检验科体液总蛋白测定标准操作规程

玉环县人民医院检验科文件编号：JYK-3-SH-041版本/修订号：C/0主题内容生化室作业指导书生效日期：20110701第1页共4页编写制定日期审核审核日期：核准执行日期李永臣2010-09-15李永臣2011-07-01章林华2011-07-0141、体液总蛋白测定标准操作规程1检验申请单独检验项目申请：脑脊液与尿总量蛋白(CSF)，临床医生根据需要提出检验申请。2标本采集与处理采集与处理2.1受检者的准备：尿样：采用尿样品随机收集或收集24小时。脑脊液：采用腰椎穿刺。要严格掌握禁忌证、凡疑有颅内压升高者必须做眼底检查，如有明显视乳头水肿或有脑疝先兆者，禁忌穿刺。凡病人处于休克、衷竭或濒危状态以及局部皮肤有炎症、颅后窝有占位性病变或伴有脑干症状者均禁忌穿刺。2.2样本准备：脑脊液由临床医师进行腰椎穿刺采集，必要时可从小脑延脑池或侧脑室穿刺获得。穿刺后应由医师用压力测定，正常人脑脊液压力卧位为0.78-1.76kpa(80-180mmH2O)，儿童为0.4-1.0kpa(40-100mmH2O)。任何病变使脑组织体积或脑脊液量增加时，脑脊液压力均可升高。待压力测定后将脑脊液分别收集于3个无菌试管中，第一管作细菌培养，第二管作化学分析和免疫学检查，第三管作一般性状及显微镜检查。每管收集1-2毫升。脑脊液标本必须立即送验及时检查，放置过外将影响检验结果，是细胞破坏、变性、或细胞包裹于纤维蛋白凝块中，导致细胞数降低、分类不准确等。存放中的脑脊液葡萄糖会分解，使之含量降低；细菌自溶或残废可影响细菌检出率等。2.3抗凝剂：不使用抗凝剂。2.4标本处理：2.4.1尿样品随机收集或收集24小时。储存在2-8℃或冰冻稳定至测定前。2.4.2脑脊液样品中不能有溶血。储存在2-8℃可稳定数天。3方法原理连苯三酚红与钼酸结合形成红色复合物，在467nm有最大吸收。当这个复合物在酸性条件下与蛋白结合形成蓝紫色复合物，在598nm有最大吸收。通过在600nm检测生成物的吸光度，可以测量出样本中总蛋白的含量。4试剂及其他用品组成溶液浓度连苯三酚红缓冲液2.4mg/dlPH=2.5钼酸钠0.96mg/dl表面活性剂5校准品与校准模式5.1校准品：利德曼专用配套定标液。5.2校准类型和校准点数目：线性模式，1个校准点。5.3校准周期：校准间隔时间不限，试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围，需要定标。5.4校准液重建方法：校准液即开即用，无需特殊准备。6质控品与室内质控规则6.1质控品采用自配未定值质控血清。6.2质控液重建方法：分装冰冻质控血清，复溶即用，无需特殊准备。6.3质控品测定：在每星期一或更换试剂时测质控血清一次。6.4质控规则：采用Westgard多规则质控规则，由计算机程序进行检索与判断。6.5如出现失控情况，按室内质控标准操作程序采取各种有效的纠正措施及时纠正，并在确认重新回复到控制状态后开始标本检测。7适用仪器适用AEROSET和C16000全自动生化分析仪器。8标本检测步骤装载试剂→进行校准→进行质控→输入标本检测项目→加载标本→标本测定→结果复核→报告。9主要分析参数参见说明书。10结果计算A标准c＝ΧCOA标准AA测定A标准尿总蛋白（mg）：c＝ΧCOΧVdlA标准式中：c——测定蛋白浓度，mg/dL；A测定——标本管吸光度；A标准——标准管吸光度；CO——校准液中蛋白浓度，mg/dL；Vdl：二十四小时尿液体积11检验结果的报告及范围11.1结果的报告11.1.1结果经审核确认准确无误后发出报告。11.1.2报告单上标明结果的计量单位、参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签名，并有与申请单相同的医学信息。11.1.3如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。11.2报告范围：0～2mg/L，超过此范围的结果报告时必须附有证明该结果准确可靠的文字说明，例如：系根据标本稀释后重复测定的结果。12操作性能12.1精密度：批内CV<3.13%，批间CV<4.80%。（使用浓度为80mg/dl以上的标本）12.2线性范围：0～2mg/L。12.3灵敏度：当CSF浓度为100mg/dL时，显色吸光度A600约为0.384～0.427。13参考范围及医学决定水平脑脊液蛋白：0.15-0.45mg/l；尿蛋白：0-150mg/24小时。随机尿液正常值范围为:0.01～0.14mg/l。14临床意义14.1尿总蛋白的测定是鉴别肾病的重要指标。尿总蛋白含量升高常见于肾小球渗透性过高、肾小管重吸收不全和蛋白分泌素异常等。14.2脑脊液蛋白和特异蛋白的测定常用于鉴别血液/脑屏蔽到血浆蛋白中渗透量的增加或鞘内的免疫球蛋白分泌素的增加。15结果审核以及分析与相关项目的联系15.1由资深专业人员负责检验结果的审核。15.2认真审核每一个测定结果，审核者对发出报告结果的准确性和可靠性负责，并在报告单的审核者处签名。15.3相关项目：审核如出现与临床不符甚至相悖的情况，应分析与查找原因。无威胁生命的“紧急值”及报告规定17有关引用程序与文件17.1Abbott生化分析仪仪器标准操作规程。17.2生化检验室内质控标准操