病毒性传染病的检测与预防

病毒性传染病的实验室诊断概述标本的采集和处理病毒性疾病病原学诊断病毒性疾病的诊断辅助检查病毒性疾病诊断活组织检查内容一、概述大多数感染性疾病都是由病毒引起的，已经证实对人有致病性的病毒达500余种。近年来病毒的诊断技术迅速发展，已逐渐形成病毒学研究的一支重要分支­——诊断病毒学。由于大多数病毒尚无有效治疗药物，实验室诊断已成为控制病毒流行和蔓延的重要手段。

随着病毒学研究的不断深入，病毒病的诊断方法已由最初单一的分离病毒发展到病毒血清学、分子生物学、电子显微镜技术等更加敏感、特异、简便的诊断方法。（一）病毒病诊断的一般原则

病毒病诊断技术的发展大致可分为病毒分离、经典血清学、现代免疫学和分子病毒学四个阶段。

1、病毒的分离

2、经典血清学方法

3、现代免疫学技术

4、分子生物学技术

包括中和试验补体结合试验红细胞凝集试验等。包括ELISA固相放射免疫试验IFA 酶免疫学试验免疫胶体金试验和WB此外还有免疫电泳、免疫粘连试验等。 包括核酸杂交凝胶电泳技术PCR基因芯片核苷酸序列测定

（二）诊断标志的选择

诊断标志的选择是指根据病毒的生物学性状、潜伏期的长短，以及机体的免疫应答，选择检测病毒抗原、抗体或病毒核酸等作为诊断的指标。

1、对潜伏期较短的病毒，由于机体未能就病毒感染产生相应的抗体，因此，应选择检测病毒颗粒或病毒性抗原及病毒核酸。

2、对可在机体内形成持续感染或潜伏感染的病毒，如单纯疱疹病毒感染等，可检测病毒双份血清的IgG抗体滴度有无4倍改变，或检测病毒核酸。

3、对可由多种病毒感染引起的同一症状，应同时检测几种相关病毒抗原或抗体，以免延误诊断。

4、对病因不明，可能有新病毒感染时，应根据感染部位采集相应的标本做病毒分离，以便发现新的病原，同时应采集双份血清来确定分离病毒是否为病原病毒。

5、对多型别的病毒可检测属特异性病毒抗原或抗体进行诊断，必要时再进一步分型。

6、对潜伏期10d以上的病毒感染，检测特异性IgM抗体作感染指标。发病初期检测病毒抗原是病毒性疾病快速诊断的最佳方法。检测病毒IgM抗体，对病毒病进行早期快速诊断，证明是一种简便、实用的方法。特别是酶联免疫吸附试验已成功地应用于检测麻疹病毒，风疹病毒，流感病毒，流行性腮腺炎病毒，乙型脑炎病毒，出血热病毒，甲、乙型肝炎病毒，CMV，EBV等的特异性IgM抗，效果较好。二、标本的采集和处理

（一）标本的选择

一般检测病毒抗体应采集外周血分离血清（或血浆），对可能的神经系统感染还应采集脑脊液做特异性抗体或抗原检测；少数病毒感染还可以采集唾液检测病毒抗体（如HAV、HIV）。

进行病毒分离或直接检测病毒应视部位而决定采集何种标本。呼吸道感染一般采集鼻拭子、咽拭子含漱液等；肠道感染可采集粪便、肛拭子、直肠拭子；出现疱疹的可采集疱疹液；其他病毒如巨细胞病毒（CMV）、风疹病毒等还可采集尿标本。此外，如眼分泌物、精液，各种活检、尸检标本等可以作为病毒检测的标本。（二）不同标本的采集和用途

1、血清学标本

用于病毒特异性抗体的检测。

如检测特异性IgM抗体可采集单份急性期血清，特异性IgG抗体检测应采集急性期和恢复期双份血清，急性期标本采集越早越好（可延于发病后1周），恢复期血清标本则于发病后2周或更迟一些采集。采集血清标本时取静脉血2.0～3.0ml，不加防腐剂或抗凝剂，4℃保存，分离血清后可于－20℃保存数年至数十年。

2、粪便标本

用于病毒分离或病毒抗原、核酸的检测。取5～10g粪便置于灭菌的带盖玻璃瓶或蜡纸盒内，采集时间越早越好，一般不能迟于发病后7～10d。

3、尿液标本

取新鲜尿液10～20ml置灭菌玻璃瓶内，可用CMV的分离和检测，有时也用于风疹病毒和腺病毒的检测。发病时采集，可采集2～3次以增加检出机会。

4、鼻拭子和咽拭子标本用于呼吸道感染病毒的分离。用干棉拭子准确地擦拭患者的鼻咽部后，立即浸泡于含2～3ml样品保存液的灭菌试管中，标本采集不能迟于发病后5d。

5、含漱液标本

用于病毒分离。

6、唾液标本用于病毒分离或抗体检测，用灭菌平皿或广口瓶留取唾液5～10ml，或用棉拭子沾两颊黏膜及舌底擦拭留取。

7、脑脊液标本

用于病毒分离或抗体检测。分离病毒时取样不迟于发病后7～10d，无菌取样1～2ml。用于病毒的分离或直接检出。将棉拭子以生理盐水蘸湿后挤干，在眼结膜部取分泌物后，浸于2～3ml保存液中。

8、眼拭子标本

9、疱疹液标本

用于病毒的分离或直接检出，在出疹后3d内采集，将疱疹表面用生理盐水轻轻冲洗，然后用注射器或棉拭子采集疱疹液。

10、抗凝血液标本

用于病毒分离，无菌试管中加1/1000肝素1ml，抽血9ml。

11、各种活检和尸检标本

用于病毒的分离或直接检出，用带盖无菌玻璃瓶留取。尸检标本应尽早采集，最迟不超过死后24h，用于病毒分离时应在死后3～6h内采取。

各种标本采集后应立即送实验室处理，否则应超低温冷冻保存。三、病毒性疾病病原学诊断

病毒性疾病的诊断主要依靠病原学诊断。近年来，除了传统的诊断方法，如血清学、病毒分离外，分子生物学方法在病毒性疾病的诊断中得到了广泛应用。（一）血清学诊断技术

所有的病毒感染均可引起机体的体液免疫反应，这种反应常可以用于诊断目的。不同病毒所引起体液反应的差别很大，有些病毒诱生的抗体的中和抗体，多数病毒感染的控制主要依赖于T细胞反应，抗体的检测仅可作为即往感染的标志，并且常规的抗体检测方法也不能区分IgM和IgG型免疫反应。这种情况下，血清转换或恢复期与急性期相比（双份血清的间隔时间为10～14天），抗体效价有较明显的上升（一般≥4倍），对病毒感染有参考价值，但这种诊断通常是回顾性的，无早期诊断价值。在血清学试验中，经典是方法有中和试验补体结合试验红细胞凝集试验和红细胞凝集抑制试验红细胞吸附试验和红细胞吸附抑制试验

