外周血细胞检验-白细胞检验（临床检验课件）

白细胞分类计数传统显微镜分类法01血液分析仪分类计数法02CONTENTS01传统显微镜分类法PartOne检测原理04结合白细胞计数结果，可间接求出每升血液中各种白细胞的绝对值02经Wright染色后03放置于显微镜下，按白细胞形态学特征逐个分别计数，得出各种白细胞百分率01将血液涂成薄膜质量保证技术误差0102质量考核与评价03形态识别01020304血涂片制备和染色观察部位：体尾交界处或片头至片尾的3／4区域

分类计数的范围和移动规律:“城垛式”

分类计数的白细胞数量：计数越多，误差越小技术误差注意事项1)观察全片2)计数异常和幼稚血细胞:①白细胞包括在白细胞分类的比值或百分率中。②幼稚红细胞以分类100个白细胞时见到幼稚红细胞的数量来报告。3)观察其他血细胞或成分：红细胞、血小板05全国临床检验方法学学术研讨会推荐的方案见表。

质量考核与评价

由于手工制备的血涂片细胞分布不均匀，分类计数结果变化大，很难对每张血涂片进行严格的质量控制。目前亦缺乏统一的质量控制方法，关键在于熟练操作技术，严格控制各个操作环节，尽量减少误差。形态识别杆状核和分叶核标准的不同，单核细胞与大淋巴细胞的鉴别、染色较差的涂片，脱颗粒的嗜碱性粒细胞与中性粒细胞的区分等。凡不能识别的细胞应归为“未能识别的白细胞”。参考值成人白细胞分类参考值

百分率(％)绝对值(×109／L)中性杆状核粒细胞1~50.04~0.5中性分叶核粒细胞50~702~7嗜酸性粒细胞0.5~50.05~0.5嗜碱性粒细胞0~10~1淋巴细胞20~400.8~4单核细胞3~80.12~0.8中性粒细胞增多1粒细胞2淋巴细胞3单核细胞4临床意义1.中性粒细胞增多白细胞总数与中性粒细胞(neutrophil，N)白细胞总数与中性粒细胞数量增多及减少的定义见表.

在外周血中，由于中性粒细胞占白细胞总数的50％一70％，临床意义基本一致。淋巴细胞、嗜酸性粒细胞等数量上的改变也会引起白细胞总数的变化。因此，还应具体分析。

1)中性粒细胞生理性增多：常不伴有白细胞质量的改变。年龄：1)生理性增多：日间变化：一日之间最高值与最低值之间可相差1倍。运动、疼痛和情绪的影响：如剧烈运动可使短时间内白细胞高达35X109／L，以中性粒细胞为主。当运动结束后迅即恢复原有水平。妊娠与分娩：分娩后2～

5d内恢复正常。其他：吸烟者白细胞的生理波动很大，30%以内波动多无意义，只有通过定时和反复观察才有意义。2)病理性：数量变化

核左移(shifttotheleft)：外周血中杆状核粒细胞增多或(和)出现晚幼粒、中幼粒、早幼粒等细胞时称为核左移。核右移(shihtotheright)：

中性粒细胞核分叶5叶以上者超过3％则称为核右移，常伴有白细胞总数减低。

核象变化

2)病理性增多：外周血白细胞>10X109／L

①反应性增多，可见于：

A、急性感染或炎症：为引起白细胞总数和中性粒细胞增多最常见的原因。球菌、杆菌、真菌、放线菌、病毒、立克次体、螺旋体、寄生虫等。增高程度与病原体种类、感染部位和程度以及机体的反应性等有关

B、类白血病反应：指机体在有明确病因的刺激下，出现白细胞数中度增高(<50Xl09／L)，多以成熟中性粒细胞增多为主，原始、早幼粒细胞增多少见(<10％)，常伴较明显的中性粒细胞中毒性改变，其他细胞均无明显变化。C.广泛组织损伤或坏死：严重外伤、手术创伤、大面积烧伤、冻伤以及血管栓塞(如心肌梗死、肺梗死)所致局部缺血性坏死等使组织严重损伤者，在12～36h内常见白细胞增高，以中性分叶核粒细胞增多为主。有无术后感染，与心绞痛鉴别。

D、急性溶血：缺氧及分解产物刺激E、急性失血：消化道大量出血、内脏破裂如脾破裂或输卵管妊娠破裂等，白细胞总数常在1～2h内迅速增高，可达(10～

20)X109／L，但此时的红细胞数和血红蛋白量仍可暂时保持正常范围，待组织间液吸收回血液或补充循环血容量后，才出现红细胞和血红蛋白减低。早期诊断内出血的参考指标。F、急性中毒：a、外源性中毒：化学物质或药物如汞、铅、安眠药急性中毒，生物毒素如昆虫毒、蛇毒以及植物毒素如毒蕈中毒。b、内源性中毒：如尿毒症、糖尿病酮症酸中毒、子痫、内分泌疾病危象等。G、恶性肿瘤：

非造血系统恶性肿瘤可出现持续性白细胞增高，以中性分叶核粒细胞增多为主。其机制可能为：①肿瘤坏死分解产物刺激②肿瘤细胞(如肝癌、胃癌等)促粒细胞生成因子。③恶性肿瘤骨髓转移，破坏骨髓调控作用等H、其他原因：见于类风湿性关节炎、自身免疫性溶血性贫血、痛风及严重缺氧应用皮质激素、肾上腺素、氯化锂等。

