-taggingsystem

for

signal

amplification

in

geneexpression

and

fluorescence

imaging.

Cell.2014

Oct

23;159(3):635-46.

PMID:

25307933解螺旋|陪伴医生科研成长知识金牌第二部分|

dCas9用于转录激活dCas9-SunTagpHRdSV40-dCas9-10xGCN4_v4-P2A-BFPPlasmid

#60903pHRdSV40-scFv-GCN4-sfGFP-VP64-GB1-NLSPlasmid

#

60904解螺旋|陪伴医生科研成长知识金牌第二部分|

dCas9用于转录激活dCas9-VPR020,00040,00060,00080,000100,000Median

fluorescence

intensity

(a.u.)*p65RtasgRNAdCas9VP64(GS)n

linkersC-terminusabReporter

ControlVP64VP64-p65VP64-RtaVP64-p65-Rta10-810-610-210010010210410610-4Basal

gene

expression解螺旋|陪伴医生科研成长Relative

RNA

ExpressionTTNRHOXF2ASCL1MIATNEUROD1ACTC1VEGFNEUROG2Chavez

A

,

et

al.

Highly

efficient

Cas9-mediated

transcriptionalprogramming.

NatMethods.

2015

Apr;12(4):326-8.

PMID:25730490知识金牌第二部分|

dCas9用于转录激活dCas9-VPRSP-dCas9-VPRPlasmid

#63798SP-dCas9-VPR解螺旋|陪伴医生科研成长lenti-EF1a-dCas9-VPR-PuroPlasmid

#99373知识金牌解

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成

长dCas9-scRNA第二部分|

dCas9用于转录激活Zalatan

JG,

et

al.

Engineering

complex

synthetictranscriptional

programs

with

CRISPR

RNA

scaffolds.

Cell.2015

Jan

15;160(1-2):339-50.

PMID:

25533786https://www.addgene.org/browse/article/9593/知识金牌dCas9-SAM第二部分|

dCas9用于转录激活解螺旋|陪伴医生科研成长知识金牌第二部分|

dCas9用于转录激活dCas9-SAM解螺旋|陪伴医生科研成长知识金牌解

螺

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生

科

研

成

长第二部分|

dCas9用于转录激活lenti

sgRNA(MS2)_puro

optimized

backbonePlasmid

#73797Joung

J

,

et

al.Genome-scale

CRISPR-Cas9

knockoutand

transcriptional

activation

screening.

Nat

Protoc.2017

Apr;12(4):828-863.

PMID:

28333914lentiSAMv2Plasmid

#75112lentiMPH

v2Plasmid

#89308知识金牌解

螺

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伴

医

生

科

研

成

长第二部分|

dCas9用于转录激活Chavez,

et

al.

Comparison

of

Cas9

activatorsin

multiple

species.

Nat

Methods.

2016Jul;13(7):563-567.PMID:

27214048知识金牌解

螺

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医

生

科

研

成

长第二部分|

dCas9用于转录激活dCas9用于转录抑制03知识金牌第三部分|

dCas9用于转录抑制dCas9-scRNAThakore

PI,

et

al.

Highly

specific

epigenome

editing

by

CRISPR-Cas9

repressors

for

silencing

of

distal

regulatory

elements.

NatMethods.

2015

Dec;12(12):1143-9.

PMID:26501517解螺旋|陪伴医生科研成长知识金牌Gilbert

LA

,

et

al.

CRISPR