实验动物 实验用禽基本操作技术规程

DB23/TXXXX—2020

实验动物实验用禽基本操作技术规程

1范围

本文件规定了鸡、鸭、鹅、鸽、鹌鹑、山鸡等常见实验用禽在隔离器中开展动物实验涉及的常规操

作技术，包括准备工作、给药（疫苗接种、攻毒、治疗、麻醉）、样品采集（采血、拭子）、安乐死等

操作技术要求。

本文件适用于禽的动物实验、流行病学调查、疫情监测、疫苗免疫效果评估等涉及的常规技术操作。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T35823实验动物动物实验通用要求

GB/T35892实验动物福利伦理审查指南

GB/T39760实验动物安乐死指南

GB/T27416实验动物机构质量和能力的通用要求

NY/T1952-2010动物免疫接种技术规范

RB/T173-2018动物实验人道终点评审指南

RB/T061-2021实验动物安乐死技术规范

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1药物

本标准中药物是应用于禽的化学药物、生物制品、微生物、寄生虫的代称和统称。

3.2人道终点

即考虑人道对待动物的要求和实验要求，合理终止动物用于实验的时机。

3.3安乐死

安乐死是以科学人道的理念和方式，使动物生理和心理痛苦最小化而采取的动物意识迅速丧失的处

死过程。

4准备工作

1

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4.1动物实验审查

动物实验前应审查实验方案、动物福利伦理。如涉及病原微生物，应进行生物安全评估和制定处

置预案等。动物实验全过程应接受动物福利伦理、生物安全监督和检查。

4.1.1福利伦理审查

动物实验福利、伦理审查参照GB/T35823、GB/T35892规定执行。

4.1.2人道终点

动物实验人道终点的确定是科学目的与动物福利相权衡的结果。如何科学合理地确定动物实验的人

道终点，在实现研究目的的同时，最大程度地减轻或结束实验动物所承受的疼痛和痛苦，是动物实验方

案中一项重要的工作。动物实验人道终点的设定参考RB/T173-2018原则执行。

4.1.3生物安全审查

动物实验生物安全审查参照GB19489规定执行。

4.2人员

4.2.1操作人员应具备兽医专业相关资质，了解实验用禽习性、实验药物相关知识。

4.2.2操作人员应经过实验动物相关知识学习和技能培训，取得实验动物从业人员资质。

4.2.3操作人员技术熟练、规范，按照动物实验机构相关规定做好个人防护，严格遵守相关管理规定和

操作规程。

4.3实验用禽

4.3.1实验用禽

4.3.1.1根据实验要求使用相应级别的实验用禽。

4.3.1.2无《实验动物生产许可证》的实验用禽，应按动物实验机构相关规定，排除人畜共患病及本动

物的烈性传染病，才能进入动物实验设施。

4.3.1.3实验用禽需闭环转运进入隔离器，按规定隔离、检疫，观察和记录状态。待动物适应环境、状

态稳定后才能用于开展动物实验。

4.3.2断喙

如实验周期较长，为防止大龄时啄肛、啄羽，宜将实验用禽在幼龄时断喙，常用于鸡。考虑雏禽生

理状态和应激因素，宜在6～10日龄断喙。用断喙器将禽上喙自喙尖至鼻孔1/2处，下喙自喙尖至鼻孔

1/3处切去。断喙前1天宜在饮水中添加复合维生素，防止应激，减少出血。

4.3.3标识

4.3.3.1翅标：标记位置在禽翅膀外侧的白色、透明、无血管、神经部位。较大体型实验用禽可使用中

大型动物（猪、羊、牛）的耳号代替翅标，操作方便且不易脱落。

4.3.3.2脚环：须随实验用禽日龄增大放松内径，以免妨碍生长。脚环易脱落，易伤腿部皮肤。

2

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4.3.3.3颜色标识：实验周期较短可采用颜色标记方法，如动物用记号蜡笔、3%～5%苦味酸溶液（黄