免疫荧光技术间接血凝试验免疫粘连血凝试验酶免疫检测酶联免疫吸附试验免疫印迹免疫胶体金标记技术固相放射免疫测定等广泛应用于测定病毒的抗原和抗体1.中和试验

中和试验是型特异性抗体反应，它是原理是特异性的中和抗体与相应的病毒结合后，使病毒不能吸附于敏感细胞，失去感染的能力，中和抗体在机体内存在的时间比较长，又能用中和试验鉴定病毒的型别。中和试验的主要用途：①鉴定病毒；②分析病毒抗原的性质；③测定免疫血清的抗体效价和疫苗接种后的效果；④测定病人血清中的抗体，用于诊断病毒性疾病。2.补体结合试验

补体结合试验是属（族与组）特异性反应。它的原理是，特异性病毒抗原和相应的抗体被结合形成免疫复合物能结合补体。因此，加定量的补体于抗原抗体的反应系统中，补体被结合，不再以游离的形式存在，此时，如再加入另一抗原抗体系统（羊红细胞和溶血素），则后者因缺乏游离的补体参与其溶血反应，结果不溶血，称为阳性反应。补体结合试验补体结合试验常用于以下目的：①流行病学调查；②临床病毒感染的诊断；③疫苗使用后人群抗体调查；④检测病毒抗原，鉴别哪一属病毒（鉴定病毒）。3.凝集试验

采用已知颗粒性抗原与相应抗体特异性结合，在有适量电解质存在的环境中，在一定时间后出现肉眼可见的凝块。包括直接、间接凝集试验及直接血液凝集试验。血凝试验血凝抑制试验4.沉淀试验

沉淀试验是有抗体与可溶性小体积抗原结合，再由抗原抗体复合物相互凝集形成小颗粒的沉淀物。具体的方法有：①单向免疫扩散；②双向免疫扩散③对流免疫电泳等。常用于检测IgM、IgG、IgA型免疫球蛋白的含量及分型检查及病毒的抗体检测。5.免疫荧光技术

RNA病毒一般在细胞浆内复制，所以在细胞浆内有荧光颗粒，如疱疹病毒、流感病毒，开始在细胞核内显荧光，随后在细胞浆内也显荧光。有些荧光素（如异硫氰酸荧光黄）能和抗体球蛋白分子结合，并且不丧失抗体的活力，仍能和相应的抗原形成免疫复合物。借助于荧光显微镜，能观察到细胞内发荧光是病毒抗原和存在是位置。

免疫荧光直接法间接法直接法是将荧光素标记在病毒特异性IgG抗体上，标记抗体直接与固定在载玻上的细胞内病毒结合，然后在荧光显微镜下观察结果（型特异性反应）。间接法是用标记了荧光素的抗原免疫球蛋白IgG的抗体（抗抗体），检测抗体与病毒抗原结合物。由于免疫球蛋白分子能结合多个荧光素标记的抗免疫球蛋白分子，所以间接法比直接法敏感5～10倍。间接免疫荧光试验抗原抗体荧光标记抗抗体原理：6．免疫酶标试验

用于普通显微镜观察，染色标本能长期保存，一种较特异、快速和简便的方法，这种方法曾用于检测培养细胞中的病毒抗原和组织切片、印片细胞中的病毒抗原。7．酶联免疫吸附试验

ELISA是目前应用最广泛的病毒抗原、抗体检测技术，ELISA分以下几类。

（1）间接法ELISA

（2）双抗体夹心法ELISA

（3）双抗原夹心法ELISA

（4）双夹心法ELISA

（5）竞争法ELISA

（5）捕获法ELISA

（7）酶抗酶法ELISA（8）生物素－亲和素系统用于检测特异性病毒抗体。将病毒抗原包被在固相载体表面，加入待检测血清后，如待检血清含有相应抗体，形成抗原抗体复合物，洗涤后加入酶标记抗人免疫球蛋白。洗涤后加入相应底物显色，测OD值，OD值的大小与待检血清中抗体含量成正例。间接法ELISA用于检测病毒抗原。将特异性抗体包被在固相载体表面，加入待检标本，待测抗原与固相载体表面的抗体形成抗原抗体复合物，洗涤后加入酶标记的特异性抗体，温育反应使之与抗原结合，洗涤后加入底物显色，测OD值。双抗体夹心法ELISA将双抗体夹心法ELISA中的包被物和标记物改为病毒抗原，即可用于病毒抗体的检测。

双抗原夹心法ELISA

用于检测病毒抗原。所用的两种特异性抗病毒必须来自不同动物，一种包被于固相载体，待测抗原与之相结合后，再与第二种抗原病毒抗体形成双抗体夹心免疫复合物，然后加入抗第二种动物抗体的酶标记抗体，经保温、洗涤后，加底物显色。双夹心法ELISA用于检测病毒抗原或半抗原，将特异性抗体包被在固相载体表面，同时加入待检抗原和酶标记抗原，对照孔只加酶标记抗原，保温，待检抗原和酶标记抗原竞争性与包被抗体结合，洗涤后加入底物显色。竞争法ELISA检测病毒特异性IgM或IgA等分，用于病毒病的早期诊断。将抗人IgM（μ链特异性）或抗人IgA抗体吸附于固相表面，然后加入已知的特异性抗原进行反应，再加入酶标记的特异性抗体，形成大的免疫复合物，加入底物显色后，测得的OD值与特异性IgM或IgA抗体含量成正比。捕获法ELISA

酶联免疫吸附试验酶标记登革病毒单抗与登革病毒复合物人IgM抗体抗人IgM单克隆抗体原理：抗原－人血清（待检标本）－兔抗人球蛋白－羊抗兔球蛋白－兔抗酶免疫血清－酶－底物。

酶抗酶法ELISA1个生物素分子可以结合4个亲和素分子，用生物素代替酶标记抗原或抗体，然后再与酶标记亲和素结合，或通过亲和素与酶标记生物素结合。该方法较普通ELISA更为敏感。

生物素－亲和素系统

8．免疫印迹技术

将蛋白电泳和酶免疫技术结合使用的一种方法，可用于病毒抗原和特异性抗体的检测。WB原理将已知抗原经聚丙烯酰胺（或琼脂糖）电泳后，转印于硝酸纤维膜（NC膜）作为固相抗原，再进行类似ELISA的酶免疫反应。待测病毒抗原电泳后转印至NC膜，用已知特异性抗体鉴定或检测病毒抗原。9．免疫胶体金标记技术

基于特异性的抗原抗体反应，但用胶体金作标记物，可用肉眼直接观测结果。胶体金本身带有紫红色作为标志，以已知抗原或抗体包被固相载体（如NC膜等），加待测标本，如果标本中有相应抗体（或抗原）则与包被抗原（或抗体）结合，然后加胶体金标记的第二抗体（或病毒抗体）。对照线，喷涂有兔抗羊IgG抗体IgM线，喷涂有抗人IgM单克隆抗体IgG线，喷涂有抗人IgG单克隆抗体样品垫，含纯化的重组1～4型登革病毒E蛋白、金标羊IgG抗体和金标抗登革病毒单克隆抗体（抗E蛋白）胶体金试验操作步骤滴3滴缓冲液

