DB32T 3356-2018 南京椴组培育苗技术规程

65.020.4065.020.40B61B61备案号：58093-2018DB32ICSICSTechnicalTechnicalregulationforpropagationofTiliamiqueliana江苏省质量技术监督局IDB32/T3356—2018本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由江苏省中国科学院植物研究所提出并归口。本标准起草单位：江苏省中国科学院植物研究所。本标准主要起草人：汤诗杰、束晓春、李乃伟、王欢利、王仲伟。1DB32/T3356—2018南京椴组培育苗技术规程本标准规定了南京椴组织培养技术中外植体选择与处理、腋芽诱导、继代增殖、生根培养、炼苗、移栽和移栽后管理的技术要求。本标准适用于南京椴的组织培养快速繁殖。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB6001育苗技术规程3外植体选择与处理3.1外植体母株选择选择生长健壮且无病虫害的母株。宜选择1年生苗龄的实生容器苗，不宜选择其他苗龄，忌用地栽3.2外植体母株管理于3月份，将腋芽尚未萌发的南京椴容器苗，移至玻璃温室培养。使用培养架将容器苗底部隔离地面50cm。每隔10d，喷洒多菌灵1次，使用40%多菌灵可湿性粉剂500～800倍液。切忌将容器苗地表放置，以免根系扎入带菌土壤中生长。3.3外植体选择外植体母株枝条未木质化之前，剪下枝条，去除叶片，保留1cm长叶柄，作为外植体。主干基部保留3-4个饱满的腋芽。在8月初、9月初与10月初，可重复3次外植体取样。3.4外植体消毒先用毛刷对枝条表面刷洗，并通过清水冲洗干净。再用84消毒液（稀释50倍在摇床上振荡消毒15min-20min，并通过流水冲洗20min-30min。于无菌操作台上，用75％乙醇消毒50s-60s，然后立即倒入0.1％的升汞消毒10min，最后无菌水洗涤4次，每次振荡3min-5min。3.5外植体分段将消毒后的枝条，切割成0.6cm长的茎段，每段带1个腋芽。4腋芽诱导2DB32/T3356—2018将茎段接种于诱导培养基中进行初代诱导，培养温度为25℃,首先在黑暗中培养24小时，然后光照培养20d：光照时间为10-16小时/天，光照强度为2000lx，所述初代诱导培养基为WPM培养基，添加的激素水平为：6-BA0.2mg/L+KT0.1mg/L+IBA0.04mg/L+GA30.2mg/L，诱导培养基PH为5.8。5继代增殖初代培养20d后，将10cm高的初代苗切割为1cm茎段，每茎段带1腋芽，切除叶片，接入继代增殖培养基，进行不定芽诱导，继代培养20d，培养温度为25℃,光照时间为10-16小时/天，光照强度为2000lx，继代增殖培养基为WPM培养基，并添加反式玉米素0.2mg/L+KT0.5mg/L+IBA0.1mg/L，培养基PH为5.8。6生根培养继代培养40d后，南京椴无根试管苗进行切分，每株均有2个不定芽，接入生根培养基中进行生根培养20d，培养温度为25℃,光照时间为10-16小时/天，光照强度为2000Lx，生根培养基1/2MS培养基，并添加IBA3.0mg/L+NAA1.0mg/L，培养基PH为5.8。7炼苗培养当生根苗的不定根长至4cm左右，生根数在4-8根时，将组培瓶从培养室取出，不打开瓶盖，在温室或荫棚驯化3d，环境遮光度为60%。驯化后打开瓶盖，继续驯化2d后从瓶中取出组培苗，洗净根部培养基后用40%多菌灵可湿性粉剂（500～800）倍液浸泡20min。8移栽8.1栽培基质选择基质成分为重量比1:3:2的黄心土、珍珠岩和草炭土。8.2栽培容器选择采用50孔穴盘，圆形口、尖底的5cm×11cm穴盘。旧穴盘需消毒后才可使用。8.3移栽方法组培苗上方使用带孔PVC膜覆盖保湿，放在通风阴凉处培养20d-30d，培养到第15d将PVC膜移除，换用折光率75%的遮阳网。9移栽后管理9.1光照管理初始光照强度宜在5000lx左右，15d后将光照提高至15000lx。9.2温度管理移栽苗培养温度为18℃~28℃,以25℃恒温为最佳。3DB32/T3356—20189.3水分管理移栽苗初始培养湿度范围为70％～85％，培养30d后，将湿度控制在50%～75％。9.4消毒与施肥管理每隔10d喷1次多菌灵1000倍液。每隔15d喷施可溶性完全肥料（N:P:K=3:1:1）1000倍液1次。4DB32/T3356—2018（规范性附录）WPM培养基母液成分组成名称成分含量（mg/L）①单位母液加入药品（g）0.5L2.0L大量K2SO49909.9MgSO4•7H2O3703.7KH2PO4NH4NO34004.08微量MnSO4•4H2O22.52.259ZnSO4•7H2O8.60.86H3BO36.20.62CuSO4•5H2O0.250.025Na2MoO4•2H2O0.250.025钙盐Ca(NO3)2•4H2O55627.8铁盐②FeSO4•7H2O27.82.78Na2-EDTA37.33.73有机物肌醇2468甘氨酸2.00.2VB10.1VB60.50.05VB50.50.05注：①此处含量为最终WPM培养基中的含量。②先将Na2EDTA用去离子水溶解，加热至沸腾2-3次，再用一个瓶子溶好铁盐，待Na2EDTA完全冷却以后，再将5DB32/T