检验科血清谷丙转氨酶测定标准操作规程

玉环县人民医院检验科文件编号：JYK-3-SH-007版本/修订号：C/0主题内容生化室作业指导书生效日期：20110701第4页共5页编写制定日期审核审核日期：核准执行日期李永臣2013-08-01李永臣2013-08-01章林华2013-08-01血清丙氨酸氨基转移酶测定标准操作规程1检验申请单独验项目申请：血清丙氨酸氨基转移酶测定(缩写ALT)；组合项目申请：血生化中肝功能测定。临床医生根据需要提出检验申请。2标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中。或采用含分离胶的真空采血管。2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。2.1.3急诊标本应记录采集时间、送检时间、接收时间。2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。2.1.5.2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。2.2标本保存2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。2.2.2标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定48h，普通冰箱中（2～8℃）稳定7天。-20℃保存稳定30天。为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。2.3标本采集的注意事项2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛、避免剧烈活动，和12h以上禁食空腹状态。2.3.2一般采用血清，可以使用EDTA、枸橼酸盐、草酸盐抗凝的血液标本，但肝素抗凝剂可引起反应液混浊。3方法原理测定反应以如下的原理进行：ALT催化L-丙氨酸的氨基转移至α-酮戊二酸，生成丙氨酸和L-谷氨酸，LDH催化丙酮酸生成乳酸，同时将NADH氧化成NAD+。NADH吸光度的下降速率和ALT的活力成正比。4试剂及其他用品4.1试剂：丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒，由北京利德曼生化技术有限公司出品。4.2试剂盒保存：未启封试剂盒在2～8℃保存，可储存至失效期。启封使用的试剂置仪器试剂仓冰箱内稳定28天。开盖后避免污染。当试剂变混浊，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。4.3试剂盒准备：液态双试剂型，即开即用，无特殊准备。4.4试剂盒主要成分：组成R1:R2=5:1混合后溶液的浓度R1:Tris缓冲液:80mmol/LPH=7.8L-丙氨酸450mmol/LLDH>1200U/LR2:起动液NADH0.18mmol/La-酮戊二酸18mmol/L5校准品与校准模式5.1校准品：不使用校准品，以NADH的双波长（340/380nm）摩尔吸光系数计算ALT活性。6质控品与室内质控规则6.1质控品采用由Beckman-Coulter公司提供的两个不同水平未定值质控血清。6.2质控液重建方法：液态质控血清，即开即用，无需特殊准备。6.3质控品测定：在每一批标本中测定两个水平质控血清各一次。6.4质控规则：采用Westgard多规则质控规则，由计算机程序进行检索与判断。7适用仪器适用AEROSET和C16000全自动生化分析仪器。8标本检测步骤装载试剂→进行校准→进行质控→输入标本检测项目→加载标本→标本测定→结果复核→报告。主要分析参数参见说明书。USERID10结果计算计算公式：ALT(U/L)＝公式中ΔA/min即单位时间中吸光度降低的值，VT为总反应体积ml（试剂总量＋标本量），Vs为标本体积ml，l为比色皿光径cm，ε为NADH的340/380nm测定的毫摩尔消光系数。K值即因子，本法中K值为3817。仪器根据此公式自动给出每个标本测定结果。11检验结果的报告及范围11.1结果的报告11.1.1结果经审核后，确认准确无误后发出报告。11.1.2报告单上标明结果的计量单位、参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签名，并有与申请单相同的医学信息。11.1.3如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。11.2报告范围：5-2600U/L，超过此范围的结果报告时必须附有证明该结果准确可靠的文字说明，例如：系根据标本稀释后重复测定的结果。12操作性能12.1精密度：批内CV＜3.5%；总CV＜5.3%。12.2线性范围：5-400U/L。12.3方法的有限性及干扰因素：EDTA(200mg/dl)，柠檬酸钠（116mmol/L）对本试验有干扰。胆红素1026μmol/L、甘油三酯11.4mmol/L无明显干扰。磷酸吡哆醛能使血清中ALT显示最大活性，使用不含有磷酸吡哆醛试剂测定ALT活性，某些疾病患者如肾脏病患者，可因血清中磷酸吡哆醛含量不足而致ALT活性低估。13参考范围及医学决定水平参考范围：男9-50U/L；女7-40U/L。14临床意义14.1ALT存在于各种组织细胞内，以肝细胞中含量最多，正常时血清中ALT活性很低。14.2肝细胞因感染病毒而受损伤，尤其是处于急性期时，ALT从细胞内逸出至血液中，血清中ALT活性可明显升高，因此是各种肝炎患者检查的一个重要指标。14.3某些药物对肝细胞有毒性副作用，过量或长期使用可至肝脏受损，亦可以ALT活性升高反映。14.4实质性脏器有非感染性炎症或损伤时，如脂肪肝、梗阻性黄疸、肝内胆汁瘀滞、胆管炎、胆囊炎、肝癌、急性心肌梗死、心肌炎、心力衰竭时的肝脏淤血等，均可成为血清ALT升高的原因。14.5ALT与AST联合测定并计算其比值有助于对某些疾病的鉴别，正常情况下ALT／AST比值小于1，但在传染性肝炎及其它原因引起的肝脏炎症时，ALT／AST比值升高；肝硬化、肝癌、进行性肌营养不良、皮肌炎时，AST升高的幅度高于ALT。15结果审核以及分析与相关项目的联系15.1由资深专业人员负责检验结果的审核。15.2认真审核每一个测定结果，审核者对发出报告结果的准确性和可靠性负责，并在报告单的审核者处签名。15.3相关项目：审核与肝功能组合中其他项目、胆汁酸的关系，ALT/AST比值是否与疾病一致。如出现与临床不符甚至相悖的情况，应分析与查找原因。16威胁生命的“紧急值”及报告规定：暂无规定。17有关引用程序与文件17.1Abbott自动生化