干净试管

操作步骤干净试管

加入1μl待检血清

操作步骤干净试管

放入测试条

操作步骤015静置15min

结果判断：对照线IgM线IgG线IgM阴性IgG阴性IgM阳性IgG阴性IgM阴性IgG阳性IgM阳性IgG阳性试剂失效

10.放射免疫测定（RIA）

放射性核素标记的抗体或抗原具有高度的示踪敏感性，同时不改变其免疫学反应的特异性。当其与待测抗原或抗体结合后，通过测定放射性强度即可达到定性或定量检测的目的。RIA可分为液相法和固相法，也可分为双抗体夹心法双抗原夹心法竞争法抑制法等

RIA灵敏度达到ng～fg水平，并有高特异性、精确性、样品用量少易规范化和自动化等优点。但缺点是需要特殊仪器，有一定的放射性危害。11．全血凝集试验

原理是以化学方法将抗人红细胞单克隆抗体与病毒抗原（或抗体）结合，检测血液标本中的抗体（或抗原），血液标本需加抗凝剂，将标记物与血液混合后，若标本中存在相应抗体（或抗原），由于标记物能同时与病毒抗体（或抗原）和红细胞结合，而使红细胞发生凝集。（二）病毒的分离

1．动物试验

根据不同的实验目的、实验动物种类和接种材料，往往需要采用不同的接种途径：皮下接种皮内接种静脉接种腹腔接种脑内接种

2．鸡胚

鸡胚培养是较早用于病毒分离培养的技术之一，从1902年Centanni首次应用鸡胚培养鸡瘟病毒至今。在痘类病毒、疱疹病毒、粘液病毒等研究中仍起着重要作用。鸡胚培养用于：病毒分离鉴定疫苗生产抗原制备病毒性质及抗病毒药物研究等方面。接种途径包括：绒毛囊膜接种尿囊腔接种羊膜腔接种卵黄囊接种

3．组织培养

组织培养包括组织块培养和细胞培养。是指将机体组织或细胞，在体外模拟机体内生理条件，使之生存生长。目前一般指细胞培养，应用于病毒分离的主要是单层细胞培养。细胞培养分为：

（1）原代细胞培养

（2）传代细胞系

（3）二倍体细胞株

（1）原代细胞培养

由新鲜组织制备的单层细胞，一般只能传2～3代。

（2）传代细胞系

由原代细胞连续传代或由肿瘤细胞培养而来，HeLa（子宫颈癌）细胞、Hep-2（人喉上皮癌）细胞、A549（肺癌）细胞、Vero（传代非洲绿猴肾）细胞等。（3）二倍体细胞株

保持二倍体特性，一般能传40～50代，但代数高的细胞其敏感性较差。我国常用于分离鉴定病毒的原代细胞有:人胚肾人胚肺人胚肝人胎盘羊膜鸡胚猴肾地鼠肾地鼠肝等细胞培养方法:静置培养悬浮培养旋转培养混合培养克隆培养病毒的检测主要通过:观察细胞病变细胞吸附试验中和试验荧光染色等方法

大多数病毒增殖均会引起细胞病变，称为致细胞病变作用（CPE）。有些病毒在细胞内增殖不产生CPE，但分泌至细胞表面的病毒对某些红细胞有吸附现象。中和试验是鉴定病毒最可靠的方法之一。用荧光染色，有病毒生长，在荧光显微镜下可见病毒生长部位显荧光。病毒干扰现象电镜观察补体结合试验血凝试验等检测细胞培养物中有无病毒增殖。（三）分子生物学诊断技术

分子生物学诊断技术在病毒学领域发挥着重要作用，无论在流行病学调查、临床诊断还是科学研究，都显示出其重要性。常用的分子生物学诊断技术主要有分子杂交技术凝胶电泳技术PCR基因芯片核酸序列分析等1．分子杂交技术

基于DNA双螺旋分子的碱基互补原理设计的，核酸双螺旋分子在高温和变性剂存在的情况下可以解链成单链分子，在低温时又可以依据碱基互补原则复性形成双链，如果在复性时加入标记的探针分子，探针与待测核酸分子中相同序列互补形成带标记的双链分子，利用放射自显影或其他方法示踪，当样品存在与探针相同序列的核酸分子时，即显阳性结果。病毒学检测中常用的杂交方法有：Southern杂交Northern杂交斑点杂交分支链DNA杂交技术原位杂交和液相杂交等方法。可直接用于病毒核酸检测，又可用于病毒核酸PCR扩增产物的检测。

斑点杂交：将病毒核酸点样在NC膜或尼龙膜上，直接进行杂交，方法简便。

转印杂交：将样品经凝胶电泳分离后转印至NC膜上，然后进行杂交。又分为DNA印迹（Southernblot）杂交和RNA印迹（Northernblot）杂交。

原位杂交：主要用于细胞内病毒的检测和定位。是将细胞或组织切片固定于载玻片上，保持细胞的良好形态结构，经蛋白酶K处理增加细胞膜和核酸的通透性，探针在合适条件下与细胞内的病毒核酸杂交。2．凝胶电泳技术

凝胶电泳技术是常用的分离鉴定核酸、蛋白质等生物大分子方法之一，可直接用于如轮状病毒、呼肠孤病毒等病毒的检测和病毒PCR产物检测等。可分为琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳及DNA限制性内切酶酶切分析。

琼脂糖凝胶电泳：以琼脂糖作载体，常采用水平电泳分离、鉴定核酸。聚丙烯酰胺凝胶电泳：适用于蛋白质和分子量在1kb以下的核酸分离鉴定，分连续和不连续电泳。

DNA限制性内切酶酶切分析：提取核酸后，用限制性内切酶进行酶切后电泳，根据电泳的核酸带图进行诊断和分析。3．聚合酶链反应

PCR技术原理：PCR是一种体外酶促合成特异DNA片段的技术由三个步骤反复的热循环构成：高温变性、低温退火和适温延伸PCR技术原理：高温（95℃）下，靶DNA双链变性成为两条单链DNA模板低温（55℃）下，两条人工合成的寡核苷酸引物与互补的单链DNA模板结合，形成部分双链Taq酶在最适温度（72℃）下，以引物3’端为合成的起点，以单核苷酸为原料，沿模板以5’→3’方向延伸，合成DNA新链。PCR技术原理：每一双链DNA模板，经过一次解链、退火、延伸三个步骤的热循环后就成了两条双链DNA分子。如此反复，每一次循环所产生的DNA均能成为下一次循环的模板，每一次循环都使两条人工合成的引物间的DNA特异区拷贝数扩增一倍，PCR产物得以2n的指数形式迅速扩增。经过25～30个循环后，理论上可使基因扩增109倍以上，实际上一般可达106～107倍。PCR具备了特异、敏感等许多优点，特别适用于难以分离培养和其他方法不易检测的病毒的诊断。

