圆斑蝰蛇蛇毒质量标准

圆斑蝰蛇蛇毒质量标准B-5.1范围本标准适用于从圆斑蝰蛇中采集药用蛇毒毒液，并经冷冻干燥制得的药用蛇毒。B-5.2主要成分主要活性成分为神经毒素和蛋白水解酶。B-5.3性状本品应为类白色至黄色结晶或粉末。B-5.4鉴别（1）取本品10mg，加水5ml溶解，作为供试品溶液；取小试管，加入凝血质控血浆混悬液[凝血质控血浆（MDCHemostasis）放至室温，每支加水1.0ml，放置15分钟，期间间或轻摇，每次使用前轻轻播匀]0.2ml，置37℃±0.5℃水浴中2分钟，加供试品溶液0.2ml，置37℃±0.5℃水浴中振摇，观察，血浆应在10秒内出现白色絮团。（2）取本品10mg，加水5ml溶解，取1ml置试管中，加0.4mol/l碳酸钠溶液1ml与0.1mol/L福林试液1ml，置37℃水浴中2分钟，溶液应呈蓝色。B-5.5检查B-5.5.1干燥失重取本品约0.50g，以五氧化二磷为干燥剂，在60℃减压干燥至恒重，减失重量不得过10.0%（中国药典四部通则0831）。B-5.6含量测定B-5.6.1蛋白质蛋白质取本品约50mg，精密称定，置50ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，照蛋白质含量测定法（中国药典四部通则0731第二法）测定，计算，即得。按干燥品计算，含蛋白质应不少于70%。B-5.6.2活性取蛋白质项下的供试品溶液，精密量取1ml，置5ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取凝血质控血浆混悬液[凝血质控血浆（MDCHemostasis）放至室温，每支加水1.0ml，放置15分钟，期间间或轻摇，每次使用前轻轻摇匀]0.2ml，置小试管中，37℃±0.5℃水浴中保温3分钟，加入供试品溶液0.2ml，立即摇匀，同时计时，于37℃±0.5℃水浴中振摇。应在60秒内出现白色絮团。B-5.7酶活性0.005MNa-对甲苯磺酰基-L-精氨酸甲酯盐酸盐（TAME）对照品溶液的制备精密称取TAME（分子量378.87）0.1894g，加甲醇2ml溶解，移置100ml量瓶中，加三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液（取三羟甲基氨基甲烷6.05g，加水500ml溶解后，加0.1M混匀，调节pH至7.6，加水至1000ml）至刻度，置冰箱中，可使用1-2周。标准曲线的制备取试管6支，分别精密加入TAME对照品溶液0.0ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml，再依次精密加入三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液（pH7.6）至2.0ml，置37℃水浴中准确保温15分钟，再各精密加入碱性羟胺溶液（将14%盐酸羟胺与14%氢氧化钠溶液临用前等量混合）2.0ml，摇匀，置37℃水浴中继续保温20分钟，取出后各精密加入4M盐酸液1.0ml，10%三氯化铁水溶液1.0ml，摇匀，室温放置30分钟，照紫外-可见分光光度法（附录0401在500nm波长处测定吸收度。以TAME浓度为横坐标，吸收度为纵坐标，绘制标准曲线或用最小二乘法回归，求出回归方程。供试品测定取本品适量，置100ml量瓶中，加三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液（pH7.6）适量溶解并稀释至刻度混匀，制成约0.1mg/ml的供试品溶液。精密量取供试品溶液0.5ml，置试管中，精密加入三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液（pH7.6）0.5ml，置37℃水浴中预热5分钟，精密加入已预热至37℃的TAME对照品溶液1.0ml，摇匀，置37℃水浴中准确反应15分钟，照标准曲线项下的方法，自“精密加入碱性羟胺溶液2.0ml……”起，依法测定，从标准曲线上查得相应的底物量（未被转化TAME的微克分子数按下式计算本品的活力单位。供试品溶液的酶活力单位/ml=（5-X）/（15×0.5）式中：5-为TAME对照品溶液1ml中所含TAME的微克分子数X-为曲线上查的未被供试品溶液转化的TAME的微克分子数15-为酶反应时间15分钟0.5-为供试品取样量酶活力不得低于？单位/mg。B-5.8检验规则B-5.8.1组批同一产地且养殖地的生态环境条件、其它养殖饲料来源、生产周期、生产管理措施、采集和加工方法基本一致，质量基本均一的药用蛇毒。B-5.8.2抽样按GMP要求每批随机抽取样品适量，分成二份，其中一份留样备查。B-5.8.3检验按批进行抽样检验，产品经检验合格后方可放行出厂，并附有检验合格报告书。B-5.8.4判定规则检验结果中如有一项或多项指标不符合本标准要求时，应重新加倍抽样进行复检，复检结果如有一项指标不符合标准要求，则判该批产品为不合格品。B-5.9标志、包装、运输和贮存B-5.9.1标志产品或包装物品上应有产品名称、种属、批号、重量、保质期、贮存条件等标志，并附上产品质量检验合格证明。B-5.9