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备案号：35740-2013DB22DB22/T1606—2012副猪嗜血杆菌病诊断技术规程TechnicalspecificationofdiagnosisforHaemophilusparasuis2012-12-01发布2013-01-01实施吉林省质量技术监督局发布I1GB/T6682分析实验室用水规GB16548病害动物和病害动物产品生NY/T541动物疫病实验室检验采样镜下观察渗出物，可见纤维蛋白，中性粒细胞和较少量的巨噬细胞。病死猪及病料的处理应符合GB24.4.2细菌涂片，革兰氏染色镜检。如果为革兰氏阴性小杆状或多形性小杆菌，再进4.4.3巧克力琼脂平板生长良好，而鲜血琼脂平板和普通琼脂平板没有菌落生成则菌培养物接种于添加有烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）的脲酶、氧化酶、吲芽糖、蔗糖、果糖、核糖、半乳糖、硝酸盐还原酶等细菌微量生化鉴定管，置37℃培养48h。按细菌3PCR引物P15′-GTGATGAGGAAGGGTGGTGT–3′和P25′-GGCTTCGT按NY/T541规定的方法，采集待检猪的病料置于-20℃保存。取约1g病料，剪碎后匀浆器加5mL规定处理待检猪。取可疑培养物10000r/min离心54高速10000r/min离心5min，取上清-20℃保存备用。分离纯化的菌株用接种环刮取2个菌制备1%琼脂糖凝胶，内加适量溴化乙锭或其替代物，取PCR产物10μL～20μL分别与适量加样缓冲液混合后，加入到样品孔，9V/cm恒压下电泳15mi5用微量移液器先向反应板每孔中加25μL稀释剂，再向第1孔加人1:32、1:64），混匀后从第6孔取出25μL弃去。向每孔中加入25μL2%致敏红细胞，血清的最终稀释倍数为1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、1:128。同时应设阴、阳性血清对照及致敏红细胞空白对照。置6病原学特性A.1病原菌副猪嗜血杆菌为格兰氏阴性菌，非溶血性，NAD依赖型细菌，有多近呈卫星生长，菌落直径达1～2毫米。该菌对外界抵抗力不强，干燥环境易死亡，60℃可存活5min~20min，4℃可存活7d～10d，对结晶紫、杆菌肽、红霉素、林可霉素、土霉素、卡那霉素、磺胺类6、7、8、9、11

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