常用的PCR技术有:巢式PCR、半巢式PCR、RT－PCR、免疫PCR、定量PCR、RNA捕获PCR、竞争PCR、原位PCR、多重PCR、单管PCR等RealtimeRT-PCR原理：TaqMan探针标记有荧光报告基团和荧光淬灭基团与扩增片段有互补的特异核苷酸序列正常情况下，报告基团发出的荧光被淬灭基团吸收而检测不到荧光当两者分开后，报告基团发出的荧光不能被淬灭基团吸收，因而可检测到荧光游离出来的报告基团量越多，荧光的强度越强PCR时所用的DNA聚合酶常常带有5’→3’外切酶活性，在延伸阶段可把探针切断，使荧光报告基团和荧光淬灭基团分开，于是荧光得以检测。每个TaqMan

探针被切断，对应一个荧光基团的放光，也对应一个扩增片段的产生，所以，这又大大提高了定量的灵敏度。任何时间点都可以检测扩增片段的量，也就是“Realtime”的意义之所在。TaqManRealtimePCR原理图

结果判断5、基因芯片DNA芯片技术是近年出现的DNA分析技术，具有高度并行性、多样性、微型化和自动化等特点，主要用于测序、转录情况分析、基因诊断与基因药物的设计和感染性疾病的诊断。但由于目前基因新片技术尚不够完善，其价格昂贵，对操作的要求高，使其应用范围受到很大限制。6、核酸序列测定

很多情况下，需要了解病毒基因序列以作进一步的研究。如了解克隆的新病毒序列、研究病毒基因组突变、确定病毒耐药基因位点、了解病毒编码基因等。一些情况下，还可以对病毒进行分型。（四）病毒性疾病的电子显微镜诊断在某些病毒感染早期的标本中，可以直接检出病毒颗粒，而且从形态学上可以鉴别病毒的种类，特别是对目前尚难分离培养的病毒，甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、轮状病毒颗粒。

电镜的主要作用为：

1、发现和鉴别新病毒。

2、研究病毒引起的组织和细胞病理改变，以及病毒在细胞内的繁殖动态和形态发生。3、研究病毒的超微结构。4、确定某些疾病的病毒病因。常用的电镜技术包括：超薄切片标本电镜观察、负染标本电镜观察和免疫电镜技术。

四、病毒性疾病的诊断辅助检查

辅助检查是临床疾病诊断中的重要部分，在病毒性疾病是诊断中也有重要地位。（一）三大常规检查

1．血常规检查2．尿液检查3．粪便检查1．血常规检查微小病毒B19对骨髓红系组细胞具有亲嗜性，引起红细胞生成障碍，导致暂时性再生障碍性贫血危象，但多在7～10天后恢复。如艾滋病、慢性乙型肝炎合并肝硬化等，也可伴有贫血。而病毒性感染是一般伴有白细胞总数减少，淋巴细胞增多。也有些病毒性疾病出现白细胞总数明显增高，如流行性出血热、流行性乙型脑炎等。某些病毒性疾病，如流行性出血热、登革热等可出现血小板计数明显减少。但大多数病毒性的诊断不需要进行骨髓检查。2．尿液检查急性病毒感染时常因高热而引起蛋白尿。肾综合征出血热时肾损害较为严重，尿中可出现蛋白质、红细胞、上皮细胞、管型等。急性黄疸型病毒性肝炎时，尿胆原、尿胆红素均呈阳性。人巨细胞病毒感染后，可在尿中查见含该病毒包涵体的上皮细胞。3．粪便检查病毒性胃肠炎时常为水样便，镜检基本正常或偶有少量白细胞。

（二）生化检查

（1）血清总蛋白和白蛋白/球蛋白（A/G）比值

（2）蛋白电泳

（3）甲胎蛋白（AFP）测定（4）

血氨检查1．蛋白代谢检查AFP是肝癌的标记蛋白，急性病毒性肝炎、慢性活动性病毒性肝炎、肝硬化AFP皆可增高，但多在300ug/L以下。

血氨检查在病毒性肝炎、肝昏迷时是常用是生化指标。2．脂类的检查作为重型病毒性肝炎预后的指标。3．胆红素代谢的检查4．血清酶学检查5．肾功能检查

如肾综合征出血热时，常伴有肾功能损害。6．电解质、酸碱平衡检查很多病毒性疾病可引起发热、呕吐、腹泻、肾功能损害，可导致电解质、酸碱平衡失调。7．血气分析病毒性肺炎有时可导致呼吸衰竭，此时需要检查动脉血气分析，以及调整治疗方案。（三）免疫功能检查

1．体液免疫功能检查

B淋巴细胞计数免疫球蛋白测定

补体测定自身抗体测定2．细胞免疫功能检查

迟发性皮肤过敏试验T淋巴细胞记数

T细胞功能检测

NK细胞活性检测

T细胞亚群检测（四）脑脊液检查

脑脊液（cerebrospinalfluid，CSF）中枢神经系统病毒感染时，CSF的颜色、透明度一般无变化，蛋白质含量可仅有轻度增加，脑脊液中细胞数轻度增加，以淋巴细胞为主。确诊需依靠CSF的病毒分离，免疫学检查和血清学检查。（五）脱落细胞学诊断

鼻咽部粘膜脱落细胞学检查，对一些呼吸道病毒感染的诊断有较重要的参考价值。鼻腔试子直接涂片，用负压吸引法经鼻饲管从鼻咽部采集分泌物，经离心后上清液可行病毒分离、抗原或核酸检测，而沉淀物用于涂片。

对于一些可伴发肾损害的全身性病毒感染（如肾综合征出血热、CMV感染、麻疹），尿细胞学检查对诊断有一定的帮助。在肾综合征出血热病程早期是尿沉渣涂片中，可检出融合多核细胞。急性期麻疹患者可检出多核巨细胞和胞核和胞浆内嗜酸性包涵体，CMV患者尿中检出嗜酸性包涵体的细胞。（六）影象学检查

影象学检查是病毒性疾病诊断的重要组成部分，可对病毒感染的部位、范围、严重程度及预后提供参考。1．X线检查2．B型超声检查3．CT检查4．核磁共振成像（MRI）检查

五、病毒性疾病诊断活组织检查

活组织检查不仅可作为病毒性疾病诊断的辅助手段，而且对疾病的预后、疗效的判断也有价值，如肝脏穿刺活检，已广泛用于慢性病毒性肝炎的诊断和鉴别诊断、预后的判断、治疗效果的考核。活组织检查包括：1．肝脏穿刺活检2．淋巴结穿刺活检在病毒性疾病的诊断中，应用淋巴结穿刺活检的主要是排除淋巴结核、淋巴瘤、淋巴结转移性恶性肿瘤及淋巴结炎。淋巴结标本可用于电镜检查，以发现微小病毒B19、麻疹病毒、逆转录病毒，但临床上较少用。3．肺活组织检查偶尔才用经气管、导管刷和经皮肺穿刺抽吸获取标本，用于病毒培养或电镜检查。由于用常规检查方法即可诊断大多数呼吸道病毒感染，故极少应用肺活组织检查。以上活检标本除应用于形态学、组织学检查之外，还可用于免疫组织化学、原位PCR检测。