色）、0.5%中性品红（红色）、2%硝酸银溶液（咖啡色）、结晶紫等对动物无害的染料类标记羽毛。

实验中注意及时补色。

4.3.3.4临时标识：可使用记号笔在喙、羽毛部位临时标记和区分。

4.4器具

器具应以密闭容器盛放，整体消毒或灭菌。按照动物实验机构相关操作规程，表面消毒后传递进入

实验区。

4.4.1点眼器、滴鼻器：滴管、专用点眼瓶滴量不够精确，一般应用于现地免疫；实验条件下一般使用

1mL注射器，如需精确操作可使用定量移液器。

4.4.2注射器：根据实验用禽种类、日龄、实验操作类型，选择适合的一次性注射器。

4.4.3刺种器：可选用翼膜刺种针或刺翼注射器。

4.4.4采样拭子：可使用棉拭子或植绒拭子。幼龄禽常用6～8cm长度拭子，成年禽或体型较大禽宜适

当增加咽拭子长度。

4.4.5其他：75％酒精棉球、干棉球、塑料离心管、自封塑料袋、记号笔、剪、镊等。

4.5药物

物品传递和人员进入动物实验设施的流程耗时较长，生物类药物应采取措施防止活性或滴度降低。

此类药物不宜提前稀释，应将原液置于碎冰中保存、传递，现用现配。

4.6防护用具

按照动物实验机构相关规定穿戴防护服、口罩、手套等。

5保定

5.1根据实验用禽种类、体型，以保障人及动物安全、便于实验操作为原则，采取适宜的保定方式。

5.2双人保定系由助手协助保定动物，便于操作者操作。

5.3单人保定系由操作者一人保定和操作，常用于体型较小实验用禽。在隔离器中开展实验操作，操

作者常利用上臂与隔离器内壁之间的空间挤压保定动物。

6给药

6.1皮下注射

6.1.1颈背部皮下注射

注射部位为颈背部下1/3处，不应靠近头部，以免药液向头部扩散造成肿头。用食指和拇指提起颈

背部皮肤，使表皮和肌肉间形成气窝，针头与皮肤呈30°～45°角，朝背部方向将药物注入气窝内。应

保持注射器与背平行，以免伤及血管、神经和骨膜。注射完毕缓慢拔出针头，减少药物外溢。

6.1.2胸部皮下注射

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胸部皮下注射较为精细，宜双人操作。由助手将实验用禽胸部朝上平放保定，操作者以食指和中指

