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2010-06-24发布贵州省质量技术监督局发布I I 1 2 2 2 2 2 5 5 612NY/T402-2000脱毒甘薯种薯（苗）病毒检测技术规程甘薯脱毒试管苗sweetpotatovius-feepla是一种采用较温和的理化因素，仅杀死物体表面或内部一部分有害的病原菌，而对被采用强烈的理化因素使任何物体内外部的一切微生物永远丧失其生长繁能力的措施，3原原种pe-elite选择无病虫、品种纯正的健壮植株，切取带生长点的茎段2.0cm～3.0cm，去掉叶片，4.3.1将表面冲洗干净的外植体置于超净工作台上，先用70%的酒精表面消毒10s，再用2%的次氯酸钠溶液消毒10min～15min后，无菌水冲洗3次～5次，置于无菌滤纸上吸去4.3.2将消毒好的外植体置于超净工作台上的双目解剖镜下，用解剖针轻轻剥去外植体上的未开小叶至露出茎尖生长点，在仅留两个叶原基（大小约0.2mm～0.4mm）处用解剖甘薯茎尖诱导培养2～4个月，茎尖生长分化即可形成具有2～3片开叶的试管苗，将其转接到固体增培养基（配制方法见附录A）内培养，培养条件是22℃~28℃,2000按NY/T1200中的6.1.3执行，将部分检测合格的脱毒株系种4每段留1～2片叶，叶面朝上插在固体增培养基（配制方法见附~16h，相对湿度70%～80%。按NY/T1200中的6.2.1.2进行甘薯病毒检测，检测的病毒类型是甘薯羽状斑驳病毒5A.1.6酸度计或pH试纸A.2.1茎尖组织培养所用试剂为分析纯级别，培养基用水为蒸馏水d)有机物：甘氨酸2.0，盐酸硫胺素(VBl)0.4，盐酸吡哆醇(VB6)0.5，烟酸0.5，肌醇A.3.1茎尖诱导培养基：MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+GA30.05mg/L+蔗糖30g/L+琼脂A.3.2固体增培养基：MS+白糖30g/L+琼脂6-9g/LA.4.5铁盐配制：按100倍用量分别称取两种试剂，单独加6A.4.6有机物配制：以100倍用量分别称量分别溶解，再混合、A.4.8萘乙酸NAA配制：按0.1mg/ml浓度适量称取萘乙酸NAA，先用少许95%酒精使之A.4.9赤霉素GA3配制：按0.05mg/ml浓度适量称取赤霉素GA3，先用少许95%酒精使之A.4.106-氨基腺嘌呤6-BA配制：按0.5mg/ml浓度适量称取6-氨基腺嘌呤6-BA.用少a)溶化琼脂：按需量称取琼脂入不锈钢锅内，加入所需配制培养基体积一半的水，加b)加母液：将称量好的各种母液、糖加到溶解好的琼脂液中，继续加热并搅拌，待糖c)调pH值：用酸度计或精密pH试纸测量所配制培养基的pH值，加0.1NHC1或d)分装：趁热将培养基分装于试

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