总之，病毒病的实验室诊断方法复杂，病毒种类繁多，在众多的病毒学检测方法中，应用于病毒病的诊断时，可根据实验室条件和具体情况等合理选择，将有助于临床对病毒性疾病的确诊。对于疑难病例往往需要选择多种方法检测，才能达到目的。学校常见传染病

的发现与预防控制

背景近年来，突发公共卫生事件频发并呈上升趋势，突发事件以传染病疫情居多，而学校又是突发传染病疫情发生最重要场所，因此做好学校多发传染病的预防控制工作，对减少突发公共卫生事件的发生、保证社会的和谐安宁、保护广大青少年儿童的身体健康、维护学校的正常教学秩序意义非常重大。近三年全国突发公共卫生事件发生概况

2006年全国突发公共卫生事件总体概况

（含未分级事件）

时间事件起数报告病例数报告死亡数200653711630618452005232396922

772升降比(%)+130.32+68.24+6.462006年全国Ⅳ级以上突发公共卫生事件分级情况合计重大较大一般起数％起数％起数％起数％传染病215978.121477.786121.25208484.75食物中毒33512.1200.0015353.311827.40职业中毒471.7015.563712.8990.37其它中毒381.3700.00124.18261.06环境因素事件331.1900.0020.70311.26群体性预防接种反应100.36316.6772.4400.00群体性不明原因疾病100.3600.00103.4800.00其它公共卫生事件1324.7800.0051.741275.16合计2764100.0018100.00287100.002260100.002006年Ⅳ级以上学校突发公共卫生事件概况2006年事件数：1916起，占全部突发公共卫生事件总数的69.3%病例数：110957人，占全部突发公共卫生事件总病例数的77.0%死亡数：20人，占全部突发公共卫生事件总死亡数的4.6%与2005年相比事件数：上升132.5%病例数：上升105.2%死亡数：下降47.4%以乡镇中、小学为主乡镇中小学报告1228起(64.05%)县级以下1493起，占78%2007年全国突发公共卫生事件总体概况

（含未分级事件）时间事件起数报告病例数报告死亡数2007810613153199120065371163061

845升降比(%)+50.92-19.34+17.282007年全国Ⅳ级以上突发公共卫生事件分类情况事件类别2007年2006年较2006年升降比(%)事件数病例数死亡数事件数病例数死亡数事件数病例数死亡数传染病20538522946225611834294-9.00-27.98-51.06食物中毒3261069225933414105205-2.40-24.2026.34职业中毒6436282472717436.1733.5810.81环境因素事件562027663211942875.0069.77135.71其它中毒26436394051025-35.00-14.5156.00预防接种事件91880101763-10.006.82-100.00群体性不明原因疾病21431027541-80.00-99.49200.00医源性感染事件1180000---放射性辐照事件100000---其它事件311390123568757-11.43-79.7871.43合计25691003565072764144227437-7.05-30.4216.022007年Ⅳ级以上学校突发公共卫生事件概况2007年事件数：1888起，占全部突发公共卫生事件总数的73.5%，病例数：78246人，占全部突发公共卫生事件总病例数的88.0%死亡数：17人，占全部突发公共卫生事件总死亡数的3.4%与2006年相比事件数：下降1.5%病例数：下降29.5%死亡数：下降15.0%以乡镇中、小学为主乡镇中小学报告1235起(65%)县级以下1504起，占80%2005～2007年全国Ⅳ级以上传染病事件

报告起数前10位病种比较200520062007病种病种病种1流行性腮腺炎（350）

水痘（847）

水痘（836）2流行性感冒（249）

流行性腮腺炎（570）

流行性腮腺炎（361）3麻疹（180）

流行性感冒（354）

风疹（270）4霍乱（108）

乙脑（210）霍乱（101）5水痘（94）

风疹（136）

流行性感冒（94）6细菌性痢疾（81）

霍乱（98）

急性出血性结膜炎（76）7其它感染性腹泻病（48）

细菌性痢疾（84）

其它感染性腹泻病（63）8人感染猪链球菌病（40）麻疹（75）

麻疹（53）9甲肝（35）

其它感染性腹泻病（67）

甲肝（52）10狂犬病（34）合计：1219甲肝（45）合计：2486

细菌性痢疾（32）合计：19382008年福建省突发公共卫生事件概况通过各种途径上报78起以传染病类为主，占72.97%，主要是水痘（21.62%）、霍乱（16.22%）、流感（13.51%）等疾病。主要发生在学校和村落，分别占56.76%（21/37）和21.62%（8/37），学校又以小学为主，占37.84%（14/37），罹患人数占55.58%（897/1614），其它学校还有中学、幼儿园、其它学校等。我市近3年学校突发传染病疫情的发生情况

1、2006年全市通过电话、传真、网络等各种途径报告的各种传染病爆发事件或苗头事件17起，发生在学校及托幼机构的13起，占77％；

2、2007年全市通过电话、传真、网络等各种途径报告的传染病突发事件或苗头事件11起，全部发生在学校及托幼机构。

3、2008年全市通过电话、传真、网络等各种途径报告的传染病爆发疫情事件或苗头事件14起，全部发生在学校及托幼机构。4、2006一2008年我市通过突发公共卫生事件报告管理信息系统报告的突发公共卫生事件共12起，除4起为发生在企业、家庭的食物中毒外，其余8起均为发生在学校的传染病事件，其中水痘7起，腮腺炎1起。5、2008年我市通过电话、传真、网络报告的发生在学校的突发传染病爆发疫情或聚集性病例14起，其中水痘4起、流感样病例4起、手足口病3起、流行性腮腺炎1起、风疹1起、流行性急性出血性结膜炎1起。我市学校常见的传染病疫情﹡水痘﹡流感（含甲型H1N1流感）﹡流行性腮腺炎﹡手足口病﹡风疹﹡麻疹﹡其他感染性腹泻﹡急性出血性结膜炎（红眼病）一、常见传染病的识别与发现主要通过了解常见传染病的临床表现来识别和发现传染病。水痘典型水痘:皮疹出现前24小时可呈现前驱症状如低热,不适,厌食等,亦可见猩红热样或麻疹样前驱疹,但很快消失,幼儿常无前驱期。皮疹特点：①分批出现红色斑疹或斑丘疹迅速发展为清亮卵圆型泪滴状小水疱，周围有红晕，无脐眼，经24小时水疱内容物变为浑浊，水疱易破溃，疱疹持续3~4天，然后从中心开始干缩，迅速结痂，在疾病高峰期可见到丘疹、新旧水疱和结痂同时存在;②皮疹分布呈向心性，集中在皮肤受压或易受刺激处，开始为躯干，以后至面部、头皮，四肢远端较少，瘙痒感重;③粘膜皮疹可出现在口腔结膜生殖器等处易破溃形成浅溃疡流行性感冒典型流感起病急：潜伏期为数小时~4天，一般为1~2天；高热，体温可达39~40℃，伴畏寒，一般持续2~3天；全身中毒症状重，如乏力、头痛、头晕、全身酸痛；持续时间长，体温正常后乏力等症状可持续1~2周；呼吸道卡它症状轻微，常有咽痛，少数有鼻塞、流涕等；少数有恶心、呕吐、食欲不振、腹泻、腹痛等。有少数患者以消化道症状为主要表现。老人、婴幼儿、有心肺疾病着者或接受免疫抑制剂治疗者患流感后可发展为肺炎。