拨开羽毛，在胸部上1/3处，龙骨突两侧，针头呈15～45°角进针，从羽毛梗部位将药物注入，应在皮

下呈乳白色片状扩散。拔出针头同时以左手食指按压注入部位，以使药物充分扩散，防止外溢。

6.1.3腿部皮下注射

将实验用禽腿内侧羽毛拨开，针头约呈30°角左右刺入皮下注入药物，注射后按压针口。

6.2肌肉注射

实验用禽肌肉注射部位常选择胸肌。腿部大血管和神经较多，又是禽负重主要部位，一般不宜选择

做肌肉注射。特殊情况可选择翅部肌肉注射。禽类肌肉较薄，为减少局部肌肉损伤，利于药物快速吸收，

应将药液分次多点肌肉注射。

6.2.1胸部肌肉注射

实验用禽可以仰卧或直立姿势保定，胸部朝向操作者。在胸部上1/3处、龙骨突两侧肌肉厚实处进

针。进针方向大致与胸骨平行、与胸肌呈约30°角，勿垂直刺入伤及内脏。回抽无血再注入药液，针

头深度：雏禽为0.5～1.0cm，成年禽为1.0～2.0cm。

6.2.2腿部肌肉注射

腿肌注射部位为大腿外侧肌肉上1/3处。固定腿须注意不要损伤关节。针头与腿骨大致平行、约呈

30°～45°角刺入肌肉，勿伤及血管、神经和骨膜。回抽无血再注入药液。

6.2.3翅根肌肉注射

注射部位为禽翅膀根部内侧肌肉。一手持双翅翅根，暴露翅根部，针头平行于翅膀骨骼、垂直于禽

体刺入，回抽无血注入药液。

6.3翅静脉注射

翅静脉注射部位为翼下静脉基部，鸭为肱静脉，位于翅膀内侧中部羽毛较少的凹陷处。成禽只需左

手握住翅膀翻到内侧，即可见到充盈较好的静脉。体型较小实验用禽，左手握住翅膀，禽头部朝向左手

方向并被左手遮挡，用酒精棉球消毒注射部位兼刺激扩张血管，左手中指和无名指拉开翅膀，食指压紧

静脉基部使血管充盈，拇指固定进针部位。右手持注射器使针头沿血管壁大致平行刺入，见回血后缓慢

注入药液。拔针后针口用手指或干棉球压迫止血至少3min。

6.4腹腔注射

助手保定实验用禽，呈头低尾高姿势，胸部朝向操作者。操作者左手拇指和食指提起腹壁，右手持

注射器针头穿过腹壁进入腹膜腔，回抽无浑浊液体表明针头未进入肠管，缓慢注入药物。

6.5脑内注射

常用1日龄左右雏禽。左手握住雏禽，以拇指、食指固定露出的头部。进针区域位于大脑后侧，可

用胰岛素注射器或1mL注射器连接4.5号针头，以减少对脑组织的损伤。以头顶中心为原点，脑的左

右中线、前后中线形成“十”字型，选择“十”字下部，靠近左右、前后中线，垂直进针刺穿脑膜，不

宜过深，缓慢注入药液。针头稍停留几秒缓慢抽出，减少药物外溢。

6.6皮内注射

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禽一般在肉髯部。局部消毒后针头平行刺入皮肤，缓慢注射，注射部见有小水泡状隆起即为操作正