②异常增生性增多

A、白血病：B、骨髓增殖性疾病：包括真性红细胞增多症、原发性血小板增多症和骨髓纤维化症(也可包括慢性粒细胞白血病)等。本组疾病均系多能干细胞的病变引起，具有潜在演变为急性白血病的趋势。其特点为除了一种血细胞成分的主要增多外，常伴有其他一种或两种血细胞的增生，故常有中性粒细胞增多，白细胞数常在(10—30)X109／L。

(2)中性粒细胞减低(neutropenia)：

白细胞减低主要是中性粒细胞减低。粒细胞减低症(granulocytopenia)：中性粒细胞绝对值成人<

2.0X109／L,

儿童<1.5X109／L粒细胞缺乏症(agranulocytosis)：外周血白细胞<2.0X109／L,

中性粒细胞绝对值<0.5X109／L(2)中性粒细胞减低(neutropenia)：

(2)中性粒细胞减低(neutropenia)：

1)嗜碱性粒细胞增多(basophilia)：指外周血嗜碱性粒细胞浓度绝对值超过参考值的上限(>0.05×109／L)的一种征象

(2)嗜碱性粒细胞减少(basopenia)：多无临床意义。减少可见于过敏性休克、促肾上腺皮质激素或糖皮质激素应用过量以及应激反应等。3．淋巴细胞(lymphocyte，L)(1)淋巴细胞增多(lymphocytosis)：指外周血淋巴细胞绝对值增高成人：大于4.0×109／L；儿童：4岁以上大于7.2×109／L、

4岁以下大于9.0×109／L。

(1)淋巴细胞增多：(2)淋巴细胞减少(1ymphopenia)：指外周血淋巴细胞绝对值减低(成人<1.0×109／L)。凡中性粒细胞显著增高的各种病因均可导致淋巴细胞相对减少。(2)淋巴细胞减少(2)淋巴细胞减少

4．单核细胞(monocyte，M)

成人单核细胞占白细胞总数3％-8％。正常儿童稍高，平均为9％；2周内的婴儿可达15％或更多；妊娠中、晚期及分娩增多.骨髓释放入外周血的单核细胞为成熟的单核细胞，在血液中停留3—6d，即逸出血管进入组织或体腔内，经5—9d，发育为巨噬细胞，形成单核-巨噬系统，

单核细胞增多

白细胞计数检测原理（显微镜计数法）用白细胞计数稀释液(稀乙酸)，将血液稀释一定倍数并破坏成熟红细胞和固定白细胞充入改良牛鲍(Neubauer)计数板，在显微镜下计数一定范围内的白细胞数经换算求得每升血液中各种白细胞的总数。白细胞数=N/4×10×20×106/L【质量保证】1．计数误差(1)技术误差：规范、熟练的操作，仪器的校正、试剂的标准化和操作人责任心。1)器材：清洁、干燥，校准，合格试剂。2)标本要求：血液分析仪检测的标本要求及质量保证3)加盖玻片影响：WHO推荐采用“推式”法，此法较“盖式”法更能保证充液体积的高度为0.10mm。4)充池影响：①充池前充分混匀白细胞悬液，避免气泡。②充池应避免充液过多、过少、断续，避免气泡及充液后移动盖玻片。技数误差5)计数原则：计数压线细胞时，数上不数下,数左不数右。6)计数室内细胞分布要均匀：白细胞总数在正常范围内时，各大方格间的细胞数不得相差8个以上。2次重复计数误差不超过l0％。7)有核红细胞影响：外周血出现有核红细胞，可使白细胞计数结果偏高，须校正。

2.固有误差：主要是指计数域误差(fielderror)。是由于每次充池后血细胞在计数室内分布不同计数域误差变异系数(CV)可随计数的细胞数量增多而减小。

白细胞数量太少时(<3X109／L)8个大方格或缩小稀释倍数白细胞数量太多时(>15X109／L)稀释固有误差还应包括计数室和吸管的使用次数，即计数池误差(chambererror)和吸管误差

3)生理状态影响：运动、劳动、冷热水浴、酷热、严寒等常出现一过性白细胞增高；一日之内白细胞数最高值与最低值可相差1倍。另外，吸烟者白细胞总数平均较非吸烟者高30％。最好在固定检查时间。血涂片上WBC密度与WBC数量关系血涂片上WBC数：／HPWBC(×109／L)

2~44~74~67~96~1010~1210~1213~18

①成人：(4～10)×109／L②新生儿：(15～20)×109／L③6月～2岁：(11～12)×109／L参考区间＞10×109／L称白细胞增多(1eukocytosis)，＜4×109／L称白细胞减低(1eukopenia)。白细胞数在生理或病理情况下均可有变异。由于中性粒细胞占白细胞总数的50％～70％，其增高和减低直接影响白细胞总数的变化，中性粒细胞增减的意义与白细胞总数的增减的意义基本上是一致的。有时两者的数量关系也有不一致的情况，要具体情况具体分析。”“临床意义白细胞计数实验原理实验器材实验试剂操作步骤目

录CONTENTS计算参考值注意事项思考题实验原理用白细胞稀释液将血液按一定倍数稀释，同时破坏红细胞，再充入计数池，在显微镜下计数范围内白细胞数，换算求出每升血液中白细胞的数量试验器材、试剂显微镜、改良Neubauer血细胞计数板等试验器材试剂白细胞稀释液：