流行性腮腺炎是由腮腺炎病毒侵犯腮腺引起的急性呼吸传染病，并可侵犯各种腺组织或神经系统及肝、肾、心脏、关节等器官。潜伏期8～30天，平均18天。起病大多较急，无前驱症状。有发热、畏寒、头痛、咽痛、食欲不佳、恶心、呕吐、全身疼痛等，数小时腮腺肿痛，逐渐明显，体温可达39℃以上，成人患者一般较严重。

腮腺肿胀最具特征性。一般以耳垂为中心，向前、后、下发展，状如梨形，边缘不清；局部皮肤紧张，发亮但不发红，触之坚韧有弹性，有轻触痛；言语、咀嚼（尤其进酸性饮食）时刺激唾液分泌，导致疼痛加剧；通常一侧腮腺肿胀后1～4天累及对侧，双侧肿胀者约占75%。颌下腺或舌下腺也可同时被累及。重症者腮腺周围组织高度水肿，使容貌变形，并可出现吞咽困难。腮腺管开口处早期可有红肿，挤压腮腺始终无脓性分泌物自开口处溢出。腮腺肿胀大多于1～3天到达高峰，持续4～5天逐渐消退而回复正常。全程约10～14天。颌下腺和舌下腺也可同时受累，或单独出现。颌下腺肿大，表现为颈前下颌肿胀并可触及肿大的腺体。舌下腺肿大可见舌及口腔底肿胀，并出现吞咽困难。手足口病手足口病是由多种肠道病毒引起的常见传染病，以婴幼儿发病为主。大多数患者症状轻微，以发热和手、足、口腔等部位的皮疹或疱疹为主要特征。少数患者可并发无菌性脑膜炎、脑炎、急性弛缓性麻痹、呼吸道感染和心肌炎等，个别重症患儿病情进展快，易发生死亡。少年儿童和成人感染后多不发病，但能够传播病毒。引起手足口病的肠道病毒包括肠道病毒71型（EV71）和A组柯萨奇病毒（CoxA）、埃可病毒（Echo）的某些血清型。EV71感染引起重症病例的比例较大。肠道病毒传染性强，易引起暴发或流行。临床症状表现为急性起病，发热，口腔粘膜出现散在疱疹，手、足和臀部出现斑丘疹、疱疹，疱疹周围可有炎性红晕，疱内液体较少。可伴有咳嗽、流涕、食欲不振等症状。部分病例仅表现为皮疹或疱疹性咽峡炎。预后良好。少数病例（尤其是小于3岁者）可出现脑膜炎、脑炎、脑脊髓炎、肺水肿、循环障碍等，病情凶险，可致死亡或留有后遗症。风疹

风疹是由风疹病毒通过呼吸道和直接接触传播引起的急性病毒性传染病。潜伏期10-23天,风疹传染性不如麻疹，症状比麻疹轻。主要表现发热、出疹、淋巴结肿大和结膜炎，病程短。皮疹特点为小的淡红色斑丘疹，先面部而后颈部，再躯干后四肢，通常24小时全身疹子出齐，2－5天疹退，不留色素。出疹严重者热度一般为38℃左右，疹退后热退，有耳后、枕部、颈下和颈部淋巴结肿大。麻疹麻疹是麻疹病毒引起的急性呼吸道传染病主要症状有发热、上呼吸道炎、眼结膜炎等临床表现:有潜伏期，前驱期，出疹期和恢复期。潜伏期：7-21天,平均为10－14天。前驱期：2－4天，发热、上呼吸道卡他症状、结膜炎等，此期后期可见到颊粘膜周围有红晕的0.5-1mm灰白色小点，称柯氏斑，是早期诊断麻疹的标志。出疹期：多在发热4－5天后出现，持续2－5日不等，皮疹为玫瑰色丘疹，自耳后、发际、前额、面、颈部开始逐渐波及躯干和四肢手掌足底，出疹时体温达到高峰，皮疹出齐后体温开始下降。恢复期：皮疹色变暗，有色素沉着及糠皮样脱落。如不出现并发症，病情自愈。风疹样皮疹麻疹样皮疹其它感染性腹泻感染性腹泻广义系指各种病原体肠道感染引起之腹泻，这里仅指除霍乱、细菌性和阿米巴性痢疾、伤寒和副伤寒以外的感染性腹泻，为《中华人民共和国传染病防治法》中规定的丙类传染病。这组疾病可由病毒、细菌、真菌、原虫等多种病原体引起，其流行面广，发病率高，是危害人民身体健康的重要疾病病毒性腹泻在感染性腹泻中占有重要的比例，其病原体包括轮状病毒、腺病毒、星状病毒、小圆病毒、杯状病毒等，目前在国内病毒性腹泻中检出的主要病原体是轮状病毒。感染性腹泻的临床表现可分为二大类：炎症性腹泻及分泌性腹泻。炎症性腹泻为病原体侵袭上皮细胞，引起炎症而致的腹泻。常伴有发热，粪便多为粘液便或粘液血便，粪便的显微镜检查见有较多的红、白细胞。属于此类感染性腹泻的除细菌性痢疾外，还有侵袭性大肠杆菌肠炎、肠出血性大肠杆菌肠炎、弯曲菌肠炎、小肠结肠炎耶尔森氏菌肠炎等。分泌性腹泻指病原体或其产物作用于肠上皮细胞，引起肠液分泌增多和/或吸收障碍而导致的腹泻。病人多不伴有发热，粪便性状为稀便或水样便，粪便的显微镜检查多无细胞，或可见少许红、白细胞。属于此类腹泻的除霍乱外，还有肠产毒性大肠杆菌肠炎、致泻性弧菌肠炎、非O1/非O139霍乱弧菌肠炎、轮状病毒肠炎、隐孢子虫肠炎，以及常以食物中毒形式出现的腊样芽胞杆菌腹泻，金黄色葡萄球菌腹泻等。急性出血性结膜炎急性出血性结膜炎又称流行性出血性结膜炎（俗称红眼病）是近30年来世界暴发流行的一种新型急性病毒性眼病。它的病原体是新型肠道病毒70型（EV70）或柯萨奇病毒A24型变种（Cox24v）引起的。临床表现：潜伏期很短，接触传染源后2小时～48小时内双眼同时或先后发病。自觉眼不适感1-2小时即开始眼红，很快加重。明显眼刺激症状，刺痛、砂砾样异物感、烧灼感、畏光、流泪。眼睑水肿，睑、球结膜高度充血。耳前淋巴结肿大，有压痛。急性出血性结膜炎患者一般无全身症状，少数人有发热、咽痛等上感症状。本病为自限性，自然病程1～2周，视力无损害，角膜无基质浸润，一般无后遗症。二、学校（托幼机构）传染病的