确。注药量一般不超过0.1mL。

6.7气管内注射

左手握禽头部，拇指和食指固定上下喙结合部扩张口腔，尽量暴露喉头。操作者戴头灯照射口腔，

可清晰见到气管和食管开口，气管口在食管下方。右手持注射器连接尖端平滑的灌胃针，针头沿舌根部

下顺至喉头处，继续下顺稍进入气管，操作应轻柔，以免损伤气管或食管。沿气管壁缓慢注入药液，防

止冒出气泡使药液外溢。

6.8眶下窦内注射

眶下窦是禽类唯一的鼻旁窦，位于眼球前下方和上颌的外侧，略呈三角形与鼻腔相通。左手握住禽

头部，拇指和食指固定喙，左手食指摸到眶下缘，右手持注射器，自鼻翼旁约1cm处，针头与皮肤呈

45°角，向后、向外进针，可直接刺入眶下孔完成注射。刺入不可过深，以免伤及眼球。

6.9滴鼻、点眼、滴口

滴鼻、点眼。左手握住禽头颈部，拇指和食指固定头部防止其甩动。食指堵住一侧鼻孔，使头侧偏，

另一侧鼻孔朝上。右手持1mL注射器或移液器，将药液近距离滴入鼻孔，可见药物全部流入；待眼睑

张开时将药液滴在眼球上，眼睑闭合时会自然吸入，眼周无残留液体。双侧鼻孔和眼球宜均匀滴入。水

禽鸭、鹅鼻孔距离咽部较远，且有呷水习性，滴入药液易甩出。应在滴入药液后捏紧喙使其竖立，静止

片刻待药液吸收完全。

滴口。一手握住禽头颈部，食指轻压喉部使其张口，另一只手持滴瓶、注射器或移液器将药物滴入

口腔中，咽部有吞咽动作后将动物放开。

6.10刺种

左手握住翅尖，右手持刺种针蘸满药物，于翅膀翼膜内侧无血管、呈半透明色三角区刺入，勿伤及

肌肉、血管、神经和骨。3天后检查刺种部位，有结痂、红斑或肿块表明刺种成功。

6.11滴肛或涂肛

助手将禽倒提，用手握腹使肛门粘膜翻出，操作者手持滴瓶将药物滴入肛门黏膜，或用无菌棉签蘸

取药物涂擦肛门黏膜3～4次，至黏膜发红为止。

6.12毛囊涂搽法

将禽腿部羽毛拔出几根，用棉球蘸药物逆羽毛生长方向涂搽。3天后检查见毛囊发红或肿胀表明成功。

7样品采集

7.1采血

应根据实验用禽的种类、体型、动物后继是否继续使用等情况选择采血部位和采血方法。

7.1.1翅静脉采血

保定方式、进针方式同翅静脉注射。采血针平行刺入翅静脉，抽栓见回血后放松对静脉近心端的按

压，保持针头位置不动缓缓吸入血液，拔针后需压迫止血。翅静脉每次可采血样1.5～5mL。若需多次

5

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采血，应自静脉远心端开始，以免发生栓塞影响整条静脉。采血后将注射器活塞外拉预留血清析出空间。

