DB35∕T 2015-2021 猪瘟病毒抗体高敏荧光检测试剂卡制备及高敏荧光免疫分析操作规程　　

35DB35/T2015—2021猪瘟病毒抗体高敏荧光检测试剂卡制备及高敏荧光免疫分析操作规程ThepreparationofCSFVantibodyhypersensitivefluorescencedetectionreagentcardandoperatingproceduresforhypersensitivefluorescenceimmunoassay2021-09-28发布2021-12-28实施福建省市场监督管理局发布I 4 Ⅱ本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草本文件主要起草人：郑腾、张体银、章键、吴俊清、吴冠英、谢向机、张志灯、唐寰宇、林杰、1猪瘟病毒抗体高敏荧光检测试剂卡制备及高敏荧光免疫分析操作本文件规定了猪瘟病毒抗体高敏荧光检测试剂卡的制备及高敏荧光免疫分析技术免疫分析操作规NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技5.1.3恒温培养箱（20℃~25℃和37℃±1℃)。25.2.112-N-吗啡啉乙磺酸（M把硝酸纤维素膜粘贴在PVC底板上，采用划膜喷金机在硝酸纤维素膜上喷涂已经稀释成0.5mg/mL的山羊抗鸡IgY/IgG抗体形成质控线（C线喷涂已经稀释成1.0mg/mL的猪瘟病毒重组蛋白E2用封闭液（配制方法按照附录A的A.1规定）封闭硝酸纤维素膜30min，用10mmol/L磷酸（pH7.5，配制方法按照附录A的A.2规定）清洗硝酸纤维素膜30min，室温（20℃~25℃)干燥2h将50mg的高敏荧光纳米微球加入到5mL的2-N-吗啡啉乙磺酸缓冲液（0.1mol/L，pH7.0）加入10mg碳二亚胺和10mgN-羟基琥珀酰亚胺磺酸钠盐搅拌溶解，室温（20℃~25℃)反应30min闭，再加入5mL样品稀释液（配制方法按照附录A的A.4规定）保存（2℃~8℃)。将50mg的高敏荧光纳米微球加入到5mL的2-N-吗啡啉乙磺酸缓冲液（0.1mol/L，pH7.0）加入10mg碳二亚胺和10mgN-羟基琥珀酰亚胺磺酸钠盐搅拌溶解，室温（20℃~25℃)反应30min方法按照附录A的A.3规定）重悬，加入2mg透析过的猪瘟病毒重组E2蛋白，在室温（20℃~25℃)下酸盐缓冲溶液封闭，再加入5mL样品稀释液（配制方法按照附录A的A.4规定）保存（2℃~8℃)。将高敏荧光纳米微球标记的鸡IgY和猪瘟病毒重组E2蛋白分别稀释成0.1μgPVC底板上从左到右依次粘贴样品垫、标记物垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，样品垫的右端搭在标记待检血清在2℃~8℃下可保存48h，在-20℃条件下可长期保存。7.2.2待检血清和猪瘟病毒抗体高敏荧光检测试剂卡试验前应平衡至室温（20℃~25℃)。将平衡至室温的猪瘟病毒抗体高敏荧光检测试剂卡置于干净平坦的台面上，在加样孔内4），5磷酸二氢钾（KH2PO4，分析纯），0.2g；磷酸氢二钠（Na2HPO4•12H2O，分析纯），2.9g；氯化钠（NaCl，分析纯），8.0g；氯化钾（KCl），加水至1000mL，溶解后，调节pH值至A.210mmol/L磷酸盐缓冲液（10磷酸二氢钾（KH2PO4，分析纯0.2g；磷酸氢二钠（Na2HPO4•12H2O，分析纯2.9g；氯化钠（NaCl，分析纯），8.0g；氯化钾（KCl，分析纯），0.2g。加水至1000mL，溶解后A.3.20.05mol/L硼砂（A.3.3溶液混合取A.3.1溶液87.50mL和