预防控制未出现疫情时的预防措施出现疫情时的防疫措施未出现疫情时的预防措施1、成立学校传染病防控机构，如学校传染病防控领导小组，由校领导担任组长，成员由相关部门人员如后勤（生管）人员、班主任、保健老师等组成，负责组织、协调、开展全校传染病防控工作。建立健全相关制度，如学校传染病疫情报告制度、学生晨检、因病缺勤病因追查与登记制度、入园入托查验证制度等。2、指派专人（保健老师）负责具体开展学校传染病防控工作，落实各项常规防控措施。如疫情报告、宣传培训、预防接种查验证、疫情发生后相关防控措施的落实等。3、加强全校师生传染病防控知识的学习与培训，通过制定培训计划，定期举办健康讲座、开设健康教育课等多种形式全面提高师生的自我保健防病意识和能力。4、做好各种防控物质贮备。平时学校应做好预防控制传染病发生与蔓延的相关物质准备。如贮备一定数量的体温计、外科口罩、消杀用品、有条件的学校可在教室宿舍安装紫外灯以备用。5、加强食品、环境、饮用水管理，消灭蚊蝇老鼠蟑螂等病媒生物。食堂工作人员必须是经过体检取得合格证的健康人员，食堂必须提供新鲜安全的食品、保证餐具专用或经合格消毒；经常开展爱国卫生运动，保证校内环境的整洁卫生，消除病媒生物的孳生地；学校必须提供符合国家饮用水标准的饮用水，同时向学生提供足量开水，防止学生饮用生水引发肠道传染病。定期开展灭蚊、灭蝇、灭鼠、灭蟑等除四害活动。6、认真落实学校预防接种查验证制度。预防接种是预防传染病最经济、最有效的方法，每一新学年开学后，学校应及时开展预防接种查验证工作，使各种疫苗未及时接种的学生能够及时得到补种，提高新生对各种疫苗可预防疾病的整体抵抗力。7、创造各种条件，为学生提供各种有利于心身发展的学习生活条件。如宽敞明亮的教室、宽大通风采光良好的宿舍、洁净的食堂、可口卫生的饭菜、足量的洗手洗浴设备、充裕的体育锻炼时间和设施等，使师生的衣食住行学各方面安全均得以保证。疫情发生时的防疫措施学校传染病的预防控制应从：控制传染源切断传染途径3个方面入手。保护易感人群传染源的控制1、严格隔离病人：严格掌握并按各种传染病的隔离期限责成患病学生住院或居家隔离治疗，直至满隔离期限后或经当地卫生院提供医师开具的无传染性的证明，患病学生方可返校上课。2、加强晨午检，及早发现与处理疑似病人：传染病发生期间，根据各种传染病的临床特点，每日认真询问、观察、检测（测体温）学生的健康状况，发现学生有传染病早期症状（如发热、皮疹、腹泻、呕吐、黄疸等）以及疑似传染病病人时，应当及时告知学校疫情报告人，学校疫情报告人要进行进一步排查，将学生因病缺勤、传染病早期症状、疑似传染病病人患病及病因排查结果登记专用登记册上，以确保做到对传染病病人的早发现、早报告。对发现有可疑症状的学生应立即通知家长带至或直接送至医院诊治。

3、加强疫情监测，执行疫情日报告、零报告：学校发生传染病疫情期间，学校疫情报告责任人每日将晨午检情况记录在学生因病缺勤、传染病早期症状、疑似传染病病人患病及病因排查结果登记表上，每日定时向辖区疾病预防控制机构报告，如有特殊情况则随时报告，辖区疾控中心则根据每日疫情进行情况，评估和调整防近措施。4、根据具体情况，可对病例的密切接触者采取预防性服药、隔离医学观察等措施。切断传播途径1、喝开水、吃熟食、洗净手；2、保持室内的空气流通，开窗通风，适当的空气消毒（紫外灯照射、空气喷雾消毒等）3、加强用具、食具、学具、物体表面的消毒；4、洗晒衣物、被褥等；5、整治环境，杀灭四害。6、必要时可适当调课或停课保护易感人群1、均衡饮食、加强营养、适量运动、充足休息，增强抵抗力；2、开展应急性主被动免疫：如甲肝、麻疹流行早期，可对密切接触者注射丙种球蛋白以防止发病或减轻症状；麻疹、风疹、流行性腮腺炎、水痘等流行早期可进行应急性疫苗接种，以提高全人群的免疫水平，防止疫情蔓延。3、停止大型人群聚集性活动，避免到人群密集的公共场所，尽量不去探视患者；4、大力开展健康教育工作：学校通过授课、版报、发放宣传单等形式对师生进行各类传染病防控知识的宣传教育，将疾病防治知识输灌给师生，将采取上述防控措施目的意义告诉全体师生，取得全体师生的配合，认真贯彻落实各项防控措施，才能取得预期的效果。各种常见传染病的隔离期

麻疹：出疹后5天；风疹：出疹后14天；流行性腮腺炎：至腮腺完全消肿后3天止，自发病起约3周时间手足口病：自发病日起14天流行性感冒：热退后2天；水痘：至水痘疱疹完全结痂为止，但不少于发病后7天流脑：症状消失后3天，但不少于发病后1周乙脑：隔离至体温正常急性出血性结膜炎：症状完全消失，至少7日。甲型H1N1流感定义为一种新型呼吸道传染病，属于流行性感冒的一种新型别，其病原为新甲型H1N1流感病毒，病毒基因中包含有猪流感、禽流感和人流感三种流感病毒的基因片段。世界卫生组织（WHO）初始将此型流感称为“人感染猪流感”，后将其重新命名为“甲型H1N1流感”。流行现状

国际疫情情况

4月中下旬起,源自北美的甲型H1N1流感疫情开始在全球多个国家蔓延,疫情发展迅速，截至10月9日，全球确诊病例数已超过37万例，但由于许多疫情严重的国家已不再检测和汇报新增病例，这个数字显然比实际感染数字要低得多；甲型H1N1流感至少造成全球4525人死亡；而全球各地报告的流感病例中，有近76%是甲型H1N1流感病例,说明甲流已成为当前流感流行的优势菌株。