7.1.2翅静脉针刺法采血

将禽保定，展开单翅，用左手拇指压迫静脉使其充血，刺破翅膀中段关节位置较细的静脉血管，用

离心管盛接流出的血液。此方法每次可采血样0.5mL左右。

7.1.3心脏采血

7.1.3.1侧卧采血

禽右侧卧、左侧朝上保定。自龙骨突起前缘引一直线到翅基，再由线中点向髋关节引一直线，此线

前1/3和中1/3的交界处有一凹陷，即为进针部位。或寻找由胸骨走向肩胛部的皮下大静脉，心脏约在

该静脉的分支下侧，触摸可感觉到心脏搏动明显。酒精消毒后可用碘酊标记采血部位。针头刺入时，如

触及胸骨可稍调整针头角度向里刺入，边刺边抽动针芯，若刺入心脏即有血液涌入注射器。

7.1.3.2仰卧采血法

禽类仰卧采血应在嗉囊空虚时进行较为方便。禽仰卧保定，头部朝向采血者，于嗉囊下方凹窝处消

毒，持注射器，靠凹窝左侧与躯体约成45°度向斜下方刺入，边刺边回针，有血液涌入表明刺入心脏。

7.1.3.3手提倒立式采血

适合单人操作。左手将实验用禽双翅、双腿提起呈倒立状，胸部朝向操作者。进针部位和方式同仰

卧采血法。

7.1.4水禽跖静脉采血

将水禽双腿提起呈倒立状，可见清晰暴露的跖静脉血管，注射器针头与皮肤约成10°角顺血管进

针采血，也可刺破血管少量接血。

7.1.5颈静脉采血

剪掉或拔掉颈部右侧部分羽毛，暴露皮肤便于观察颈静脉。左手握住颈部，压迫静脉近心端使颈静

脉隆起，右手持注射器，针头向远心端方向进针采血。

7.2咽喉、泄殖腔拭子采集

7.2.1咽拭子

左手固定实验用禽头部，食指和拇指打开口腔，右手持无菌拭子深入喉头及上颌腭裂处，来回旋转

3～5次蘸取喉头分泌液，要求可见明显黏液。拭子取出放入离心管内，折断或剪去多余部分。

7.2.2泄殖腔拭子

如禽体型适中，操作者可单人保定、操作。左手握提双腿及双翅呈倒立状，或者左手将动物仰卧保

定，稍按压下腹部使肛门突出。将棉签慢慢插入泄殖腔内约1.5cm～2.0cm，由深处贴着肠壁慢慢旋转

至出来，并沾取少量粪便。

8安乐死

8.1适用范围

6

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8.1.1动物实验结束时需对动物实施安乐死。

8.1.2按照人道终点的设定对动物实施安乐死。

8.1.3其他不适合继续饲养的原因，需对实验动物实施安乐死。

8.2基本原则

8.2.1实验用禽安乐死的基本原则参照GB/T39760、RB/T061-2021规定执行。

8.2.2实验用禽安乐死常用麻醉剂及药剂见附录A。

8.2.3安乐死方法选择应能兼顾实验目的，以及后继的组织评估、检查或使用。实验用禽推荐性安乐死

方法见附录B。

8.2.4采用过量麻醉方法对实验用禽实施安乐死后，应首先确定动物失去反射，再辅以物理方式确保动

物死亡。物理方式包括颈部放血、下颌静脉放血、颈椎脱臼等。

8.2.5瞬膜反射可用于检查实验用禽是否死亡。禽类的瞬膜也称第三眼睑，是从眼内角上方、下眼睑内

面的粘膜皱襞伸出的透明薄膜，能向上或斜向运动遮住角膜。如动物未死触摸眼角会引起反射。

8.3常用操作技术

8.3.1雏禽颈椎脱臼法

颈椎脱臼法是单体实验用禽常用的安乐死方法。麻醉状态下，将雏禽头颈部交界部位按压在一个突

出的棱角上，快速向两边按压即达到颈椎脱臼目的。目前也有专用颈椎脱臼工具，形似钝的“剪刀”。

8.3.2成年禽折颈脱臼法

一手将动物挤靠在隔离器内壁或身体一侧固定动物，另一只手抓住头部，将颈部尽力向前伸展，然

后迅速向后折，以分离颈椎并切断脊髓。

8.3.3颈部血管放血

拔除颈部部分羽毛，剪断颈部两侧颈静脉或颈部腹侧动脉，使动物失血死亡。

8.3.4下颌静脉放血

用剪刀伸向禽口腔深处，刀刃向上用力割破上颌静脉，将禽倒置即可放尽血液。

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附录A

（规范性）

实验用禽安乐死常用麻醉剂及药剂

A.1实验用禽安乐死常用麻醉剂及药剂

表A.1实验用禽安乐死常用麻醉剂及药剂

麻醉剂/药剂英文名使用方法备注

戊巴比妥钠Barbiturates静脉或腹腔注射-

舒泰Zoletil静脉或肌肉注射-

速眠新-静脉或肌肉注射-

异氟烷Isoflurane吸入-

氟烷Halothane吸入-

安氟醚Enflurane吸入-

雏禽、新出壳禽需要延长时间；

二氧化碳Carbondioxide吸入

不适用于水禽。

氯化钾Potassiumchloride静脉注射仅在动物麻醉状态下使用

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附录B

（规范性）

实验用禽推荐性安乐死方法

B.1实验用禽推荐性安乐死方法

表B.1实验用禽推荐性安乐死方法

安乐死方法是否推荐使用限制条件

巴比妥类药物注射首选的安乐死方法-

过量注射麻醉剂首选的安乐死方法-

静脉注射氯化钾

条件性接受的安乐死方法仅在动物麻醉状态下使用

（1-2mg/kg）

雏禽、新出壳禽需要延长时间；

二氧化碳条件性接受的安乐死方法

不适用于水禽。

须有科学必要性且经伦理委员会审

深麻状态下放血条件性接受的安乐死方法

核通过方可使用

须有科学必要性且经伦理委员会审

深麻状态下颈椎脱臼条件性接受的安乐死方法

核通过方可使用

仅在无其他方法可用情况下，并经

深麻状态下断头条件性接受的安乐死方法

伦理委员会审核通过方可使用

仅在无其他方法可用情况下，并经

清醒时断头条件性接受的安乐死方法

伦理委员会审核通过方可使用。

须有科学必要性且经伦理委员会审

核通过方可使用；

清醒时颈椎脱臼条件性接受的安乐死方法

操作人员需接受培训，并具备熟练

技术。

9

DB23/TXXXX—2020

参考文献

[1]世界动物卫生组织（WOAH）,《陆生动物卫生法典（第28版）》[M].北京:中国农业出版社,2019.