国内疫情情况我国内地5月11日在四川成都发现了首例输入性确诊病例后，各地相继发生病例，截止10月12日，累计报告23766例甲型H1N1流感确诊病例，已治愈21342例，10月4日，西藏报告了一例死亡病例，这也是内地报告的首例甲型H1N1流感死亡病例。我国已经经历了输入性病例、二代病例和传染源不明的本土病例三个阶段，到目前，31个省、市、自治区均已报告了确诊病例。9月开学后，国内多个省市出现甲型流感聚集性病例，甲流也扩展至此前未发现病例的省份，仅9月份一个月确诊病例就达1.7万多例，同时也出现了无症状带毒者病例，并出现了学校聚集性病例和医务人员感染。这些情况的出现加大了甲型H1N1流感防控工作的难度，目前我国的甲型H1N1流感疫情正在从东部向西部，从南方向北方，从城市向农村蔓延，专家认为，随着天气逐渐转冷，包括我们国庆长假结束以后，大量流动人口要返回到学习、工作岗位上，出现大量聚集性疫情暴发的可能性很大，并且重症病例和死亡病例也会不断出现，疫情防控的形势还是比较严峻的。流行病学1、传染源：甲型H1N1流感病人和无症状感染者为主要传染源。2、传播途径：主要通过飞沫或气溶胶经呼吸道传播，也可通过口腔、鼻腔、眼睛等处黏膜直接或间接接触传播。接触患者的呼吸道分泌物、体液和被病毒污染的物品亦可能造成传播。易感人群：人群普遍易感。临床表现潜伏期：一般为1-7天，多为1-3天临床表现：通常表现为流感样症状，包括发热、咳嗽、咽痛、咯痰、流涕、鼻塞、头痛、全身酸痛、乏力。部分病例出现呕吐和/或腹泻。约10%病例可不发热。体征主要包括咽部充血和扁桃体肿大。可发生肺炎等并发症。少数病例病情进展迅速，出现呼吸衰竭、多脏器功能不全或衰竭。患者原有的基础疾病亦可被诱发加重，病情严重者可以导致死亡。诊断

疑似病例发病前7天内密切接触传染期甲型H1N1流感病例，并出现流感样临床表现的；或发病前7天内曾到过甲型H1N1流感流行的国家或地区，出现流感样临床表现；或出现流感样临床表现，甲型流感病毒检测阳性，但进一步检测排除既往已存在的亚型。在通风条件良好的房间单独隔离。

临床诊断病例仅限于以下情况作出临床诊断：同一起甲型H1N1流感暴发疫情中，未经实验室确诊的流感样症状病例，在排除其他致流感样症状疾病时，可诊断为临床诊断病例。在通风条件良好的房间单独隔离。确诊病例

出现流感样临床表现，甲型H1N1流感病毒核酸检测阳性或分离到甲型H1N1流感病毒或血清甲型H1N1流感病毒的特异性中和抗体水平呈4倍或4倍以上升高。在通风条件良好的房间进行隔离。住院病例可多人同室。治疗根据患者病情及当地医疗资源状况，按照重症优先的原则安排住院治疗，轻症病例可安排居家隔离观察与治疗。（一）一般治疗。休息，多饮水，密切观察病情变化；对高热病例可给予退热治疗。（二）抗病毒治疗。研究显示，此种甲型H1N1流感病毒目前对神经氨酸酶抑制剂奥司他韦（oseltamivir）、扎那米韦（zanamivir）敏感，对金刚烷胺和金刚乙胺耐药。（三）其他治疗。（四）中医辨证治疗。学校发生甲型H1N1流感疫情时

应采取的措施1.病例应按照当地卫生部门的要求，及时接受隔离治疗。2.卫生部门在学校的配合下，开展对病例密切接触者的追踪，并实施集中医学观察或居家医学观察。中小学生中的密切接触者原则上以居家医学观察为主，高校学生中的密切接触者原则上以集中医学观察为主。病例所在学校建立与居家医学观察者的联系，及时了解其每日健康状况，并将密切接触者健康状况报告当地疾病预防控制部门和教育行政部门。医疗卫生机构负责每日对集中医学观察者实行随访、报告。3.卫生部门指导、协助学校加强晨午检工作，加强学校发热、咳嗽或咽痛等流感样症状监测和因病缺课监测，及时发现、报告和诊治可疑病例。学校每日向当地疾病预防控制部门和教育行政部门报告居家医学观察者和可疑病例的情况，即实行日报告和零报告。4.卫生部门指导学校对教室、图书馆（阅览室）、教研室、宿舍等师生学习、工作、生活场所进行消毒。采取消毒、感染控制等措施，做好疫情控制工作。5.经当地政府批准同意，对出现病例的托幼机构实施全园停课7天（或7天以上）的措施。卫生、教育等相关部门在当地政府的领导下，加强放假儿童的校外管理，避免其在学校外的相互接触和聚集。托幼机构复课后，应继续加强晨检和病例报告，并向属地疾病预防控制机构和教育部门每日报告全校学生和教职员工的健康状况，至少持续14天。6、学校停止举办校内各种大型师生集会和会议等活动。7、在卫生部门指导下，学校加强宣传教育工作。8、根据当地（县级以上）人民政府的决定，学校采取临时停课或暂时关闭措施。（1）原则上，停课的范围应根据疫情波及的范围和发展趋势，由小到大，如由班级到年级，由年级到全校，由一个学校到多所学校等。（2）如果14天内，同一班级出现2例及以上甲型H1N1流感病例时，该班级可停课；如果14天内，同一学校有2个及以上班级需要停课时，该班级所在年级可停课；如果14天内，同一学校有2个及以上年级需要停课时，该学校可以全体停课。（3）停课前，除应告知学生、家长及教职员工甲型H1N1流感相关知识外，应让学生、家长及教职员工与学校保持联系，报告其是否出现流感样症状。学校应向属地疾病预防控制机构和教育行政部门每日报告学生和教职员工的健康状况。（4）停课时间不少于7天，自最后一例甲型H1N1流感病例被隔离或离校之日算起。可根据放假学生和教职员工的健康状况，随时调整放假期限。（5）中小学校停课放假后，卫生、教育等相关部门应在当地政府的领导下，加强放假学生校外管理，避免其在学校外的相互接触和聚集。高校停课后，要加强停课学生的在校管理。（6）复课前，必须对教室、阅览室、食堂、厕所等场所进行彻底清扫消毒；因甲型H1N1流感暂时停课的学生，必须在恢复健康，经有关卫生部门确定没有传染性并出具有效的复课证明后方可复学。（7）复课后，未痊愈的学生应继续居家隔离治疗，至其病后7天或症状完全消失后24小时（以两者之间较长者为准），方可上学。（8）复课后，学校或托幼机构还应继续加强晨检和病例报告，并向属地疾病预防控制机构和教育行政部门每日报告全校学生和教职员工的健康状况，至少持续14天。9、对出现病例的高校实施学生停课不离校，在校进行观察措施。卫生、教育等相关部门在当地政府的领导下，加强放假学生的校内外管理，避免学生聚集活动；并做好被隔离