[2]LearyS,UnderwoodW,AnthonyR,etal.AVMAGuidelinesfortheeuthanasiaofanimals:2020

Edition[M].Schaumburg:AmericanVeterinaryMedicalAssociation,2020.

[3]中国动物疫病预防控制中心编译.国外动物福利法律法规汇编[M].北京:中国农业科学技术出版社,

2016.7.

[4]卢今,张颖,潘学营,庞万勇,等.2020版美国兽医协会动物安乐死指南解析[J].实验动物与比较医学,

2021,41(3):195-206.

10

ICS65.020.20

B43

备案号：

DBDB23/T2XXXX—32020

黑龙江省地方标准

DB23/TXXXX-XXXX

实验动物实验用禽基本操作技术规程

XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施

黑龙江省市场监督管理局发布I

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实验动物实验用禽基本操作技术规程

1范围

本文件规定了鸡、鸭、鹅、鸽、鹌鹑、山鸡等常见实验用禽在隔离器中开展动物实验涉及的常规操

作技术，包括准备工作、给药（疫苗接种、攻毒、治疗、麻醉）、样品采集（采血、拭子）、安乐死等

操作技术要求。

本文件适用于禽的动物实验、流行病学调查、疫情监测、疫苗免疫效果评估等涉及的常规技术操作。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T35823实验动物动物实验通用要求

GB/T35892实验动物福利伦理审查指南

GB/T39760实验动物安乐死指南

GB/T27416实验动物机构质量和能力的通用要求

NY/T1952-2010动物免疫接种技术规范

RB/T173-2018动物实验人道终点评审指南

RB/T061-2021实验动物安乐死技术规范

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1药物

本标准中药物是应用于禽的化学药物、生物制品、微生物、寄生虫的代称和统称。

3.2人道终点

即考虑人道对待动物的要求和实验要求，合理终止动物用于实验的时机。

3.3安乐死

安乐死是以科学人道的理念和方式，使动物生理和心理痛苦最小化而采取的动物意识迅速丧失的处

死过程。

4准备工作

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4.1动物实验审查

动物实验前应审查实验方案、动物福利伦理。如涉及病原微生物，应进行生物安全评估和制定处

置预案等。动物实验全过程应接受动物福利伦理、生物安全监督和检查。

4.1.1福利伦理审查

动物实验福利、伦理审查参照GB/T35823、GB/T35892规定执行。

4.1.2人道终点

动物实验人道终点的确定是科学目的与动物福利相权衡的结果。如何科学合理地确定动物实验的人

道终点，在实现研究目的的同时，最大程度地减轻或结束实验动物所承受的疼痛和痛苦，是动物实验方

案中一项重要的工作。动物实验人道终点的设定参考RB/T173-2018原则执行。

4.1.3生物安全审查

动物实验生物安全审查参照GB19489规定执行。

4.2人员

4.2.1操作人员应具备兽医专业相关资质，了解实验用禽习性、实验药物相关知识。

4.2.2操作人员应经过实验动物相关知识学习和技能培训，取得实验动物从业人员资质。

4.2.3操作人员技术熟练、规范，按照动物实验机构相关规定做好个人防护，严格遵守相关管理规定和

操作规程。

4.3实验用禽

4.3.1实验用禽

4.3.1.1根据实验要求使用相应级别的实验用禽。

4.3.1.2无《实验动物生产许可证》的实验用禽，应按动物实验机构相关规定，排除人畜共患病及本动

物的烈性传染病，才能进入动物实验设施。

4.3.1.3实验用禽需闭环转运进入隔离器，按规定隔离、检疫，观察和记录状态。待动物适应环境、状

态稳定后才能用于开展动物实验。

4.3.2断喙